Методические указания по осуществлению государственного санитарного надзора за производством и применением полимерных материалов класса полиолефинов, предназначенных для контакта с пищевыми продуктами

3.2. Токсикологические эксперименты на животных

3.2.1. Изучение различных сторон биологического действия вытяжек путем постановки длительных опытов на животных является заключительным этапом исследований по гигиенической оценке полиолефинов.

3.2.2. Токсикологические исследования проводятся при гигиенической оценке новых полиолефинов (см. п.6.1). Кроме того, токсикологические исследования необходимы:

1) Если материал имеет сложную рецептуру, но отсутствуют достаточно чувствительные методы химического определения отдельных гигиенических значимых ингредиентов или соответствующие величины ДКМ.

2) В случаях, когда нельзя исключить возможность образования неизвестных (не идентифицированных) продуктов деструкции полиолефинов в процессе переработки и эксплуатации изделий.

3.2.3. Длительность токсикологических опытов (затравки животных вытяжками) в соответствии с требованиями общей методической схемы постановки подобных исследований обычно составляет 12 мес (6.5; 7.1; 7.5; 7.6; 7.12; 7.16). Вместе с тем, в каждом конкретном случае продолжительность экспериментов устанавливается дифференцированно (применительно к видам, маркам и рецептурам новых полиолефинов; степени изученности в токсикологическом отношении веществ-мигрантов и др.) и может не превышать 7-8 мес (но составлять не менее 6 мес).

3.2.4. Основным видом экспериментальных животных являются беспородные белые крысы (в отдельных случаях, например, в опытах по изучению специфических видов биологического действия применяются белые мыши, проводятся исследования с использованием культуры клеток и др.).

3.2.5. Для экспериментов отбираются молодые, растущие животные с исходным весом (массой) 100-120 грамм (крысы) и 18-20 грамм (мыши). Подбор животных в группы проводится по истечении срока карантина (обычно до 20 сут) в соответствии с общими в токсикологии требованиями (7.12; 7.13; 7.15): идентичности возраста, веса, пола и сопоставимости фоновых показателей (в опытных и контрольных группах). Целесообразно использовать животных одного пола (в большинстве случаев предпочтительно самцов).

3.2.6. Количество животных, необходимое для получения сравнимых (достоверных) результатов устанавливается соответствующими расчетами, исходя из задач исследования, длительности опытов, числа выбранных тестов, требующих забоя животных (например, изучение проницаемости гистогенетических барьеров, витальное окрашивание, исследование гонадотоксического эффекта и других патоморфологических показателей). При этом руководствуются требованием статистики о минимальном числе наблюдений, позволяющих получить репрезентативные данные с вероятностью различий 95% (не менее 5), при определении биохимических и физиологических показателей обычно не менее 8 и 10; при изучении массы тела - все животные.

3.2.7. Число животных в исходный период эксперимента должно превышать расчетное, так как животные с крайними ("выскакивающими") показателями нарушают однородность групп и удаляются из опыта.

3.2.8. Для максимального приближения экспериментов к реальным условиям эксплуатации изделий из новых полиолефинов широкого назначения в качестве изучаемого фактора используют водные и жировые (обычно масляные) вытяжки, которые включают в питание с учетом физиологической структуры рациона для лабораторных животных (крыс, мышей). В отдельных случаях применяют и другие вытяжки (например, молочные и др.), изучают модельные среды (в том числе, воду), сорбировавшие летучие вещества из полиолефиновых изделий (см. выше 3.1.3).

3.2.9. Особенности приготовления вытяжек (по температуре обработки изделий и настаивания, сроке экспозиции) определяется результатами санитарно-химических исследований (исходя из максимальной интенсивности миграции). Для получения водных вытяжек используют водопроводную воду.

3.2.10. Кратность обработки изделия зависит от условий ожидаемого использования на практике:

а) изделия одноразового применения обрабатывают однократно и каждый раз новые, не бывшие в употреблении;

б) изделия многократного, длительного применения обрабатывают или в течение определенного отрезка времени или на протяжении всего срока токсикологического эксперимента (в зависимости от результатов санитарно-химических исследований). В последнем случае рекомендуется проводить периодическое (не реже 1 раза в месяц) санитарно-химическое исследование вытяжек (для получения водной вытяжки используют дистиллированную воду).

