5.1. Суспензионный метод
Суспензионный метод оценки спороцидной активности ДС и их субстанций используют для получения первичной информации о концентрации и времени эффективного (отсутствие жизнеспособных спор) спороцидного действия ДС. Методология выполнения эксперимента по оценке спороцидной активности ДС суспензионным методом приведена на схеме рис.3.
Рис.3. Схема алгоритма проведения эксперимента по оценке спороцидной активности ДС суспензионным методом
Как видно из схемы рис.3, для проведения опыта по оценке спороцидной активности ДС суспензионным методом необходимо приготовить:
рабочую суспензию тест-микроорганизма с концентрацией спор не менее 1·10
КОЕ/мл (это обеспечивает возможность создания в смеси ДС с суспензией (обоснованной и применяемой для этого метода оценки ДС) концентрации спор порядка 1·10
КОЕ/мл);
пробирки со стерильной питьевой водой для проведения контроля реальной биологической концентрации (БК) тест-микроорганизма в суспензии, используемой в опыте;
пробирки или флакон с раствором ДС в испытываемой концентрации в количестве, необходимом для обеспечения отбора всех проб;
необходимое количество пробирок (в зависимости от количества проб, отбираемых для определения времени, обеспечивающего полную гибель спор тест-микроорганизма), содержащих по 9 мл нейтрализатора, проверенного предварительно на эффективность нейтрализации остаточного действия испытываемого ДС на тест-микроорганизм (п.4);
чашки Петри со стерильной плотной питательной средой в количестве, необходимом для посева пробы контроля исходной суспензии и проб контроля эффективности действия ДС на тест-микроорганизм.
Методика проведения самого опыта включает, как видно из схемы, последовательное выполнение следующих операций:
тщательное перемешивание хранимой в пробирке или во флаконе рабочей суспензии тест-микроорганизма путем встряхивания в течение 2-3 мин;
помещение испытываемого рабочего раствора ДС в водяную баню с заданной температурой; если задачей эксперимента не предусмотрено изучение влияния воздействия температуры на эффективность средства, то оценка эффективности раствора испытываемого средства осуществляется при температуре 18-20 °С;
проведение контроля реальной на момент проведения опыта биологической концентрации (БК) тест-микроорганизма в суспензии (п.3.3);
внесение в испытываемый дезинфицирующий раствор рабочей суспензии тест-микроорганизма с обеспечением соотношения ДС и суспензии тест-микроорганизма 9:1;
перемешивание смеси и отсчет по секундомеру времени начала воздействия ДС на тест-микроорганизм;
по окончании каждой заданной экспозиции проводят отбор пробы в количестве 3 мл, которую по 1 мл вносят в 3 пробирки, содержащие по 9 мл стерильного раствора нейтрализатора;
перемешивание пробы путем встряхивания в течение 1-2 мин (или в течение 5 мин на шейкере) и посев из них стерильно на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри (по 0,1 мл на каждую чашку и не менее чем на 3 чашки из каждой пробы).
