Статус документа

МУК 4.2.2218-07 Лабораторная диагностика холеры

5.3. Идентификация культур холерных вибрионов

Культуры, выделенные на различных этапах, идентифицируют с целью определения их принадлежности к виду Vibrio cholerae соответствующей серогруппы (О1, О139 или других).

К виду V. cholerae относят грам отрицательные, аспорогенные, полиморфные палочки, слегка изогнутые или прямые, активно подвижные, с одним полярно расположенным жгутиком, образующие индофенолоксидазу, ферментирующие глюкозу в аэробных и анаэробных условиях до кислоты (без газа), расщепляющие маннит, маннозу, сахарозу, но не активные в отношении к арабинозе, инозиту, салицину и некоторым другим субстратам. Холерные вибрионы декарбоксилируют лизин и орнитин, но не обладают дигидролазой аргинина, образуют индол, обладают нитратредуктазой, не продуцируют сероводород. Таксономическое положение холерных вибрионов и признаки, дифференцирующие их от родственных микроорганизмов, приведены на рис.2 и в табл.2, 3, 4.

Рис.2. Классификация вибpиoнoв

Примечания: таксономия вибрионов представлена по Bergeys manyal of Deferminative Bacteriology, 1994; типовые штаммы О2-О39 соответствуют Sakazaki (1970); О40-083, а также О12; О23 и О26 не изучены в сравнении с международной коллекцией типовых штаммов.

Таблица 2

Основные дифференциальные признаки рода Vibrio и некоторых других микроорганизмов


	Роды сем. Vibrionaceae
Признаки	Vibrio
	V. cho- lerae	другие виды	Аеrо- monas	Enhydro- bacter	Plesio- monas	Photo- bacterium	Entero- bacte- riaceae	Pseudomo- nadaceae
1	2	3	4	5	6	7	8	9
Окраска по Граму, морфология	Грамотрицательные полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки
Подвижность	+	+(-)	+(-)	-	+	+	+ (-)	+
Оксидаза	+	+(-)	+	+	+	+(-)	-	+(-)
Рост на средах без NaCI	+	-(+)	+	+	+	-	-	-
Чувствительность к 0-129	+	+(-)	-	-	+	+	-	-
О/Ф глюкозы в среде Хью-Лейфсона	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/-
Газ из глюкозы	-	-(+)	+(-)	-	-	+	+/-	-
Лизиндекарбоксилаза	+	+(-)	-(+)	+	+	+	+/-	-(+)
Орнитиндекарбоксилаза	+	+/-	-(+)	+	+	+	+/-	-(+)
Аргининдигидролаза	-	-(+)	+	+	+	+	-/+	+/-
Ферментация:
лактозы	-	-(+)	-(+)	-	+	X	+/-	-(+)
маннита	+	+(-)	+(-)	X	-	-	+(-)	+(-)
арабинозы	-	-(+)	+(-)	X	-	-	+(-)	-(+)
сахарозы	+	+(-)	+	X	-	-(+)	+/-	-
инозита	-	-(+)	-	X	+	-	-(+)	Х
Образование:
ацетилметилкарбинола	+(-)	-(+)	+(-)	-	-	+	-(+)	Х
индола	+	+(-)	+(-)	-	-	-	+(-)	+/-
нитратредуктазы	+	+(-)	+	+	+	+(-)	+	+/-
-галактозидазы	+	+(-)	+	X	+	+	-(+)	X
желатиназы	+	+(-)	+	X	-	+	-(+)	+/-
Биолюминесценция	-(+)	-(+)	-	X	-	+	-	-
Мол. % G+C в ДНК	38	51	57- 63	66	51	40-44	39-59	58-70
Условные обозначения: - бактериостатический агент 2,4-диамино-6,7-диизопропилптериоидин X - нет данных; + - положительный результат в 90%; - - отрицательный результат в 90%; +/- - положительный и отрицательный результаты встречаются в равной степени; +(-) или -(+) - в скобках редко наблюдаемый результат.

