МУК 4.2.2316-08 Методы контроля бактериологических питательных сред

6.7. Определение содержания пептидов по биуретовой реакции

Метод основан на способности пептидов давать цветную реакцию с биуретовым реактивом. Концентрацию пептидов ("пептонов") определяют путем сравнения интенсивности окраски испытуемого и стандартного растворов.

Реактивы: 1) 2%-й раствор меди сульфата в 9%-м растворе натрия-калия тартрата - реактив А;

Приготовление реактива А. Растворяют 1 г меди сульфата (CuSO·5НO) в нескольких миллилитрах воды. В этот раствор прибавляют 4,5 г натрия-калия тартрата, предварительно растворенного в 40 мл воды. Объем раствора доводят водой до 50 мл. Раствор годен к употреблению в течение дня.

2) 10%-й раствор натрия едкого;

3) 0,9%-й раствор натрия хлорида;

4) 1%-й стандартный раствор пептона (ГОСТ 13805-76).

Приготовление 1%-го стандартного раствора пептона. Стандартный раствор 1%-ного пептона готовят с учетом влажности при растворении навески в 0,9%-м растворе натрия хлорида. Реактив хранят в холодильнике. В качестве консерванта используют мертиолят (1:10000).

Приготовление контрольного раствора. К 5 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида добавляют 0,5 мл 10%-ного раствора натрия едкого и 0,5 мл реактива А.

Построение калибровочной кривой. Из стандартного раствора готовят ряд разведений с содержанием пептона от 0,1 до 0,5% на 0,9%-м растворе натрия хлорида с интервалом 0,1%. К 5 мл каждого разведения прибавляют 0,5 мл 10%-го раствора натрия едкого и 0,5 мл реактива А.

Пробы колориметрируют сразу после внесения реактивов на фотоэлектроколориметре (ФЭК) при длине волны 540 нм в кюветах с толщиной слоя 5 мм против контрольного раствора. По показаниям прибора строят кривую зависимости оптической плотности от концентрации пептона. Калибровочную кривую проверяют перед каждым определением.

Подготовка проб. Для анализа используют гидролизаты и питательные среды, разведенные в 10 раз 0,9%-м раствором натрия хлорида.

Ход определения

К 5 мл испытуемого раствора добавляют 0,5 мл 10%-го раствора едкого натрия и 0,5 мл реактива А.

Одновременно готовят контрольную пробу и проводят определение, как описано при построении калибровочной кривой. Концентрацию пептона в испытуемом растворе в процентах вычисляют по калибровочной кривой и производят перерасчет с учетом разведения.*

_______________

* Методика может быть рекомендована для гидролизатов и питательных сред с определенной цветностью. Показатель оптической плотности среды не должен превышать 0,2 при определении на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм в кюветах с толщиной слоя 5 мм против воды.