ГОСТ Р 53097-2008

Группа С19

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Определение содержания зеараленона

Animal feeding stuffs. Determination of zearalenone

     

ОКС 67.060,
        67.080.10
ОКСТУ 9209

Дата введения 2010-01-01

     

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. N 504-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 6870:2002 "Корма для животных. Качественный метод определения зеараленона" (ISO 6870:2002 "Animal feeding stuffs. Qualitative determination of zearalenone").

При этом измененные и дополнительные слова, фразы, абзацы, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом*

_______________

* В бумажном оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделае "Предисловие" приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает качественный метод определения зеараленона в кормах для животных, в частности, в кукурузе. Данный метод используется только для целей скрининга.

Предел определения зеараленона не более 50 мкг/кг.

Примечание - Несмотря на то, что сорго дает мешающие флуоресцирующие пятна, идентичные пятнам зеараленона, данный метод тем не менее применяется для данного корма, потому что значения различны после проявления хроматограммы во втором направлении. Флуоресцирующие пятна не проявляются в случае использования установленного метода подтверждения.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 52501-2005 (ИСО 52501:2005)* Вода для лабораторного анализа. Технические условия

_______________

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987), здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4197-74 Реактивы. Натрий азотистокислый. Технические условия

ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 12433-83 Изооктаны эталонные. Технические условия

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Сущность*метода

_______________

* Слово "Сущность" в наименовании пункта 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Испытуемую пробу корма экстрагируют смесью ацетонитрила и раствором хлорида калия, затем фильтруют и обезжиривают изооктаном, после чего производят очистку в смеси ацетонитрила, воды и ацетата свинца в присутствии диатомовой земли. После фильтрации пробу экстрагируют хлороформом, который затем выпаривают.

Сухой экстракт растворяют в смеси бензола и ацетонитрила. Осуществляют двумерную тонкослойную хроматографию испытуемой пробы. Содержание зеараленона определяют визуальным измерением или измерением интенсивности флуоресценции пятна в УФ-свете путем сравнения с известными количествами зеараленона, нанесенными на туже пластинку.

Идентичность зеараленона подтверждают с помощью раствора бис-диазотированного бензидина.

     4 Реактивы*

_______________

* Наименование пункта 4 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

При испытании используют только реактивы аналитической чистоты и дистиллированную или деминерализованную воду либо воду эквивалентной чистоты по ГОСТ Р ИСО 52501.

4.1 Ацетонитрил для хроматографии.

4.2 Изооктан по ГОСТ 12433.

4.3 Хлороформ по ГОСТ 20015.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Хлороформ - токсичное вещество. Необходимо избегать вдыхания или воздействия хлороформа. При работе с ним или его растворами необходимо использовать вытяжной шкаф.

4.4 Бензол/ацетонитрил, смесь 98:2, по объему.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Бензол токсичен при вдыхании и контакте с кожей, а также легко воспламеняется.

4.5 Элюенты

4.5.1 Толуол/этилацетат/муравьиная кислота, смесь 6:3:1, по объему.

4.5.2 Хлороформ/этанол, смесь 95:5, по объему.

4.6 Хлорид калия, раствор массовой концентрации 40 г/дм.

4.7 Раствор ацетата свинца, приготовленный следующим образом: 200 г ацетата свинца помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см с одной меткой, добавляют 3 см уксусной кислоты по ГОСТ 61, доливают воду до метки и перемешивают.

4.8 Реагент бис-диазотированный бензидин

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Бензидин - канцероген и токсичен при вдыхании, контакте с кожей и попадании внутрь организма.

4.8.1 Приготовление раствора бензидина концентрацией 5 г/дм

0,5 г бензидина помещают в колбу вместимостью 100 см, содержащую 20 см воды и 1,5 см соляной кислоты по ГОСТ 3118, добиваются растворения бензидина и доливают воду до метки.

Раствор хранят в темноте в склянках из коричневого стекла.

4.8.2 Приготовление раствора бензидина

Равные объемы раствора бензидина (см. 4.8.1) и раствора нитрита натрия (натрий азотистокислый по ГОСТ 4197) концентрацией 100 г/дм охлаждают до температуры от 0 °С до 5 °С.

Растворы тщательно смешивают. Полученный раствор становится темно-фиолетовым и мутнеет. Раствор оставляют, чтобы до использования он достиг комнатной температуры (желтого цвета).

Реагент готовят непосредственно перед использованием.

4.9 Диатомовая земля (Целит 545), промытая соляной кислотой.

4.10 Азот газообразный по ГОСТ 9293

4.11 Зеараленон, стандартный раствор массовой концентрации 10 мкг/см, в бензоле.

Спектр поглощения раствора регистрируют между 300 и 330 нм на спектрометре при использовании кварцевых оптических кювет толщиной 10 мм относительно бензола. Фиксируют максимальную оптическую плотность , которая наблюдается вблизи 317 нм.

Рассчитывают концентрацию зеараленона, в микрограммах на миллилитр раствора, по формуле

,                                                              (1)

     
где 318 - молярная масса зеараленона;

- максимальная оптическая плотность;

6060 - молярный коэффициент поглощения.

     5 Оборудование

Для испытаний используют следующее лабораторное оборудование:

5.1 Мельница, пригодная для приготовления продукта, который полностью просеивается через сито с размером отверстий 1 мм.

5.2 Аппарат для встряхивания (шейкер), способный производить около 100 встряхиваний в минуту.

5.3 Фильтровальная бумага с порами среднего размера ("белая лента"). Фильтровальная бумага быстрой фильтрации ("красная лента") даст мутный раствор; фильтровальная бумага медленной фильтрации ("синяя лента") будет закупорена.

5.4 Роторный испаритель с круглодонной колбой.

5.5 Оборудование для тонкослойной хроматографии, нанесения пятен (капиллярные пипетки или микрошприцы), проявительная камера и оборудование для распыления реагента на пластинках.

5.6 Стеклянные пластинки для тонкослойной хроматографии, размером 200х200 мм, которые готовят, как указано ниже (указанные количества достаточны для приготовления пяти пластинок).

30 г силикагеля G-HR взвешивают в конической колбе, добавляют 60 см воды, закрывают пробкой и тщательно перемешивают в течение 1 мин. Суспензию разливают по пластинкам таким образом, чтобы образовался равномерный слой толщиной 0,25 мм. Пластинкам дают высохнуть на воздухе и помещают их в эксикатор. Пластинки активируют перед использованием, помещая их на 1 час в сушильный шкаф, в котором поддерживается температура 110 °С ±3 °С.

Если получаемые результаты сопоставимы с результатами, получаемыми при использовании пластинок, приготовленных по методу, изложенному в предыдущем абзаце, можно использовать пластинки, которые имеются в продаже.

5.7 Коротковолновая УФ-лампа (длина волны 253 нм).

Интенсивность излучения должна быть такой, чтобы можно было четко различить пятно, содержащее 25 нг зеараленона на тонкослойной пластинке, когда лампа размещена на расстоянии 100 мм от пластинки.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! В связи с опасностью УФ-излучения для глаз, необходимо использовать средства защиты глаз.

5.8 Пробирки, вместимостью 10 см, с полиэтиленовыми пробками.