Инструкция по определению бактерицидных свойств новых дезинфицирующих средств

II. Подбор культур микроорганизмов для определения бактерицидной активности новых дезинфицирующих средств

1. Микроорганизмы, используемые в качестве тест-культур и требования, предъявляемые к ним

4. Для определения бактерицидной активности нового дезинфицирующего средства используют следующие виды микроорганизмов:

а) кишечную палочку В. Coli, как наиболее устойчивый вид из кишечной группы бактерий;

б) золотистый стафилококк Staph. aureus, наиболее устойчивый вид из кокковой группы микробов;

в) антракоид Вас. anthracoides в споровой форме.

5. При выборе штаммов культур обращает внимание на наличие у них типичных морфологических, биохимических и культуральных свойств, а также на их устойчивость к действию фенола и хлорамина; споровую культуру антракоида проверяют на устойчивость к пару и хлорамину.

6. Рабочие штаммы должны иметь следующую устойчивость:

Устойчивость рабочих штаммов проверяют не реже 1 раза в месяц.

7. Музейные культуры хранят при Т°+4 °С в виде сухой культуры в ампулах (после лиофильной сушки) не более 2-х лет; в виде посевов на мясопептонном агаре (посев уколом) под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5-3 мм) не более 6 месяцев.

8. При отсутствии резистентных культур их выделяют из внешней среды. Для выделения кишечной палочки готовят …..* взвеси путем смешивания 2-3 образцов фекалий с водопроводной водой (соотношение фекалий и воды 1:2). Затем …..* смешивают с 40 мл фенола, разведенного 1:90 и через 5-минутные интервалы делают посев (по 2 петли взвеси на поверхность среды Эндо). Через сутки типичные колонии кишечной палочки пересевают на поверхность МПА. Культуру, выросшую на МПА, идентифицируют по морфологическим, биохимическим и культуральным свойствам, затем проверяют ее устойчивость к фенолу и хлорамину.

________________

* Брак оригинала. - Примечание изготовителя базы данных.

Выделение штаммов золотистого стафилококка производят по такой же методике, только посев производят на МПА и материалом для выделения золотистого стафилококка служит смесь из 2-3 проб гнойного отделяемого ран, смешанных с фенолом в разведении 1:70.

I.* Приготовление бактериальной или споровой взвеси и батистовых тест-объектов

________________

* Нумерация соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

9. Суточную культуру рабочего штамма кишечной палочки или золотистого стафилококка засевают на поверхность мясопептонного агара и выращивают в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 часов.

10. Для получения споровой формы бактерий суточную бульонную культуру антракоида засевают на косой агар в пробирках (рецепт среды смотри в приложении 1). Пробирки в течение 48 часов (2 суток) держат в термостате при 37°, а затем 5-7 дней при комнатной температуре 10-18 °С, в темноте. По истечении указанных сроков культуру проверяют на спорообразование под микроскопом. Для приготовления мазка культуру забирают петлей с верхнего, среднего и нижнего участка агара; все три пробы растирают вместе на одном предметном стекле, распределяя тонким слоем. Мазок окрашивают фуксином. Под микроскопом рассматривают не менее 10 полей зрения; количество спор в поле зрения должно быть не менее 90%.

11. Для приготовления бактериальной взвеси культуру смывают стерильной водопроводной водой. Полученную взвесь микробов фильтруют через стерильный ватно-марлевый фильтр и разводят до концентрации, соответствующей по мутности бактериальному стандарту 2 миллиарда микробных тел в 1 мл.

Культуру антракоида снимают с агара и растирают о стенки пробирки со стерильной водопроводной водой.

12. При приготовлении батистовых тест-объектов кусок батиста погружают на 24 часа в холодную водопроводную воду для удаления аплитуры. Затем его тщательно стирают с мылом, кипятят, сушат и гладят горячим утюгом. С помощью иглы в приготовленном куске ткани выдергивают нитки в продольном направлении на расстоянии 11 мм друг от друга, а в поперечном - на расстоянии 6 мм. По этим линиям батист разрезают ножницами на тест-объекты и по 50 штук раскладывают в чашки Петри, последние завертывают в бумагу и стерилизуют в автоклаве 30 минут при 126° (0,5 ати).

13. Для заражения стерильные батистовые тест-объекты (в количестве 50-100 штук) в чашке Петри заливают 10-20 мл бактериальной или споровой взвесью, равномерно смачивая все тест-объекты. Чашку Петри закрывают крышкой и оставляют тесты в бактериальной или споровой взвеси в течение 20 минут. Затем в асептических условиях батистовые тест-объекты, пропитанные культурой, переносят на поверхность стерильной фильтровальной бумаги (2 слоя на дне чашки Петри), покрывают их сверху стерильной бумагой и закрывают чашку Петри крышкой. Через 10 минут после удаления избытка жидкости для фиксации микроорганизмов на батистовых тест-объектах, последние переносят на поверхность сухой стерильной фильтровальной бумаги в чашке Петри и сверху прикрывают стерильным листом фильтровальной бумаги, подсушивают в термостате при 37 °С в течение 20 минут с приоткрытыми крышками.

14. Хранят зараженные тест-объекты в чашках-Петри в рефрижераторе при температуре +4 °С.

Срок хранения тест-объектов, зараженных культурой кишечной палочки, 1 сутки, культурой золотистого стафилококка - 4 суток, спорами антракоида - 7 суток.