МУ 3.5.2596-10 Методы изучения и оценки туберкулоцидной активности дезинфицирующих средств

4. Обеспечение стандартности условий проведения исследований туберкулоцидной активности дезинфицирующих средств и их субстанций

Для обеспечения стандартности условий постановки экспериментов необходимо провести химико-аналитический контроль исследуемых ДС и их субстанций. До проведения исследования туберкулоцидной активности ДС и их субстанций необходимо ознакомиться с рецептурой средства и техническими условиями на отечественные или спецификацией на зарубежные средства, провести химико-аналитические исследования по определению концентрации действующих веществ в средствах и определить соответствие рецептуры и других показателей, регламентированным вышеуказанными документами. При этом используют химико-аналитические методы контроля и применяют условия хранения и меры безопасности при работе со средством, предложенные производителем.

Так как для дезинфекции при туберкулезе применяют средства, обладающие действием, убивающим микобактерии, а не задерживающим их рост, при определении туберкулоцидной активности и эффективности ДС необходимо разграничить туберкулоцидное действие препарата от туберкулостатического. Для этого применяют нейтрализаторы, исключающие остаточное бактерицидное действие.

Для нейтрализации антимикробного действия дезинфицирующих средств из различных химических групп применяют следующие нейтрализаторы [2]:

для средств из группы окислителей (хлор-, йод-, перекисьсодержащие средства; средства, содержащие надуксусную кислоту, озон) - 0,5-1,0%-е растворы тиосульфата натрия;

для альдегид- и фенолсодержащих средств - универсальный нейтрализатор, содержащий 3% твина-80, 3% сапонина, 0,1% гистидина и 0,1% цистеина;

для катионных поверхностно-активных веществ - 0,1-1,0%-е растворы сульфонола или 0,5-1,0%-е растворы сульфонола с 10% обезжиренным молоком;

для композиционных средств - универсальный нейтрализатор, например, содержащий 3% твина-80, 3% сапонина, 0,1% гистидина и 0,1% цистеина. Универсальным нейтрализатором является также нейтрализующий бульон по Ди-Ингли (фирма-производитель "HIMEDIA"). В его состав входят такие ингредиенты, как гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, глюкоза, натрия тиосульфат, натрия тиогликолят, натрия бисульфит, лецитин, Твин-80 и др.

Растворы нейтрализаторов готовят в асептических условиях, применяя для этого только стерильную дистиллированную воду.

При невозможности соблюдения асептических условий приготовления нейтрализаторов допускается стерилизация готовых растворов автоклавированием при 1,1 атм. (121°С) в течение 15 мин.

Температура растворов нейтрализаторов должна быть 20°С независимо от температуры окружающей среды.

Готовые растворы должны использоваться в день приготовления. Допускается хранение готовых растворов при температуре 4°С в течение 48 ч.

Контроль полноты нейтрализации остаточного действия испытываемого ДС.

Несмотря на существующие рекомендации по применению нейтрализаторов для различных действующих веществ (ДВ), многие современные ДС содержат несколько ДВ и другие вспомогательные вещества, обладающие бактериостатическим действием, и существующие (рекомендуемые) нейтрализаторы могут не обеспечивать эффективную нейтрализацию остаточного действия ДС в пробе. В этой связи результаты оценки эффективности ДС могут быть необъективными.

Поэтому каждый случай проведения испытания ДС должен предварительно сопровождаться экспериментальным контролем эффективности нейтрализации остаточного действия ДС на микробную клетку.

Для контроля эффективности нейтрализатора и полноты нейтрализации ДС используют суспензионный метод, предусматривающий проведение исследования, основные операции которого и их назначение приведены в табл.2 и на рис.2.

Таблица 2

     
Назначение операций эксперимента по оценке эффективности нейтрализации остаточного действия ДС

Пробирки со скошенной плотной питательной средой Левенштейна-Йенсена или "Новая"

Рис.2. Проведение эксперимента по контролю эффективности нейтрализации действия ДС на микобактерии используемым нейтрализатором