ГОСТ Р 53774-2010 Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков (с Изменением N 1)
5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа
5.1.1 Метод с использованием тест-набора N 1
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков бета-лактамного типа устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.
5.1.1.1 Подготовка к определению
Вскрывают упаковку тест-набора N 1, проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.
Срок хранения тест-набора N 1 (без упаковки) при температуре (20±2) °С - не более 24 ч.
5.1.1.2 Проведение определения
Для тест-набора N 1 ("Бета-лактам Snap") мерную пипетку вместимостью 0,4 см наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.
Пробирку и индикаторное устройство помещают в термостат и выдерживают при температуре (45±5) °С в течение 5-6 мин.
Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45±5) °С в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.
Для тест-набора N 1 ("Бета-лактам Snap СТ") мерную пипетку вместимостью 0,4 см наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.
Индикаторное устройство выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 4 мин. Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.1.1.3 Обработка результатов
Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).
Контрольная зона должна быть синего цвета.
Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 1.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве белый или светлее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке присутствуют.
5.1.2 Метод с использованием тест-набора N 2
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.