ГОСТ Р 54065-2010 Средства лекарственные для ветеринарного применения пробиотические. Методы определения пробиотических микроорганизмов

     10 Методы определения пробиотических микроорганизмов

10.1 Метод определения бактерий рода Bifidobacterium

Для выявления бактерий рода Bifidobacterium в исследуемом препарате необходимое разведение препарата, подготовленное согласно разделу 4, высевают методом глубинного посева в полужидкие питательные среды в соответствии с 8.3 или методом глубинного посева в плотные питательные среды в соответствии с 8.2. Посевы инкубируют не более трех суток при температуре (37±1) °С.

Подсчет колоний проводят через 24-48 ч. После инкубирования посевов их просматривают и отмечают рост колоний, характерных для бактерий рода Bifidobacterium, затем проводят подсчет выросших колоний.

Для подсчета колоний отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний.

Из выросших колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму по 9.1 и определяют наличие каталазы по 9.2.

Результаты оценивают визуально по каждой пробе отдельно.

Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств при определении бактерий рода Bifidobacterium обнаружены грамположительные мелкозернистые слегка изогнутые с бифуркацией на концах или без нее, расположенные одиночно, группами, иногда цепочками, палисадом, не образующие спор и капсул, каталазоотрицательные палочки, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к роду Bifidobacterium.

10.2 Метод определения бактерий рода Lactobacillus

Для выявления бактерий рода Lactobacillus в исследуемом препарате необходимое разведение препарата, подготовленное согласно разделу 4, высевают на поверхность предварительно подсушенной агаризованной питательной среды, приготовленной по разделу 7 методом глубинного посева, изложенным в 8.1.4, в агаризованные питательные среды, указанные в 6.2. Посевы инкубируют не более трех суток при температуре (37±1) °С. После инкубирования посевы просматривают и отмечают рост колоний, характерных для бактерий рода Lactobacillus.

Подсчет колоний проводят через 48-72 ч. Для подсчета колоний отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний.

Из выросших колоний готовят препараты, окрашивают по Граму по 9.1, наличие каталазы определяют по 9.2.

Результаты оценивают визуально по каждой пробе отдельно.

Если при изучении культуралыных, морфологических и биохимических свойств при определении бактерий рода Lactobacillus обнаружены неспорообразующие, грамположительные, неподвижные, каталазоотрицательные палочки, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к роду Lactobacillus.

10.3 Метод определения молочнокислых стрептококков Streptococcus diacetilactis и Streptococcus thermophilus

Для выявления молочнокислых стрептококков Streptococcus diacetilactis, Streptococcus thermophilus необходимое разведение препарата, подготовленное согласно разделу 4, высевают глубинным методом по 8.2 в одну из агаризованных сред, указанных в 6.8.

Засеянные чашки после застывания агара переворачивают и помещают в термостат. Посевы для определения Streptococcus diacetilactis инкубируют при температуре (37±1) °С не более трех суток, для определения Streptococcus thermophilus посевы инкубируют (48±3) ч при температуре (45±1) °С. После инкубирования посевы просматривают и отмечают рост колоний, характерных для молочнокислых стрептококков, затем проводят подсчет выросших колоний. Для подсчета колоний отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний.

Из выросших колоний готовят препараты, окрашивают по Граму по 9.1, наличие каталазы определяют по 9.2.

Результаты оценивают визуально по каждой пробе отдельно.

Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств при определении молочнокислых стрептококков Streptococcus diacetilactis и Streptococcus thermophilus обнаружены неспорообразующие, грамположительные, неподвижные, каталазоотрицательные, не дающие роста в питательных средах с рН 9,6 и 6,5% NaCI кокки, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к роду Streptococcus.

10.4 Метод определения бактерий рода Propionibacterium

Для выявления бактерий рода Propionibacterium в исследуемом препарате необходимое разведение, приготовленное согласно разделу 4, высевают глубинным методом на одну из питательных сред, указанных в 6.5.

Посевы для определения бактерий рода Propionibacterium инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч, подсчет колоний проводят через 24-27 ч.

Для подсчета колоний отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний.

После инкубирования посевы просматривают и отмечают рост колоний, характерных для бактерий рода Propionibacterium. Характеристика колоний приведена в приложении А.

Из выросших колоний готовят препараты, окрашивают по Граму по 9.1.

Результаты оценивают визуально по каждой пробе отдельно.

Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств при определении бактерий рода Propionibacterium обнаружены неспорообразующие, грамположительные, неподвижные палочки, располагающиеся поодиночке, парами, в виде букв V или Y, короткими цепочками или группами в виде "китайских иероглифов", то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к роду Propionibacterium.

10.5 Метод определения бактерий рода Pediococcus