МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БИОПРЕПАРАТА ВИРИН-ЭКС НА РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ*

_______________

* Разработаны В.И.Трусовым, В.Л.Васильевой (КНИИЭИБ).

УТВЕРЖДЕНО 26.01.80 N 2128-80

Характеристика анализируемого инсектицида. Вирин-ЭКС - энтомопатогенный препарат - вирусный инсектицид. Предназначается для борьбы с гусеницами капустной совки на капусте, сахарной свекле и других сельскохозяйственных культурах. Действующим началом препарата является вирус ядерного полиэдроза, относящийся к группе бакуловирусов. В препарате вирус находится в виде вирионов, заключенных в полиэдры (многогранники), представляющие собой кристаллизованный кремнийсодержащий белок. Внутри каждого полиэдра заключено 10-20 вирионов. Размеры полиэдров 0,5-5 мк. Препарат - суспензия полиэдров в 50%-ном глицерине. Титр не менее 1·10 пдр/мл. Могут быть сухие формы. Применяется путем опрыскивания сельскохозяйственных культур, повреждаемых капустной совкой.

Действующее начало препарата - вирус ядерного полиэдроза КС при введении в организм экспериментальных животных всеми известными путями не репродуцируется и не вызывает скрытой или явной инфекции. Вирус не репродуцируется в культурах клеток позвоночных.

Препаративные формы инсектицидов (сухие и жидкие) не токсичны для человека и теплокровных животных при однократном и множественном воздействии различными путями. В связи с низкой токсичностью ЛД для крыс и мышей при пероральном введении не определяется. Токсичная доза для куриного эмбриона 0,5·10 пдр/эмбр. В эксперименте показано, что вирин-ЭКС - слабый аллерген. ПДК в воде рыбохозяйственных водоемов 1 мг/л.

Принцип метода. В основе метода лежит специфическая реакция взаимодействия антигена (в данном случае полиэдров ВЯП-КС) с антителами, меченными флюоресцирующим красителем (ФИТЦ). Реакция выявляется при наблюдении в люминесцентном микроскопе в виде ярко-зеленого свечения ободка полиэдров.

При условии централизованного изготовления иммунных антиполиэдренных сывороток иммунофлюоресцентный метод является экспресс-методом, высокочувствительным и специфичным.

Метрологическая характеристика метода. Данным методом можно определить количество полиэдров в диапазоне от 0,5х10 до 1·10 пдр/мл субстрата.

Избирательность метода. Метод высокочувствительный и специфичный. Способен дифференцировать различные виды полиэдров. Чувствительность метода в большой степени зависит от качества приготовленных гипериммунных сывороток.

Реактивы и материалы. Ацетон. Физиологический раствор (0,85%-ный NaCl), рН 7,4-7,6. Спирт этиловый. Нефлюоресцирующее иммерсионное масло. Сахароза. Антибиотики (пенициллин, стрептомицин, нистатин). Мертиолят. Синька Эванса. Меченная изотиоцинатом флюоресцеина ослиная сыворотка против глобулинов кролика (изготавливается в Институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи). Специфическая антиполиэдренная кроличья сыворотка.