Унифицированная методика определения остаточных количеств фосфорорганических пестицидов

6. Ход анализа

6.1. Экстракция

Вода. 1 л анализируемой пробы помещают в делительную воронку емкостью 1500-2000 мл, подкисляют 0,1 н раствором НСl (5-10 мл) до рН 4-5, хорошо перемешивают, добавляют 50 мл 10%-ного раствора хлористого натрия, экстрагируют из водной фазы хлороформом* (хлористым метиленом) трижды, порциями по 100, 50, 50 мл. Экстракт объединяют, сушат над безводным NaSО, фильтруют небольшими порциями в грушевидную колбу ротационного вакуумного испарителя емкостью 50 мл. Порциями отгоняют растворитель с помощью ротационного испарителя до объема 0,5-1 мл. Оставшийся растворитель отгоняют досуха на воздухе при комнатной температуре. К сухому остатку пипеткой добавляют 1 мл ацетона, колбу закрывают пробкой, тщательно смывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2-5 мкл полученного раствора. После определения ФОП методом ГЖХ с ТИД или ПФД в пробирку помещают наплавленный сверху стеклянный капилляр и удаляют растворитель при помощи слабого нагревания на водяной бане с температурой 40 °С до объема меньше 0,2-0,3 мл. Остаток количественно, с помощью того же стеклянного капилляра, но с отломанным заплавленным концом, переносят на хроматографическую пластинку.

________________

* Растворители перед экстракцией предварительно встряхивают в течение 2-3 мин с дистиллированной водой, затем воду отбрасывают.

Для извлечения некоторых ФОП (бромофос, пиразофос, паратионметил, малатион, тетрахлорвинфос, фентоат) в качестве экстрагента может быть также рекомендован н-гексан. В этом случае из подготовленной, как описано выше, пробы воды (рН 4-5) указанные пестициды экстрагируют н-гексаном трижды порциями по 100 мл и далее поступают с н-гексановыми экстрактами, как описано выше для хлороформных экстрактов.

Концентрирование ФОП из воды можно производить на сополимере стирола с дивинилбензолом

20 г сополимера стирола с 2% дивинилбензола (размер гранул 0,5-1,0 мм), предварительно отмытого бензолом помещают в делительную воронку, куда наливают бензол (100 мл). После набухания сополимера в органическом растворителе (1,5-2 часа) набухший сополимер переносят с водой в стеклянную колонку (высота 40 см, диаметр 2 см). Высота слоя сополимера в колонке 21 см, количество бензола, связанного сополимером, 72-75 мл. Через эту колонку пропускают 10 л воды, содержащей фосфорорганические пестициды, со скоростью 80-100 мл/мин. Оставшуюся воду отсасывают водоструйным насосом, колонку на 30-60 мин заливают бензолом, а затем элюируют бензолом поглощенные вещества со скоростью 2 мл/мин. Собирают 100 мл элюата, упаривают растворитель и проводят определение с помощью газожидкостной или тонкослойной хроматографии.

Почва. 10-25 г пробы помещают в коническую колбу, заливают 50 мл метанола или смеси ацетон - 0,05 н водный раствор СаСl, (1:1), время экстракции 30 мин при периодическом встряхивании. Экстракцию повторяют трижды. Экстракт фильтруют (или центрифугируют).

Метанольный раствор разбавляют 150 мл воды и ФОП экстрагируют хлороформом* (30 мл х3).

________________

* Растворители перед экстракцией насыщают водой как указано выше.

Из водно-ацетонового экстракта ФОП извлекают хлороформом* (хлористым метиленом) трижды по 10 мл, объединяют хлороформный экстракт, сушат и упаривают как описано выше при определении в воде. При необходимости экстракты чистят сублимацией в вакууме, на колонках с адсорбентами (см. ниже).

________________

* Растворители перед экстракцией насыщают водой как указано выше.

Растительный материал, не содержащий воска. 25-50 г пробы экстрагируют смесью ацетона и воды (1:1) или ацетонитрилом трижды по 50 мл, время каждой экстракции 15 мин при механическом встряхивании. Объединенный экстракт переносят в делительную воронку и прибавляют 250-300 мл дистиллированной воды.

