ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследования раздражающего и сенсибилизирующего действия
6.3 Исследование раздражающего действия на кожу экспериментальных животных
6.3.1 Принцип метода
Оценивают потенциальную способность материала оказывать раздражающее действие на кожу животного. В качестве экспериментальной модели предпочтительнее использовать кролика.
6.3.2 Исследуемый материал
Твердые вещества (включая порошки) или жидкость готовят к исследованиям в соответствии с приложением А.
Для демонстрации чувствительности оценки желательно, дополнительно к отрицательному контролю, ввести положительный контроль для каждого животного. Так как образцы и контроль исследуют в двух местах каждый, то следует применять максимально не более двух исследуемых материалов с контролем на одном животном с использованием при аппликации одного и того же растворителя.
6.3.3 Экспериментальные животные и их содержание
Используют половозрелых молодых кроликов-альбиносов одной линии, любого пола, массой не менее 2 кг.
Акклиматизацию и уход за животными осуществляют в соответствии с ИСО 10993-2.
При ожидаемой реакции раздражения для первичной оценки исследуемого материала используют одно животное. Если наблюдается хорошо выраженная положительная реакция (оценочный балл больше двух либо для эритемы, либо для отека, см. таблицу 1), дальнейшие исследования проводят минимум на двух животных.
Таблица 1 - Система классификации кожных реакций
Реакция | Оценка в баллах |
Эритема и образование струпа | |
Отсутствие эритемы | 0 |
Очень слабая эритема (едва заметная) | 1 |
Хорошо различимая эритема | 2 |
Умеренная эритема | 3 |
Резко выраженная эритема (темно-красная) с образованием струпа Образование отека | 4 |
Отсутствие отека | 0 |
Очень слабый отек (слегка заметный) | 1 |
Заметный отек, выступающий над поверхностью кожи и имеющий четко выраженные границы | 2 |
Умеренный отек (выступающий над поверхностью кожи около 1 мм) | 3 |
Выраженный отек (распространенный, выступающий над поверхностью кожи более чем на 1 мм) | 4 |
Максимально возможное число баллов | 8 |
Примечание - Другие кожные реакции должны быть внесены в отчет об исследовании и зарегистрированы. | |
Если возникновение реакции раздражения маловероятно, то первичную оценку проводят на трех животных.
Если результаты исследований, полученные не менее чем на трех животных, сомнительны или неясны, проводят дополнительные исследования.
6.3.4 Проведение исследований
6.3.4.1 Подготовка животных
Критическим фактором исследования является состояние кожи животного. Используют только животных со здоровой неповрежденной кожей.
За 4-24 ч до начала проведения исследований выстригают шерсть на участках площадью примерно 1015 см по обеим сторонам спины для аппликации и наблюдения.
Примечание - Сбривать шерсть на подготовленных участках необязательно, так как практика показала, что это не влияет на результаты исследований.
При многократном воздействии исследования проводят в соответствии с 6.3.4.2, 6.3.4.3 или 6.3.4.4 в течение не более 21 сут.
6.3.4.2 Аппликация порошкообразных и жидких образцов
Наносят 0,5 г или 0,5 мл исследуемого материала на кожу с каждой стороны, как показано на рисунке 1.
1 - голова; 2 - исследуемая область; 3 - контрольная область; 4 - выстриженная дорсальная область; 5 - контрольная область; 6 - исследуемая область; 7 - хвост
Рисунок 1 - Расположение областей для аппликации
Порошкообразный исследуемый материал перед нанесением слегка смачивают водой или другим подходящим растворителем.
Участки с нанесенным материалом сверху покрывают кусочками ткани или марли, сложенными вчетверо, площадью 2525 мм и фиксируют полуокклюзионной или окклюзионной повязкой. Время экспозиции - не менее 4 ч. Удаляют защитную повязку и кусочки ткани, отмечают положение участков. Затем удаляют остатки испытуемого вещества соответствующими средствами, например теплой водой или другим растворителем, не оказывающим раздражающего действия, и насухо промокают.