МУК 4.2.2661-10 Методы санитарно-паразитологических исследований

4.2. Исследование почвы на яйца гельминтов. Метод Романенко (1996)

     Ход исследования. Из объединенной пробы берут на исследование 4 порции по 25 г почвы, помещают их в центрифужные пробирки объемом 250 мл (в случае отсутствия таковых можно пользоваться пробирками объёмом 80-100 мл, но помещать в них следует не более 15 г почвы) и заливают 3% раствором натриевой или калиевой щелочи (в соотношении 1:1). После этого содержимое пробирок тщательно размешивают, отстаивают в течение 20-30 мин и центрифугируют 5 мин при 800 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а почву промывают водой (1-5 раз в зависимости от типа почвы: для песчаных и супесчаных - достаточно одной промывки, для глинистых, суглинистых, черноземных - от 2 до 5) до получения прозрачной надосадочной жидкости. После добавления очередной порции промывочной воды осадок на дне центрифужной пробирки тщательно перемешивают при каждом промывании. После промывки к почве добавляют насыщенный (плотность 1,38-1,40) раствор нитрата натрия. Объём насыщенного раствора зависит от величины стакана (пробирки): в 250 мл стаканы добавляют по 150 мл насыщенного раствора, в более мелкие пробирки, например, объёмом 80-100 мл соответственно 45-50 мл насыщенного раствора. Почву тщательно размешивают, полученную смесь центрифугируют. Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же насыщенным раствором соли до уровня на 2-3 мм ниже краев пробирок и накрывают предметными стеклами. Яйца гельминтов всплывают и концентрируются в поверхностной пленке насыщенного раствора. Очень важно исключить какую-либо потерю поверхностной плёнки. Для этого между краем пробирки и предметным стеклом оставляют пространство шириной не более 10 мм, куда с помощью пипетки вносят насыщенный раствор соли до его соприкосновения с нижней стороной стекла, которое осторожно передвигают до полного покрытия центрифужной пробирки. Через 20-25 мин отстаивания стёкла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх, а на их место ставят другие (при необходимости и третьи). На предметные стекла с поверхностной плёнкой наносят 1-2 капли 30% раствора глицерина, накрывают их покровными стеклами, а затем микроскопируют. Для обнаружения яиц гельминтов препарат просматривают при увеличении в 80, а для определения степени их развития или деформации - в 400 раз.

При необходимости, приготовленные препараты можно хранить в холодильнике до 5-7 суток, не допуская подсыхания. При подсыхании препаратов по краям покровных стекол добавляют несколько капель 30% раствора глицерина.

Для оценки результатов число яиц, обнаруженных в 4-х порциях пробы умножают на 10, получая показатель содержания яиц в 1 кг исследуемой почвы.

Эффективность метода колеблется от 59,6=-83,1%, в среднем - 73,0%.