4.1.1. Приготовление образца
4.1.1.1. Жидкие образцы, такие как вода, молоко, фруктовые соки, не требуют специальной подготовки, хотя могут быть сделаны разведения, описанные ниже. Твердые образцы требуют гомогенизации и разведения.
4.1.1.2. Чтобы приготовить твердый образец в гомогенном виде, необходимо: сделать навеску 10 или 25 г образца в стерильном пакете для гомогенизатора типа Stomacher. Добавьте стерильный разбавитель (обычно Maximum Recovery Diluent - MRD или физиологический раствор, ЗФР) так, чтобы общий вес образца был 100 или 250 г (разведение 1:10) и поместите пакет с образцом и разводящей жидкостью в гомогенизатор. Гомогенизируйте образец.
4.1.1.3. Небольшое количество образца может быть подвергнуто разведению при помещении 1 г образца в стерильные стандартные флаконы с 9 мл стерильной разводящей жидкости.
Если необходимо дальнейшее разведение, то оно может быть сделано серийным титрованием при пипетировании 1 мл из предварительного разведения в 9 мл стерильного разбавителя (обычно MDR) и перемешиванием (например, с помощью Vortex Mixer).
4.1.2. Исследования на анализаторе "РЭБИТ"
4.1.2.1. Два типа исследований возможно использовать на системе "РЭБИТ":
прямой метод, когда питательная среда и образец добавляются непосредственно в стерильную измерительную ячейку с рабочим объемом 2-10 мл;
непрямой метод, когда культуральная среда и образец добавляются в стерильную боросиликатную стеклянную пробирку с рабочим объемом до 5 мл. Стеклянная пробирка затем помещается в измерительную ячейку, которая затем плотно закрывается.
4.1.2.2. Приготовление ячеек для непрямого метода описано в приложении.
4.1.2.3. При проведении исследований на анализаторе "РЭБИТ" рекомендуется в качестве положительного контроля включать референс-штаммы микроорганизмов. Данные микроорганизмы должны быть выращены в бульонной культуре и серийно разведены в MRD до 10. 1 мл из наибольшего разведения добавляется в измерительную ячейку с питательной средой и инкубируется в модуле анализатора "РЭБИТ" с исследуемыми образцами.
4.1.2.4. Каждое исследование на анализаторе "РЭБИТ" должно включать контрольную ячейку со стерильной питательной средой (отрицательный контроль).
4.1.2.5. После установления в модули анализатора "РЭБИТ" ячеек с исследуемыми образцами, положительным и отрицательным контролями, ячейки инкубируются в модулях в соответствии с заданным Кодом Исследования, описанным ниже.
4.1.2.6. Типичные Коды Исследования представлены в п.4.1.2.7. и привязаны к специфическим видам исследования, описанным ниже.
4.1.2.7. Типичные Коды Исследования для системы РЭБИТ
Таблица 1
Номер кода исследования | Продолжительность исследования, ч | Интервал, мин | Критерий детекции, uS | Температура, °С |
1 | 24 | 6 | +5 | 30 |
2 | 24 | 6 | +5 | 37 |
3 | 24 | 6 | +20 | 37 |
4 | 24 | 6 | -10 | 37 |
5 | 48 | 6 | -10 | 30 |
6 | 96 | 12 | -15 | 30 |
7 | 24 | 6 | -30 | 43 |
8 | 24 | 6 | -10 | 37 |
9 | 24 | 6 | -10 | 30 |