МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БИОПРЕПАРАТА ВИРИН-КШ НА РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ*

________________

* Разработаны В.Л.Васильевой, В.И.Трусовым (КНИИЭИБ).

УТВЕРЖДЕНО 12.05.83 N 2798-83

Краткая характеристика препарата. Вирин-КШ - энтомопатогенный (инсектидидный) препарат. Предназначается для борьбы с гусеницами кольчатого шелкопряда. Действующее начало - вирус ядерного полиэдроза из семейства бакуловирусов, содержащийся в препарате в виде полиэдров. Полиэдры - вирусные тельца-включения, которые образуются в клетках тканей больных гусениц. Они представляют собой многогранники из кристаллизованного белка, содержащие от десятка до нескольких сотен вирусных частиц. Размеры полиэдров 1-3 мк. Препарат - суспензия полиэдров в 50%-ном глицерине с титром не менее 1·10 пдр/мл. Применяется путем опрыскивания плодовых деревьев против гусениц разных возрастов.

Принцип метода. Для выявления микроколичеств препарата вирин-КШ во внешней среде применяется непрямой вариант ИФ-метода (метод Кунса) с использованием кроличьей специфической антиполиэдренной иммунной сыворотки и стандартной меченной флюорохромом ослиной сыворотки против глобулинов кролика.

На объектах и субстратах внешней среды выявляют исключительно полиэдры (тельца-включения), так как свободные вирусные частицы весьма лабильны и легко разрушаются под влиянием различных факторов. Для выявления полиэдров (антигена) готовят специфическую антиполиэдренную иммунную сыворотку. Реакция выявляется под микроскопом в виде ярко-зеленого свечения полиэдров, особенно их ободка.

Метрологическая характеристика метода. Данным методом можно определить количество полиэдров от 0,5·10 и более в 1 мл субстрата.

Избирательность метода. При условии применения качественной гипериммунной антиполиэдренной сыворотки и устранения неспецифического свечения в исследуемых препаратах метод расценивается как специфичный и высокочувствительный, а при наличии специфической антисыворотки так же, как экспресс-метод.

Реактивы и материалы, приборы и посуда. Люминесцирующая ослиная сыворотка против глобулинов кролика, изготовленная Институтом эпидемиологии и микробиологии им. И.Ф.Гамалеи. Иммунная специфическая кроличья сыворотка против полиэдров ВЯП КШ. Нефлюоресцирующее иммерсионное масло или диметилфталат. Дистиллированная вода. Физиологический раствор (0,15 М хлорида натрия), рН 7,4-7,6. Ацетон. Мертиолят натрия или борная кислота. Синька Эванса - СHNNaO. Адъювант Фрейнда. Антибиотики (пенициллин, стрептомицин, 5-нитрооксихинолин). Люминесцентный микроскоп. Центрифуга ЦЛС-1 или ЦЛН-1 и др. Пипетки градуированные на 1 и 5 мл. Чашки Петри. Предметные стекла. Пакеты марлевых салфеток 5х5 см.