МУ 3.5.2596-10 Методы изучения и оценки туберкулоцидной активности дезинфицирующих средств

3.4. Определение биологической концентрации тест-микроба в рабочей суспензии

Из суспензии, приготовленной по оптическому стандарту мутности N 10 (10 КОЕ·мл), делают, как показано на рис.1, разведения с 10-кратным шагом до 10 микробных клеток в 1 мл (посев 0,1 мл суспензии из этого разведения на плотную питательную среду позволяет провести достаточно точный подсчет выросших на среде колоний микобактерий, количество которых будет находиться в пределах 100 ед.).

Рис.1. Проведение эксперимента по контролю количества живых микобактерий в рабочей суспензии тест-микобактерий, используемой для оценки туберкулоцидной активности ДС

Разведения готовят следующим образом:

Первое разведение соответствует 10 КОЕ/мл, а шестое - 10 КОЕ/мл. Из этого разведения производят посев по 0,1 мл на 5 пробирок со средой Левенштейна-Йенсена или "Новая", инкубируют в термостате при 37°С в течение 5-7 суток. Подсчитывают количество выросших колоний на среде в пробирке, рассчитывают среднее значение из 5 и делают пересчет количества жизнеспособных клеток в исходной суспензии, учитывая коэффициент разведения. Количество жизнеспособных клеток в рабочей суспензии должно быть 10 КОЕ/мл.

Посев суспензии в пробирки со скошенной плотной питательной средой позволяет существенно экономить расход среды и избежать пересыхания и растрескивания среды, наблюдаемых при использовании чашек Петри с плотной питательной средой.

Расчет количества жизнеспособных бактериальных клеток в приготовленной исходной суспензии осуществляют по следующей формуле:

,

где - количество жизнеспособных бактериальных клеток в 1 мл приготовленной суспензии;

- среднее количество колониеобразующих единиц (КОЕ), выросших на 5 чашках Петри;

- коэффициент пересчета, учитывающий степень разведения суспензии (10) и объем, использованный для посева (0,1 мл).

Например, получен рост микобактерий в 1-й пробе - 70 КОЕ, во 2-й - 130 КОЕ, в 3-й - 99 КОЕ, в 4-й - 115 КОЕ, в 5-й - 97 КОЕ, тогда среднее количество колониеобразующих единиц (КОЕ), выросших на 5 пробирках, будет равно:     

микробных тел в 1 мл, что соответствует оптическому стандарту мутности N 10 (1 млрд микробных тел (10) в 1 мл).