ГОСТ Р 53974-2010 Ферментные препараты для пищевой промышленности. Метод определения протеолитической активности (с Изменением N 1)

     4 Метод определения протеолитической активности в кислой и слабокислой, нейтральной и щелочной зонах рН*

_____________

* Измененная редакция, Изм. N 1.

Определение протеолитической активности в ферментных препаратах - источниках кислых, слабокислых, нейтральных и щелочных протеаз осуществляют путем гидролиза животного белка гемоглобина в различных зонах рН:

- для кислых протеаз - рН 3,0;

- для слабокислых протеаз - рН 5,3;

- для нейтральных протеаз - рН 7,0;

- для щелочных протеаз - рН 9,0.

4.1 Характеристика метода*

_____________

* Измененная редакция, Изм. N 1.

4.1.1 Метод определения протеолитической активности основаны на гидролизе гемоглобина - животного белка в кислой (рН 3,0), слабокислой (рН 5,3), нейтральной (рН 7,0) и щелочной (рН 9,0) зонах исследуемым ферментным препаратом, находящимся в растворе, до низкомолекулярных пептидов и свободных аминокислот с последующей инактивацией фермента путем осаждения непрогидролизованного белка трихлоруксусной кислотой (ТХУ) и определением образовавших пептидов и свободных аминокислот.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.1.2 За единицу общей протеолитической активности (ПС) принимают такое количество фермента, которое за 1 мин при 30 °С приводит гемоглобин в неосаждаемое состояние ТХУ в количестве, соответствующем 1 мкмолю тирозина (1 мкмоль тирозина равен 0,181 мг); активность выражается в ед.ПС/г или ед.ПС/см испытуемого препарата.

4.1.3 Количество белка, превращенного в низкомолекулярные пептиды и аминокислоты, определяют по реакции свободных аминокислот с реактивом Фолина и дальнейшим определением оптической плотности образующихся голубых растворов на фотоэлектроколориметре при длине световой волны =670 нм.

Определение протеолитической активности кислых протеаз осуществляют при рН реакционной смеси 3,0±0,2, слабокислых протеаз - при рН 5,3±0,2, нейтральных протеаз - при рН 7,0±0,2, щелочных протеаз - при рН 9,0±0,2 и рассчитывают по градуировочному графику, построенному для тирозина.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы, материалы

4.2.1 Для определения протеолитической активности используют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, посуду, реактивы, материалы:

- весы неавтоматического действия по ГОСТ Р 53228, с пределами абсолютной допускаемой погрешности ±0,5 мг;

- фотоэлектроколориметр (КФК-3) или спектрофотометр (СФ) любого типа, которые обеспечивают измерение оптической плотности анализируемых растворов при длине световой волны =670 и 275 нм, соответственно с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1%;

- рН-метр любого типа для измерения в диапазоне от 0 до 14 рН с пределом допускаемой погрешности в эксплуатации ±0,1 единицы рН;

- холодильник бытовой;

- магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин;

- ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры ±1 °С;

- лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее 7000 мин;

- водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100±1) °С;

- секундомер с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью ±1,5 с;

- пипетки автоматические вместимостью от 0,1 до 1,0 см, 1,0 см и от 0,2 до 5,0 см с наконечниками;

- встряхиватель V-3 типа Вортекс или аналогичный для перемешивания жидкости;