5.1 Общие положения
В лабораторной практике применяют ИСО 7218, ИСО/ТУ 11133-1 и ИСО/ТУ 11133-2.
5.2 Разведение - по ИСО 6887 (все части), ИСО 8261 и любому конкретному стандарту, распространяющемуся на исследуемую продукцию.
5.3 Жидкая селективная обогащенная среда: триптон-соевый полимиксиновый бульон (TSPB) по [1].
5.3.1 Основа среды
5.3.1.1 Состав
Наименование компонента | а) Среда двойной концентрации | b) Среда единичной концентрации |
Ферментативный продукт переваривания казеина, г | 34,0 | 17,0 |
Ферментативный продукт переваривания сои, г | 6,0 | 3,0 |
Хлорид натрия (NaCI), г | 10,0 | 5,0 |
Глюкоза, г | 5,0 | 2,5 |
Фосфорнокислый калий двузамещенный (KHPO), г | 5,0 | 2,5 |
Вода, см | 1000 | 1000 |
5.3.1.2 Приготовление
Ингредиенты или готовую базовую среду растворяют в колбе вместимостью 1 дм воды, нагревают на слабом огне до кипения и кипятят 2-3 мин при постоянном перемешивании. При необходимости корректируют рН так, чтобы после стерилизации он был равен 7,3±0,2 при температуре 25 °С.
Среды распределяют в объеме по 10 см [среда двойной концентрации (5.3.1.1 а)] и по 9 см [среда единичной концентрации (5.3.1.1 b)] в пробирки размером 16х160 мм (6.7).
Стерилизуют в автоклаве (6.1) при температуре 121 °С в течение 15 мин.
5.3.2 Раствор полимиксина В сульфата
5.3.2.1 Состав
Полимиксина В сульфат, ЕД (или г) | 500000 (или 0,05) |
Вода, см | 50 |
5.3.2.2 Приготовление
Полимиксина В сульфат растворяют в воде. Стерилизуют путем фильтрации.
5.3.3 Полная среда
Непосредственно перед использованием добавляют 200 мкл (для среды двойной концентрации) или 100 мкл (для среды единичной концентрации) раствора полимиксина В сульфата (5.3.2) в каждую пробирку, содержащую базовую среду (5.3.1).
5.3.4 Проверка эксплуатационных характеристик с целью гарантии качества питательной среды
Определение селективности и продуктивности - по ИСО/ТУ 11133-1. Тестирование эффективности питательного триптон-соевого полимиксинового бульона (TSPB) проводится по ИСО/ТУ 11133-2 и в соответствии с таблицей 1.
Таблица 1 - Результаты проверки эксплуатационных характеристик триптон-соевого полимиксинового бульона (TSPB)
Функция | Инкубация | Контрольные штаммы | Метод контроля | Критерии | Характерные реакции |
Производи- тельность | 48 ч при 30 °С | В. cereus АТСС 11778 или тот же штамм, зарегистрированный в других коллекциях | Полуколи- | 10 КОЕ на РЕМВА или MYP | Характерные колонии на РЕМВА или MYP (см. 5.4.5 или 5.5.6) |
Функция | Инкубация | Контрольные штаммы | Метод контроля | Критерии | Характерные реакции |
Селектив- ность | 48 ч при 30 °С | Е. coli АТСС 25922 или 8739 или тот же штамм, зарегистрированный в других коллекциях | Полуколи- | Полное ингибирование | - |