ГОСТ Р ЕН 12857-2010 Продукты пищевые. Определение цикламата. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

     6 Процедура проведения анализа

6.1 Приготовление раствора пробы для анализа

6.1.1 При анализе жидких продуктов (например, осветленных фруктовых соков, фильтрованного огуречного рассола) пробу фильтруют, после чего разбавляют водой таким образом, чтобы ожидаемая массовая концентрация цикламата в растворе составляла около 400 мг/дм, или используют пробу без разбавления. При анализе твердых продуктов, дающих прозрачные водные растворы (например, леденцов), пробу растворяют в воде таким образом, чтобы ожидаемая массовая концентрация цикламата в растворе составляла около 400 мг/дм.

6.1.2 При анализе, например, молочных продуктов, десертов, взбитых сливок, соков с мякотью, джемов, мармеладов, пробу тщательно гомогенизируют в течение не менее 1 мин. Около 15 г гомогенизированной пробы, измеренной с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см. Допускается использовать навеску другой массы, при этом массовая концентрация цикламата в получаемом растворе пробы объемом 100 см не должна превышать 400 мг/дм. В колбу добавляют около 80 см воды и помещают на 10 мин в ультразвуковую баню. Далее добавляют 1-2 см раствора Карреза N 1, содержимое колбы перемешивают, после чего добавляют такой же объем раствора Карреза N 2. Содержимое колбы перемешивают, после чего его объем доводят водой до метки. Полученный раствор фильтруют через складчатый фильтр, отбрасывая первые 10 см фильтрата.

Если масса нерастворимого обезжиренного вещества во взятой на анализ навеске пробы превышает 3 г, необходимо исключить влияние объема образующегося осадка на фактический объем получаемого раствора пробы. Для этого смесь, полученную после добавления к пробе растворов Карреза, центрифугируют при центробежном ускорении не менее 1400 g. Центрифугат количественно фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см. Осадок в пробирке дважды промывают водой, каждый раз центрифугируя полученную смесь. Центрифугаты объединяют в мерной колбе вместимостью 100 см, объем содержимого в колбе доводят водой до метки. Данную процедуру допустимо проводить также в случаях, когда масса нерастворимого вещества в навеске пробы составляет менее 3 г.

Для проведения последующей дериватизации цикламата (см. 6.2) используют порцию полученного раствора объемом 20 см.

6.1.3 Шоколад и родственные ему продукты

Около 15 г пробы, взятой с точностью до 1 мг, помещают в центрифужную пробирку. Пробирку с навеской выдерживают на водяной бане при температуре 60 °С до полного расплавления материала пробы. Далее в пробирку аккуратно и постепенно добавляют 25 см петролейного эфира по 4.3, содержимое пробирки тщательно перемешивают, пробирку укупоривают и помещают в ультразвуковую баню на 30 с, после чего снова тщательно перемешивают. Пробирку с содержимым центрифугируют в течение 10 мин при центробежном ускорении 1400 g.

Далее слой петролейного эфира декантируют и отбрасывают, после чего проводят повторную экстракцию новой порцией петролейного эфира объемом 25 см по той же процедуре, снова декантируя и отбрасывая растворитель. Остаток петролейного эфира в пробирке удаляют упариванием на водяной бане при температуре 60 °С при постоянном перемешивании содержимого пробирки.

Далее в пробирку добавляют 30 см воды, содержимое тщательно перемешивают. Пробирку с содержимым выдерживают в течение 5 мин в ультразвуковой бане, добавляют около 40 см воды, после чего полученную смесь переносят в мерную колбу вместимостью 100 см. В колбу добавляют 1 см раствора Карреза N 1, содержимое колбы перемешивают, после чего добавляют 1 см раствора Карреза N 2. Содержимое колбы тщательно перемешивают. После охлаждения до температуры 20 °С объем содержимого доводят водой до метки. Полученный раствор фильтруют через складчатый фильтр, отбрасывая первые 10 см фильтрата.

Если масса нерастворимого обезжиренного вещества во взятой на анализ навеске пробы превышает 3 г, необходимо исключить влияние объема образующегося осадка на фактический объем получаемого раствора пробы. Для этого смесь, полученную после добавления к пробе растворов Карреза, центрифугируют при центробежном ускорении не менее 1400 g. Центрифугат количественно фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см. Осадок в пробирке дважды промывают водой, каждый раз центрифугируя полученную смесь. Центрифугаты объединяют в мерной колбе вместимостью 100 см, объем содержимого доводят водой до метки. Данную процедуру допустимо проводить также в случаях, когда масса нерастворимого вещества в навеске пробы составляет менее 3 г.

Для проведения последующей дериватизации цикламата (см. 6.2) используют порцию полученного раствора пробы объемом 20 см.

