ГОСТ Р ЕН 12856-2010 Продукты пищевые. Определение ацесульфама калия, аспартама и сахарина. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

     4 Реактивы

Для проведения испытания при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы установленной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по ЕН ИСО 3696. Стандартные растворы готовят с учетом массовой доли аналита в стандартном веществе.

4.1 Ацетонитрил для ВЭЖХ.

4.2 Метанол для ВЭЖХ.

4.3 Калий фосфорнокислый однозамещенный (KНРО).

4.4 Калий фосфорнокислый двухзамещенный (KНРО).

4.5 Кислота фосфорная плотностью 1,71 г/см, массовой долей 85%.

4.6 Кислота фосфорная, раствор массовой долей 5%

6 см фосфорной кислоты по 4.5 вносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 100 см, в которую предварительно помещено 80 см воды. Объем содержимого в колбе доводят до метки водой.

4.7 Раствор Карреза N 1

15 г железистосинеродистого калия (K[FeCN]·3НО) растворяют в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см.

4.8 Раствор Карреза N 2

30 г сернокислого цинка (ZnSO±7НО) растворяют в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см.

4.9 Раствор буферный фосфатный I молярной концентрации (KНРО)=0,02 моль/дм и рН=4,3

2,72 г однозамещенного фосфата калия по 4.3 помещают в стакан подходящей вместимости и растворяют в 800 см воды. К полученному раствору по каплям добавляют фосфорную кислоту по 4.6 до достижения значения рН 4,3. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см, объем содержимого в колбе доводят водой до метки.

4.10 Раствор буферный фосфатный II молярной концентрации (KНРО)=0,0125 моль/см и рН=3,5

1,70 г однозамещенного фосфата калия по 4.3 помещают в стакан подходящей вместимости и растворяют в 800 см воды. К полученному раствору по каплям добавляют фосфорную кислоту по 4.6 до достижения значения рН раствора 3,5. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см, объем содержимого в колбе доводят водой до метки.

4.11 Подвижная фаза для ВЭЖХ (смешанный раствор ацетонитрила и фосфатного буферного раствора)

Смешивают точно отмеренные объемы выбранного для приготовления подвижной фазы фосфатного буферного раствора и ацетонитрила в соотношении, приведенном в приложении А (А.5). Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с подходящим размером диаметра пор (например, 0,45 мкм), после чего раствор дегазируют любым приемлемым способом, например с помощью ультразвуковой бани в течение 5 мин. Подвижную фазу готовят в день использования.

4.12 Контрольный раствор (готовится по выбору пользователя настоящего стандарта)

Готовят контрольный раствор, содержащий ацесульфам калия, аспартам, сахарин, 5-бензил-3,6-диоксо-2-пиперазинуксусную кислоту (дикетопиперазин), аспартилфенилаланин, фенилаланин, кофеин, сорбиновую и бензойную кислоты, теобромин, оксиметилфурфурол и ванилин.

Навески ацесульфама калия массой 30 мг, аспартама массой 220 мг, натриевой соли сахарина массой 20 мг, дикетопиперазина массой 10 мг, аспартилфенилаланина и фенилаланина массой 10 мг, кофеина массой 60 мг, сорбиновой и бензойной кислот массой 100 мг, теобромина массой 70 мг, оксиметилфурфурола массой 20 мг и ванилина массой 100 мг, взятые с точностью до 0,1 мг, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см. Объем содержимого в колбе доводят водой до метки.

20 см полученного раствора пипеткой переносят в другую мерную колбу вместимостью 100 см, объем раствора в колбе доводят водой до метки.

4.13 Основной стандартный раствор

Навески ацесульфама калия, аспартама и натриевой соли сахарина массами по 100 мг, взвешенные с точностью до 0,1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см. В колбу добавляют некоторое количество воды для растворения ее содержимого, после чего объем раствора в колбе доводят водой до метки. Массовая концентрация каждого подсластителя в полученном растворе составляет 1 г/дм.

4.14 Градуировочные растворы (указанный диапазон массовых концентраций носит рекомендательный характер)
     

    4.14.1 Градуировочный раствор I

10 см основного стандартного раствора по 4.13 пипеткой переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, объем раствора в колбе доводят водой до метки. Массовая концентрация каждого подсластителя в полученном растворе составляет 100 мг/дм.

4.14.2 Градуировочный раствор II