МУК 4.2.2316-08 Методы контроля бактериологических питательных сред

6.8. Определение общего азота с реактивом Несслера

Принцип метода основан на свойстве реактива Несслера давать цветную реакцию с ионами аммония (NH), образующимися после минерализации азотсодержащих органических веществ.

Реактивы: 1) серная кислота концентрированная;

2) водорода перекись. Пергидроль (29-35%) (ГОСТ 10929-76);

3) реактив Несслера (готовый);

4) раствор аммония серно-кислого, содержащий 0,05 мг/мл азота.

Приготовление стандартного раствора серно-кислого аммония (0,1 мг/мл азота). Из образца аммония сульфата, предварительно доведенного до постоянной массы (в эксикаторе над безводным кальция хлоридом), берут его точную навеску - 0,2357 г и растворяют в мерной колбе (500 мл) в дистиллированной воде, доводя объем раствора до метки. Стандартный раствор хранят в течение 1 года при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой. Перед определением стандартный раствор разводят водой в 2 раза.

Построение калибровочной кривой. В пробирки вносят по 0,1-0,2-0,3-0,4-0,5 мл раствора аммония серно-кислого (содержание азота от 5 до 25 мкг с интервалом 5 мкг). Объем каждой пробы доводят водой до 9,5 мл, перемешивают, затем прибавляют по 0,5 мл реактива Несслера. Пробы вновь перемешивают, а затем колориметрируют на фотоэлектроколориметре с синим светофильтром (~400 нм) в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

Раствором сравнения служит контрольная проба, содержащая 0,5 мл реактива Несслера в 9,5 мл воды. По показаниям прибора строят кривую зависимости оптической плотности от концентрации азота. Калибровочный график воспроизводят при каждом определении.

Ход определения

Подготовка проб. Для анализа в пробирку пипеткой вносят 1 мл раствора образца, с содержанием общего азота 100-200 мкг*.

_______________

* При анализе сухой питательной среды, содержащей 5-10% общего азота, готовят 0,2%-й раствор на дистиллированной воде (анализируемая навеска образца С - 2 мг).

При анализе сухого гидролизата, содержащего 12-17% общего азота, готовят 0,1%-й раствор (анализируемая навеска образца С - 1 мг).

Жидкий гидролизат следует развести в 100 раз.

На песчаной бане минерализуют 1 мл исследуемого образца (2 параллельные пробы) с 0,1 мл концентрированной серной кислоты в пробирках со стеклянными колпачками. Параллельно минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл концентрированной серной кислоты. Для ускорения минерализации в охлажденные испытуемые и контрольные пробы периодически добавляют по 1-2 капли пергидроля. Сжигание продолжают до обесцвечивания содержимого пробирок (не менее 10 ч).

К полученным минерализатам добавляют по 8,9 мл дистиллированной воды, предварительно обмыв колпачок, тщательно перемешивают растворы. На колориметрирование отбирают по 1 мл раствора минерализата (10-20 мкг азота), добавляют 8,5 мл дистиллированной воды, перемешивают, а затем - по 0,5 мл реактива Несслера. Пробы перемешивают и колориметрируют на фотоэлектроколориметре с синим светофильтром (~400 нм) в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служит раствор, приготовленный аналогично образцу.

Содержание общего азота в препарате в процентах () вычисляют по формуле:

Для сухого образца (сухой гидролизат, сухая питательная среда)

,

где - количество азота (мкг), рассчитанное по калибровочному графику;

- разведение минерализата;

- коэффициент пересчета в проценты;

- количество анализируемого препарата (мл);

- анализируемая навеска образца (мг), содержащаяся в 1 мл раствора образца;

- коэффициент пересчета микрограммов в миллиграммы.

Для жидкого образца (жидкий гидролизат):