3.2.11. Животные содержатся в обычных условиях вивария. Водные вытяжки животные получают из стеклянных поилок специальной конструкции (исключающей потери летучих компонентов вытяжки, обеспечивающей свободное потребление жидкости, позволяющей вести учет выпиваемой жидкости и устраняющей загрязнение корма и питья). Поилки необходимо систематически мыть. Вытяжки (и соответственно воды в контрольной группе) заливают в поилки ежедневно (остатки жидкости при этом сливают и удаляют). Масляные вытяжки добавляют в корм (в процессе эксперимента, по мере роста животных объем масла может быть дозирован пересчетом на единицу массы тела). Контрольные животные получают воду и масло идентичной обработки, хранившиеся в стеклянной таре.

3.2.12. Принудительное введение животным вытяжек должно быть исключено, поскольку не физиологично, связано с необходимостью ежедневного травмирования животных, а в количественном отношении объем жидкости или масла (и, следовательно, изучаемой суммы веществ вытяжки) в несколько раз меньше, чем при свободном потреблении (7.5; 7.8; 7.12; 7.15). Кроме того, при использовании поилок имеется возможность дополнительного увеличения потребления жидкости применением сухих комбинированных кормов (брикетов).

3.2.13. В условиях хронического токсикологического эксперимента необходимо применение некоторых общепринятых интегральных тестов (наблюдение за общим состоянием, внешним видом и шерстным покровом животных; реакцией на внешние раздражители; поедаемостью корма; потреблением жидкости и др.), изучать функциональное состояние наиболее показательных органов и систем (печени, желудка, центральной нервной и сердечно-сосудистой системы, иммунологической реактивности, системы крови и др.). Эксперимент заканчивается патоморфологическим исследованием внутренних организмов*.

_________________

* Текст соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

3.2.14. Выбор методов токсикологического исследования основывается на сведениях о характере избирательного действия мигрирующих из полиолефинов веществ. Можно рекомендовать использование методов из числа апробированных, особенно функциональные нагрузки и их сочетания с выбранными показателями (см. Приложение 8.10).

3.2.15. В условиях сокращенного срока (см. 3.2.3) эксперимент становится более насыщенным за счет широкого применения методов выявления начальных сдвигов в ранимых системах и структурах; биохимических, физиологических и патоморфологических показателей из числа наиболее чувствительных (7.23; Приложение 8.10); включая использование функциональных нагрузок уже на ранних этапах эксперимента (практически с первого месяца).

3.2.16. Частота обследования животных 1 раз в 1-1,5 месяца.

3.2.17. При решении вопроса о безвредности новых полиолефинов особое значение имеют данные о специфическом действии (канцерогенном, гонадотоксическом, мутагенном и др.). Необходимость проведения этих исследований может вытекать из результатов анализа технологии получения пластика (степень очистки исходного сырья от полициклических ароматических углеводородов; особенности синтеза полимера, химическая структура технологических веществ, добавок, красителей и др.).

3.2.18. Судя по опыту гигиенических исследований (7.8; 7.10; 7.12), оценка гонадотоксического действия и мутагенного эффекта может быть проведена не самостоятельно, а непосредственно в процессе хронического общетоксического эксперимента: по оценке функционального состояния сперматогенного эпителия и цитогенетическому анализу клеток костного мозга, а также репродуктивности культуры клеток (см. Приложение 8.10).

3.2.19. Оценка канцерогенности предусматривает проведение самостоятельного эксперимента. В соответствии с требованиями экспериментальной онкологии (7.6; 7.12) наблюдения за появлением и развитием опухолей проводится на протяжении длительности жизни животных (мышей); началу воздействия канцерогеном предшествует фон затравки животных вытяжками (4 месяца). При изучении модифицирующего действия вытяжек на канцерогенез критериями оценки являются: время появления папилом; количественной рост папилом* и их площадь; сроки малигнизации, длительность жизни животных от начала затравки вытяжками и появления папилом*, а также злокачественного перерождения тканей; сроки выживания животных с малигнизированными папиломами*; время гибели 50% животных и другие показатели. Наряду с этим в хроническом общетоксикологическом эксперименте (на крысах) в соответствии с указанными требованиями обязателен учет случаев возникновения опухолей любой локализации (с последующим патоморфологическим изучением).

___________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.     

3.2.20. Определяя объем исследований, важно тщательно проанализировать целесообразность использования того или иного из рекомендуемых показателей примерной схемы (Приложение 8.9), ограничив набор методов адекватным минимумом, достаточным для решения поставленных задач. Поиск, отбор и оценка информативности конкретных методов должны носить творческий характер. Поэтому, разумеется, не исключена возможность использования других методов и методических приемов современной токсикологии (см. 6.5; 7.1; 7.12; 7.13; 7.15; 7.16).