Таблица 3

Дифференциация патогенных для человека видов рода Vibrio


Признаки	V. chole- rae	V. algino- lyticus	V. cicinna- tiensis		V. dam- sela	V. flu- vialis	V. furni- ssii	V. har- veyi	V. holli- sae	V. met- schni- kovii	V. mimi- cus	V. parahae- molyticus	V. vulni- ficus
1	2	3	4		5	6	7	8	9	10	11	12	13
Морфология
Подвижность	+	+		+	d	d	+	-	+/-	d	+	+		+
Роение на агаре	-	+		-	-	-	-	d	-	-	-	d		-
Индофенолоксидаза	+	+		+	+	+	+	+	+	-	+	+		+
Образование:
газа из глюкозы	-	-		-	-	-	+	-	-	-	-	-		-
индола	+	+		-	-	-	+(-)	+	+	+(-)	+	+		+
ацетилметилкарбинола	+(-)	+		+/-	+	-	-	d	-	+	-	-		-
Ферментация:
лактозы	-	-		-	-	-	-	-	-	+(-)	-(+)	-		d
арабинозы	-	-		+	-	+	+	-	+	-	-(+)	+/-		-
1	2	3		4	5	6	7	8	9	10	11	12		13
сахарозы	+	+		+	-	+	+	d	-	+	-	-		-
целлобиозы	-	-		+	-	-(+)	-(+)	d	-	-	-	-		+
маннита	+	+		-	-	+	+	d	-	+	+	+		+(-)
салицина	-	-		+	-	+/-	-	-	-	-	-	-		+
Аргининдигидролаза	-	-		-	+	+	+	-	-	-(+)	-	-		-
Лизиндекарбоксилаза	+	+		+	+ (-)	-	-	+	-	+(-)	+	+		+
Орнитиндекарбоксилаза	+	d		-	-	-	-	-	-	-	+	+		+
-галактозидаза	+	-		+/-	-	d	d	-	-	d	+	-		d
Нитратредуктаза	+	+		+	+	+	+	+	+	-	+	+		+
Амилаза	+	+		+	X	+	d	+	X	+	-	+		+
Желатиназа	d	+		-	-	+/-	d	-	-	d	d	+		d
Рост в 1%-й пептонной воде с NaCI:
0%	+	-		-	-	-(+)	-(+)	-	-	-(+)	+	-	-
3%	+	+		+	+	+	+	+	+	-(+)	+	+	+
6%	d	+		+	+	+	+	+	d	d	d	+	d
10%	-	+		-	-	-(+)	-	-	-	-	-	-	-
Рост при:
4 °С	-	-		-	-	-	-	-	X	-	-	-	-
20 °С	+	+		-	-	+	+	+	X	+	X	+	+
35 °С	+	+		+	+	+	+	+	X	+	+	+	+
42 °С	+	+		-	-	d	-	d	X	d	d	d	d
45 °С	-	-		-	-	d	-	-	X	d	X	-	-
Биолюминесценция	-(+)	-		-	-	-	-	d	-	-	-	-	-
Чувствительность к 0-129	+	-(+)		-(+)	+	d	-	+	d	+	+	-(+)	+
Условные обозначения: см. обозначения табл.2; - грамотрицательные прямые или изогнутые палочки; d - различный результат.

Таблица 4

Отношение патогенных вибрионов к дифференцирующим углеводам


Виды вибрионов	Ферментация
	арабинозы	маннозы	сахарозы
V. cholerae	-	+(-)	+
V. mimicus	-	+	-
V. metschnikovii	-	+/-	+
V. fluvialis	+	+	+
V. vulnificus	-	+(-)	-(+)
V. alginolyticus	-	+	+
V. parahaemolyticus	+(-)	+	-(+)
V. hollisae	+	-(+)	-
V. furnissii	+	+(-)	+
	с образованием газа
V. damsela	-	+	-
	с образованием газа у некоторых штаммов
V. cincinnatiensis	+	X	+
V.harveyi	-	X	+(-)
Условные обозначения: () - в скобках указан редко встречающийся вариант; + /- - приблизительно 50% штаммов не обладают этими признаками; Х - нет данных.

Возбудителями холеры являются V. cholerae О1 (биоваров классического и эльтор; сероваров Инаба, Огава или Гикошима) и О139 серогрупп.

Токсигенные, эпидемически значимые варианты холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, содержащие гены холерного токсина ( АВ) и токсинкорегулируемых пилей ( А), вызывают заболевания холерой, склонные к эпидемическому распространению.

Нетоксигенные (не содержащие гена холерного токсина), эпидемически неопасные варианты холерных вибрионов О1 могут вызывать спорадические или групповые заболевания холерой при общем источнике заражения.

Вид V. cholerae помимо возбудителей холеры включает холерные вибрионы других О серогрупп, в настоящее время их известно более 200. Отдельные штаммы некоторых из них могут вызывать единичные случаи диарей или заболевания с внекишечной локализацией возбудителя.

Известны отдельные групповые заболевания или вспышки диарей, обусловленных ими, при общем источнике заражения.