6.1.4 Жировые эмульсии и продукты, их содержащие (например, майонез)

15 г гомогенизированной пробы, взятой с точностью до 1 мг, помещают в центрифужную пробирку, добавляют 2,5 г порошкообразной целлюлозы (4.13), содержимое пробирки тщательно перемешивают. Добавляют 25 см петролейного эфира, содержимое пробирки перемешивают, пробирку укупоривают и центрифугируют при центробежном ускорении не менее 1400 g.

Петролейный эфир декантируют и отбрасывают, после чего проводят повторную экстракцию новой порцией петролейного эфира объемом 25 см по той же процедуре, снова декантируя и отбрасывая растворитель. Остаток петролейного эфира в пробирке удаляют упариванием на водяной бане при температуре 60 °С при постоянном перемешивании содержимого пробирки.

Далее в пробирку добавляют 40 см воды, содержимое тщательно перемешивают. Полученную смесь выдерживают в течение 5 мин в ультразвуковой бане, после чего переносят количественно, используя около 30 см воды, в мерную колбу вместимостью 100 см. В колбу добавляют 1 см раствора Карреза N 1, перемешивают, после чего добавляют 1 см раствора Карреза N 2. Содержимое колбы тщательно перемешивают. После охлаждения до температуры 20 °С объем содержимого доводят водой до метки. Полученный раствор фильтруют через складчатый фильтр, отбрасывая первые 10 см фильтрата.

Если масса нерастворимого обезжиренного вещества во взятой на анализ навеске пробы превышает 3 г, необходимо исключить влияние объема образующегося осадка на фактический объем получаемого раствора пробы. Для этого смесь, полученную после добавления к пробе растворов Карреза, центрифугируют при центробежном ускорении не менее 1400 g. Центрифугат количественно фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см. Осадок в пробирке дважды промывают водой, каждый раз центрифугируя полученную смесь. Центрифугаты объединяют в мерной колбе вместимостью 100 см, объем содержимого доводят водой до метки. Данную процедуру допустимо проводить также в случаях, когда масса нерастворимого вещества в навеске пробы составляет менее 3 г.

Для проведения последующей дериватизации цикламата (см. 6.2) используют порцию полученного раствора пробы объемом 20 см.

6.2 Дериватизация цикламата

Предупреждение! В целях обеспечения безопасности процедуру дериватизации необходимо проводить в вытяжном шкафу в связи с выделением хлора.

Для подготовки раствора пробы или градуировочного раствора к хроматографическому анализу в делительную воронку пипеткой отбирают 20 см раствора пробы, полученного по 6.1.1-6.1.4, или градуировочного раствора по 4.8. В воронку добавляют 1,0 см раствора серной кислоты по 4.7, 10,0 см н-гептана по 4.2 и 2,5 см раствора гипохлорита натрия по 4.6. Воронку интенсивно встряхивают в течение 1 мин, после чего оставляют в покое для расслоения водной и органической фаз. Нижнюю водную фазу отбрасывают. В случае неполного разделения фаз и образования в результате экстракции стойкой нерасслаивающейся эмульсии ее не отбрасывают и в дальнейшем подвергают тем же операциям, что и гептановый экстракт.

Гептановый экстракт промывают в делительной воронке, добавляя к нему порцию раствора карбоната натрия по 4.5 объемом 25 см и интенсивно встряхивая воронку в течение 30 с. После расслоения фаз нижнюю водную фазу отбрасывают. Если водная и органическая фазы расслоились с образованием четкой границы их раздела, гептановый экстракт, полученный после удаления водной фазы, обезвоживают путем добавления порции сульфата натрия по 4.4 массой около 1 г, после чего экстракт фильтруют через складчатый фильтр, фильтрат используют для хроматографического анализа. В случае образования в результате экстракции стойкой эмульсии для обезвоживания гептанового экстракта используют порцию сульфата натрия массой около 7 г.

Срок годности полученных в результате дериватизации цикламата растворов для хроматографического анализа - 24 ч при температуре 4 °С.

6.3 Идентификация

Пик анализируемого вещества на хроматограмме раствора пробы идентифицируют по совпадению его времени удерживания со временем удерживания пика этого вещества на хроматограмме градуировочного раствора. Идентификацию пика анализируемого вещества можно также проводить путем сравнения хроматограмм раствора пробы с добавлением и без добавления стандартного раствора аналита либо путем сопоставления спектров поглощения пиков аналита на этих хроматограммах в характерном для данного вещества диапазоне длин волн.

Проводят хроматографический анализ раствора пробы и градуировочных растворов, соблюдая одинаковые объемы инжекции. Интервал между последовательными инжекциями градуировочных растворов должен быть не менее 15 мин. При анализе серии проб следует принять меры по исключению вероятности ошибочного принятия за пик аналита пика вещества, элюирующегося с предыдущей инжекции. Это обеспечивается соблюдением достаточно большого интервала (около 30 мин) между последовательными инжекциями растворов проб.

При использовании колонки, указанной в 5.1.2, приемлемое качество хроматографического анализа достигается применением следующих параметров хроматографического анализа:

состав подвижной фазы - в соответствии с 4.11;

скорость потока подвижной фазы - 1,0 см/мин;