Инструкция по санитарно-химическому исследованию изделий, изготовленных из полимерных и других синтетических материалов, предназначенных для контакта с пищевыми продуктами

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕКСАМЕТИЛЕНДИАМИНА В МОЛОКЕ

Метод основан на выделении гексаметилендиамина посредством бумажной хроматографии с последующим качественным и количественным определением его по реакции с нингидрином.

Метод позволяет обнаружить 1 мкг в 1 мл колориметрируемого раствора, или 1 мг/л.

Реактивы

1. Уксусная кислота, 10% раствор.

2. Уксуснокислый свинец, 10% раствор.

3. Сернокислый натрий, 10% раствор.

4. Этиловый спирт, подкисленный соляной кислотой (100 мл этилового спирта и 0,5 мл конц. соляной кислоты).

5. Подвижный растворитель (н-пропанол, гидрат окиси аммония, вода 6:3:1).

6. Раствор нингидрина в подкисленном уксусной кислотой бутаноле (0,3 г нингидрина, 95 мл бутанола и 5 мл 2М раствора уксусной кислоты).

7. Стандартный раствор гексаметилендиамина (1 мл =1 мг) готовят на дистиллированной воде; рабочий стандартный раствор, содержащий 0,01 мг гексаметилендиамина в 1 мл, готовят из основного раствора с соответствующим разведением дистиллированной водой. Стандартные растворы сохраняются в течение 2 недель.

Аппаратура и материалы

1. Аппарат для хроматографии: два цилиндрических сосуда с прошлифованными краями (диаметр - 20 см и высота аппарата - 50 см).

2. Кристаллизатор (диаметр - 50 см).

3. Бумага для хроматографического анализа марки "Б" ленинградской фабрики N 2 им.В.Володарского.

Ход определения

В один цилиндр емкостью 500 мл вносят 200 мл исследуемого молока, в другой - 200 мл контрольного молока, к которому добавляют стандартный раствор, содержащий гексаметилендиамин в количестве 0,3 мг ("свидетель"), в оба цилиндра приливают по 20 мл 10% уксусной кислоты, по 50 мл 10% уксуснокислого свинца для осаждения белков и осторожно перемешивают стеклянной палочкой. После коагуляции осадка по капле прозрачного раствора из каждого цилиндра переносят на часовые стекла и добавляют к ним по капле уксуснокислого свинца; отсутствие мути указывает на полноту осаждения белков.

Объем содержимого каждого цилиндра доводят до 300 мл водой, перемешивают осторожно стеклянной палочкой и после отстаивания основной массы белков растворы фильтруют в конические колбы.

По 200 мл фильтрата переносят в мерные колбы емкостью 250 мл каждая, избыток уксуснокислого свинца удаляют из растворов, добавляя по каплям 10% раствор сернокислого натрия. Отсутствие мути от последующей капли сернокислого натрия указывает на полноту осаждения уксуснокислого свинца. Далее объем каждой колбы доводят до 250 мл, перемешивают и фильтруют. По 200 мл фильтрата из каждой колбы переносят небольшими порциями в две фарфоровые чашки, в которые предварительно вносят по 30 мл концентрированной соляной кислоты, и выпаривают на водяной бане досуха. Полученные остатки от исследуемого молока и "свидетеля" обрабатывают каждый 10 мл этилового спирта, подкисленного соляной кислотой.

Обработка остатков производится при помешивании стеклянной палочкой и нагревании на водяной бане при 60°С в течение 5 минут.

Спиртовые растворы сливают в цилиндры емкостью 25 мл, остатки в чашках еще раз обрабатывают 10 мл этилового спирта, подкисленного соляной кислотой, как указано выше, и присоединяют к первым извлечениям, доводя объемы растворов подкисленным этиловым спиртом до 20 мл. Затем растворы выдерживают в холодильнике в течение 2 часов. После этого их фильтруют и 15 мл каждого фильтрата выпаривают досуха в фарфоровых чашках на водяной бане. Каждый из остатков растворяют в 3 мл воды.

На определение берут по 0,1 мл исследуемого раствора и "свидетеля". Определение ведут из двух параллельных проб.

Для определения применяют лист хроматографической бумаги (45х30 см), на котором и отмечают стартовую линию (3 см от края). Исследуемые растворы (по 0,01 мл) наносят микропипеткой; нанесение новой порции раствора производят только после высыхания предыдущей капли.

Параллельные пробы наносят на бумагу на расстоянии 5 см друг от друга. По окончании нанесения проб лист бумаги свертывают в виде цилиндра и края сшивают белой ниткой так, чтобы они не накладывались один на другой.

В цилиндрический сосуд для хроматографирования наливают 150-200 мл подвижного растворителя и опускают в него подготовленный в виде цилиндра лист бумаги с нанесенными пробами (при этом бумага не должна касаться стенок сосуда), после чего его накрывают другим таким же цилиндрическим сосудом.

Хроматографирование проводят при температуре 25-26° в течение 6 часов. Далее лист бумаги вынимают из сосуда, сушат под тягой сначала на воздухе, а затем в сушильном шкафу при 105°С в течение 20 минут.