Из водно-ацетонового раствора экстрагируют пестициды хлористым метиленом* (хлороформом) трижды по 50 мл. Экстракт, содержащий пестициды, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют, как описано выше при определении в воде, до объема 0,2-0,3 мл (досуха на воздухе) и анализируют методами ГЖХ или ТСХ. При необходимости экстракт очищают микросублимацией в вакууме, на колонке с углем или перераспределением в системе н-гексан-ацетонитрил как описано ниже.

________________

* Растворители перед экстракцией насыщают водой как указано выше.

Сушеные фрукты с высоким содержанием сахара (например: финики, фиги, изюм, сушеные сливы)

Взвешивают 20 г исследуемой пробы, заливают 50 мл дистиллированной воды и оставляют на 2 часа. Пробу измельчают гомогенизатором при высоких оборотах, а затем после прибавления 150 мл ацетона гомогенизируют еще 2-3 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера. Промывают ножи гомогенизатора, посуду и осадок на фильтре 20-30 мл ацетона. Фильтрат переносят в делительную воронку емкостью 1000 мл и добавляют в него 450 мл дистиллированной воды, содержащей 0-4% сернокислого натрия. Количество соли зависит от образующейся эмульсии (например, к экстракту бананов нужно 0%, клубники 2%, яблок 4% раствор сернокислого натрия). Из этой смеси экстрагируют трижды дихлорметаном порциями по 100, 50, 50 мл. Нижнюю органическую фазу фильтруют через 30 г безводного NaSO, промывают сульфат натрия 30 мл дихлорметана. Объединенный экстракт упаривают до 3-5 мл на ротационном испарителе.

Добавляют в колбу 10 мл ацетона и испаряют до 2-3 мл. Эту операцию повторяют еще два раза, сконцентрированный остаток количественно переносят в мерную пробирку и доводят объем до 5 мл ацетоном. Полное удаление дихлорметана необходимо, так как его присутствие мешает дальнейшему ГЖХ определению.

Из 5 мл раствора отбирают пипеткой 1 мл для газовой хроматографии. Оставшиеся 4 мл экстракта упаривают до 1 мл и используют для TCX. Прибавляют 1 мл бензола к ацетоновому раствору и испаряют до 0,5-0,8 мл, затем доводят бензолом до 4 мл. Вычисляют полное количество экстракта, используемого для ТСХ, и этим количеством ( мкл) корректируют количество пробы, соответствующее бензольному раствору. Бензольный раствор используется для очистки колоночной хроматографией либо на смешанном сорбенте, либо на оксиде алюминия, либо на силикагеле как описано ниже.

Сухие материалы с низким содержанием масла и жира (например: хлебные культуры, кукуруза, мука, сухие корма, чай)

Взвешивают 50 г измельченной в порошок исследуемой пробы, прибавляют 200 мл дихлорметана, закрывают и встряхивают в течение 30 минут. Декантируют растворитель и повторяют экстракцию 30 мл дихлорметана. Фильтруют пробу через воронку Бюхнера и промывают посуду и фильтр 20 мл дихлорметана. Фильтрат переносят в 1000 мл делительную воронку и промывают смесью вода-ацетон (5:2) трижды по 50 мл. Сушат дихлорметановую фазу над безводным сульфанатрия и в дальнейшем поступают как описано для сухофруктов.

Очистка в системе ацетонитрил-гексан

Сухой остаток растворяют в 10 мл н-гексана, раствор переносят в делительную воронку и встряхивают с 10 мл ацетонитрила, насыщенного гексаном, в течение 2 мин. После разделения фаз отделяют ацетонитрильный слой. Гексановый слой экстрагируют еще два раза ацетонитрилом, порциями 5-10 мл. Объединенную ацетонитрильную фазу промывают без встряхивания 5 мл гексана, гексановый слой отбрасывают. К ацетонитрилу прибавляют 2%-ный раствор сернокислого натрия, чтобы содержание ацетонитрила составляло не более 20% (200-250 мл раствора сернокислого натрия). ФОП экстрагируют из водно-ацетонитрильного раствора гексаном трижды, порциями по 30 мл.

Гексановый слой сушат над безводным NaSO, отгоняют растворитель досуха. Сухой остаток растворяют в 2-5 мл гексана и аликвотную часть хроматографируют. При наличии большого количества пигментов, мешающих дальнейшему определению, рекомендуется проводить дополнительную очистку на колонке с активированным углем, как описано ниже.