ГОСТ Р ИСО 13366-1-2010

Группа Н19

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО

ПОДСЧЕТ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК

Часть 1

Метод с применением микроскопа
(Контрольный метод)

Milk. Enumeration of somatic cells. Part 1. Microscopic method (Reference method)

ОКС 67.100.10

ОКСТУ 9209

Дата введения 2012-01-01

     
Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 686-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 13366-1:2008* "Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 1. Метод с применением микроскопа (Контрольный метод)" [ISO 13366-1:2008 "Milk - Enumeration of somatic cells - Part 1: Microscopic method (Reference method)"].

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

В настоящем стандарте исключен пункт "Протокол испытания" в связи с различиями форм записи результатов испытаний в различных лабораториях

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета соматических клеток с применением микроскопа в сыром и химически консервированном молоке.

Стандарт допускается применять для подготовки стандартных проб при калибровке механизированных и автоматизированных способов подсчета клеток.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Использование настоящего стандарта может быть сопряжено с применением опасных материалов, операций и оборудования. Настоящий стандарт не имеет целью решение всех вопросов безопасности, обусловленных его применением. На пользователя настоящего стандарта возлагается вся ответственность по установлению надлежащих правил безопасности и охраны здоровья и определения применимости регулятивных ограничений, разработанных до использования.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 соматические клетки (somatic cells): Клетки с ядрами, то есть все лейкоциты и эпителиальные клетки, определяемые в соответствии с процедурой, приведенной в настоящем стандарте.

     3 Сущность метода*

_________________

* Наименование раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Анализируемую пробу молока распределяют на предметном стекле и получают мазок, который высушивают. После высушивания мазок окрашивают. Далее окрашенные клетки подсчитывают с использованием микроскопа. Количество подсчитанных клеток на четко установленной площади умножают на рабочий коэффициент с целью определения количества клеток на миллилитр.

     4 Реактивы

Используют только реактивы признанной аналитической чистоты, если нет других указаний, и дистиллированную или деминерализованную воду или воду аналогичной чистоты.

4.1 Растворы красителей

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Тетрахлорэтан является ядовитым веществом. Бромистый этидий является мутагенным веществом. В случае проливания следует предпринять надлежащие действия по обезвреживанию. Подготовка и применение растворов красителей должны осуществляться под вытяжным шкафом с использованием защитного оборудования.

4.1.1 Модифицированный окрашивающий раствор

4.1.1.1 Состав

4.1.1.2 Приготовление модифицированного окрашивающего раствора

Смешивают этанол и тетрахлорэтан и закрывают сосуд. Смесь нагревают на водяной бане (5.1) при температуре 65 °С. Добавляют метиленовый синий под вытяжным шкафом и тщательно перемешивают. Смесь охлаждают до температуры 4 °С.

Затем добавляют безводную уксусную кислоту и вновь тщательно перемешивают. Полученный раствор фильтруют через фильтр (5.2) и помещают в герметичный сосуд на хранение.

Перед использованием окрашивающий раствор снова фильтруют.

4.1.2 Окрашивающий раствор бромистого этидия

4.1.2.1 Основной окрашивающий раствор

4.1.2.1.1 Состав

4.1.2.1.2 Приготовление основного окрашивающего раствора

Бромистый этидий растворяют в деминерализованной воде, предварительно нагретой до 40 °С. Раствор охлаждают до комнатной температуры. Доводят объем до 100 см деминерализованной водой.

Основной окрашивающий раствор бромистого этидия хранят в темном месте при температуре (2±2) °С не более 2 мес.

4.1.2.2 Буферный раствор

4.1.2.2.1 Состав

4.1.2.2.2 Приготовление буферного раствора

Растворяют по отдельности калия гидрофталат и калия гидроксид в деминерализованной воде.

Буферный раствор хранят в темном месте при температуре (2±2) °С не более 2 мес.

4.1.2.3 Рабочий окрашивающий раствор бромистого этидия

4.1.2.3.1 Компоненты

4.1.2.3.2 Приготовление рабочего окрашивающего раствора бромистого этидия

Последовательно добавляют основной окрашивающий раствор бромистого этидия, буферный раствор и Тритон Х-100 к деминерализованной воде и тщательно перемешивают.

Свежий рабочий окрашивающий раствор бромистого этидия готовят непосредственно перед использованием.

4.2 Фосфатный буферный раствор (PBS)

4.2.1 Компоненты

4.2.2 Приготовление фосфатного буферного раствора (PBS)

Соли растворяют в деминерализованной воде. Доводят объем до 1000 см оставшимся количеством деминерализованной воды.

Устанавливают рН на уровне 7,2±0,1.

Примечание - Допускается использовать готовый фосфатный буферный раствор с рН=7,2.

     5 Аппаратура и материалы*