МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРЕПАРАТА ВИРИН-ДИПРИОН НА РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ*

________________

* Подготовили В.Л.Васильева, В.И.Трусов (КНИИЭИБ).

УТВЕРЖДЕНО 12.05.83 N 2799-83

Характеристика препарата. Вирусный препарат вирин-диприон предназначен для борьбы с личинками рыжего соснового пилильщика (РСП) I-III возрастов. Действующее начало препарата - вирус ядерного полиэдроза (ВЯП) кишечного типа, содержащийся в тельцах-включениях (полиэдрах). Препарат жидкой формы представляет собой концентрат-суспензию полиэдров темно-серого цвета с беловатым осадком при отстое, состоящим главным образом из полиэдров. Размер полиэдров колеблется от 0,5 до 4 мк, титр 1·10 пдр/мл. Применяется путем наземного или авиационного опрыскивания сосновых насаждений, пораженных вредителями.

Принцип метода. ИФ-метод выявления остаточных количеств вирусного препарата основан на явлении иммунофлюоресценции, широко используемом в медицинской вирусологии для идентификации микроорганизмов. В основе метода лежит специфическая реакция взаимодействия антигена (в данном случае полиэдров ВЯП рыжего соснового пильщика) с антителами, меченными флюоресцирующим красителем ФИТЦ. Реакция выявляется при наблюдении в люминесцентном микроскопе в виде специфического свечения комплекса, антиген - антитело (яркое желто-зеленое свечение полиэдров).

Метрологическая характеристика метода. Данным методом можно определить от 1·10 и более полиэдров в 1 мл субстрата.

Избирательность метода. При условии применения качественных гипериммунных антиполиэдренных сывороток и устранения неспецифического свечения в исследуемых препаратах метод расценивается как специфический и высокочувствительный. При условии централизованного изготовления специфической антисыворотки ИФ-метод является экспрессным.

Отбор проб. Если проба состоит из мелких растительных объектов (хвоя, трава, листья, ягоды), из них готовят навеску 200-300 г, помещают в широкогорлые банки, доливают 200-300 мл физиологического раствора с рН 7,4-7,6, энергично встряхивают 10-15 мин, отстаивают 10 мин, надосадок центрифугируют при скорости вращения 5 тыс.мин, осадок ресуспендируют в 1 мл дистиллированной воды. Для дальнейшей работы суспензию можно хранить при температуре 4 °С до 3 сут.