1.1. Изучение влияния вещества на кожу проводится на двух видах экспериментальных животных (кролики и морские свинки). Используются кролики породы "Шиншила" или альбиносы, а также морские свинки светлой масти. Количество животных в группе не менее 8-10 особей. Среди животных одной группы максимальная разница в массе тела должна составлять не более 10%. Участок аппликации составляет для кроликов 7х8 см и для морских свинок 5х5 см.
За 1-2 дня до эксперимента тщательно выстригают шерсть на участке аппликации (применение депилятория недопустимо!). В опыт пригодны животные с чистой здоровой кожей без механических повреждений. Шерсть выстригают на симметричных участках спины по обе стороны от позвоночника, оставляя шерстный покров между ними в 2 см. Правый бок служит для аппликации изучаемого вещества, левый - для контроля.
На время экспозиции животных фиксируют для исключения слизывания продукта с кожи. Фиксация должна осуществляться наиболее физиологичным методом. С этой целью для кроликов применяют специальные станки или полужесткие воротники (из резины, пластика или линолеума). Морских свинок помещают в индивидуальные домики.
1.2. Время экспозиции - 4 часа. Время наблюдения после однократной аппликации - 2 недели.
Исследуемый продукт наносится на кожу из расчета 20 мг/см.
1.3. Изучаемые соединения наносят на кожу, как правило, в нативном виде. В случае невозможности нанесения вещества в чистом виде или при наличии выраженного раздражающего действия применяют разведение химического вещества. В качестве растворителя и разбавителя следует использовать дистиллированную воду или модельную среду, имитирующую потовую жидкость (приложение 1). При невозможности разведения вещества в перечисленных выше растворителях допускается применение растительного и вазелинового масла, этилового спирта или ацетона.
Нанесение вещества осуществляется открытым способом при температуре окружающей среды 18-24 °С. Для летучих веществ (температура кипения до 160 °С) следует использовать закрытый способ: компрессный метод Ведрова и Долгова, метод наклейки капсул и часовых стекол, применение камер КНИД-1.
На контрольный участок кожи животного наносится растворитель или разбавитель, используемый в опыте.
1.4. После окончания экспозиции остатки продукта удаляются теплой водой с мылом. Необходимо избегать грубых манипуляций, способных вызвать изменение кожи.
1.5. Реакцию кожи регистрируют по окончании экспозиции, через 1 и 16 часов после однократной аппликации и оценивают по сравнению с симметричным участком кожи того же животного. Функциональные нарушения кожи характеризуются появлением различной степени эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры кожи, скорости проницаемости эпидермиса, снижением сопротивления кожи постоянному электрическому току, уменьшением ее нейтрализующей способности.
Оценка эритемы и отека кожи животных проводится по шкале, приведенной в табл.1.
Таблица 1
Оценка функционального состояния кожи экспериментальных животных при изучении местного действия веществ
а) Оценка степени эритемы.
Выраженность эритемы измеряется визуально или предпочтительнее с помощью колориметрической линейки С.В.Суворова и В.В.Чернышевой и оценивается в баллах.
Интенсивность эритемы (визуально) | Оценка эритемы по колориметрической линейке (в баллах) |
1. Отсутствие эритемы | 0 |
2. Слабая (розовый фон) эритема | 1 |
3. Умеренно-выраженная эритема (розово-красный фон) | 2 |
4. Выраженная эритема (красный фон) | 3 |
5. Резко выраженная эритема (ярко красный фон) | 4 |
б) Оценка отека кожи животных.
Величина отека определяется путем измерения толщины кожной складки (в мм) при помощи толщиномера типа ТР-1-10.
Интенсивность отека (увеличение толщины кожной складки, мм) | Оценка отека (в баллах) | ||
Кролики | Морские свинки | ||
Отсутствие | 0 | 0 | 0 |
Слабый | до 0,5 | до 0,3 | 1 |
Умеренный | 0,6-1,0 | 0,4-0,6 | 2 |
Выраженный | 1,1-2,0 | 0,7-1,0 | 3 |
Резко выраженный | >2,0 | >1,0 | 4 |
Оценка степени эритемы и отека суммируется для каждого подопытного животного, после чего вычисляется средняя оценка выраженности раздражающего эффекта для группы экспериментальных животных.
Степень выраженности раздражающего действия вещества на кожу кроликов и морских свинок определяется по классификации, приведенной в табл.2.
Таблица 2
Классификация химических веществ по выраженности раздражающего действия на кожу кроликов и морских свинок при однократной аппликации