МУ 4.2.2723-10 Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды

     11.1. Определение ферментативных свойств выделенных микроорганизмов

Если культуры не ферментируют лактозу, не расщепляют мочевину, но ферментируют глюкозу и образуют сероводород, то они подозрительны на принадлежность к роду сальмонелла и подвергаются дальнейшему изучению.

О ферментации лактозы (и сахарозы) в среде Олькеницкого и ферментации лактозы в среде Клиглера и Ресселя судят по появлению желтой окраски в скошенной части агара, а о ферментации глюкозы - по такому же окрашиванию в столбике. Газообразование устанавливают по наличию пузырьков газа и разрыву агара, а образование сероводорода - по почернению среды. В среде Олькеницкого при росте культуры, гидролизирующей мочевину, среда приобретет диффузный яркий красно-малиновый цвет.

В случае если в результате прямого посева испражнений не выросло ни одной колонии или выросли единичные колонии, необходимо произвести повторный высев, увеличив порцию засеваемого материала. При повторном отсутствии роста следует получить материал для исследования еще раз.

У подозрительных культур изучают их ферментативные характеристики, позволяющие определить родовую принадлежность выделенных бактерий. Для этих целей используют тесты, позволяющие определить способность к образованию индола, наличие роста на средах с цитратами, разложение салицина и малоната натрия, наличие лизиндекарбоксилазы, фенилаланиндезаминазы, способность к разложению мочевины, образованию ацетил-метил-карбинола в реакции Фогес-Проскауэра. Ставится также проба с метиловым красным и определяется подвижность.

Сальмонеллы индола не образуют, способны расти на средах с цитратами, декарбоксилировать лизин (за исключением некоторых штаммов S.Typhimurium, S.Enteritidis), не имеют фенилаланиндезаминазы, не разлагают мочевину, отрицательны в реакции Фогес-Проскауэра, положительны в пробе с метил-рот, подвижны (за исключением S.Gallinarum). Подавляющее большинство сальмонелл не ферментируют салицин.

Для определения родовой принадлежности культур можно использовать системы для идентификации энтеробактерий, в т.ч. пластины биохимические, дифференцирующие энтеробактерий (ПБДЭ), Api20Е, Бак трак, Vidas, mini-Vidas и другие приборы, прошедшие соответствующие испытания и рекомендованные к применению в лабораториях системы Роспотребнадзора РФ.

При необходимости получения срочного, предварительного ответа, определяется антигенная структура выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле с О и Н-агглютинирующими диагностическими сальмонеллезными сыворотками.

Серотипирование штаммов сальмонелл включает в себя выявление соматического антигена (О-антигены сальмонелл), являющегося липополисахаридом (ЛПС), и жгутиковых антигенов (Н-антигены), представленных термолабильными белками. Большинство сероваров сальмонелл имеют Н-антигены двух фаз. Такие сальмонеллы называются двуфазными (например - S. Typhimurium. Антигенная формула - О: 1, 4, 5, 12; H:i; 1.2). Известны монофазные (например - S.Enteritidis, антигенная формула - О:1, 9, 12; Н:gm). Неподвижные (бесфазные) - S. Gallinarum.

Определение сероваров основано на антигенной комбинации отдельных О- и Н-антигенов.