МУК 4.2.1479-03 Энтомологические методы сбора и определения насекомых и клещей-вредителей продовольственных запасов и непродовольственного сырья

3. Обследование на наличие клещей и насекомых

3.1. Методы обследования продовольственных запасов и
непродовольственного сырья и мест их хранения

При проведении обследований и составлении актов необходимо учитывать результаты, приведенные в предыдущих актах. При этом следует обращать внимание не только на живых вредителей, но и на, так называемую "сорную примесь", состоящую из продуктов их жизнедеятельности, мертвых членистоногих, а также на заселяющие запасы виды членистоногих, не являющихся вредителями. Обследованию подлежат не только сами запасы, но и места их хранения, транспортные средства, инвентарь, поскольку они могут служить источниками заражения пищевой продукции вредителями.

3.1.1. Обследование помещений

Обследование обычно начинают с помещений, где хранятся продукты (склады, хранилища и др.). Прежде всего, следует обращать внимание на возможные укрытия для насекомых и клещей: места, плохо доступные или вообще недоступные для очистки, в которых залеживаются продуктовые запасы (сырье) и отмечается повышенная влажность (трещины и щели в полу, стенах, перегородках, пол под лестницами, стеллажами и т.п.). Во всех осмотренных местах подлежат сбору пробы пыли, просыпи семян и других продуктов, растительных остатков, различного мусора. Аналогично проводится обследование тары, оборудования, складского инвентаря, сельскохозяйственных машин, транспортных средств. Обследование продуктов начинают с осмотра поверхности мешков, мест соприкосновения с соседними мешками, складок и швов (снаружи и изнутри), стеллажей и поддонов, затем берут пробы продуктов.

3.1.2. Методы отбора проб

Методы отбора проб для лабораторного исследования большинства видов хранящейся на складах продукции строго стандартизированы и приведены в соответствующих ГОСТах.

Основные правила отбора проб:

- единовременно берут несколько проб одного и того же продукта из разных точек (из середины и 4 углов) и с разной глубины (у поверхности, в средней части, около дна);

- объем (вес) проб должен быть достаточно большим, хотя он различается в зависимости от продукта и величины исследуемой партии. Так, для зерновых, семян бобовых культур и продуктов их переработки вес средней пробы определен в 2 кг. Величина проб пыли, мусора и других субстратов с мест хранения запасов, а также ряда продуктов не регламентирована. Однако следует помнить, что в слишком малой пробе (даже зараженного субстрата) можно не обнаружить вредителей, особенно насекомых.

Собранные пробы помещают в отдельные полиэтиленовые (или бязевые) мешки, точечные пробы одной партии продукта, взятые из разных мест, объединяют. Мешки с пробами плотно закрывают и зтикетируют. В этикетке должны быть указаны населенный пункт, место хранения продукта (адрес), вид продукта, производитель, время и место изготовления, номер партии, время поступления на склад, место в помещении, откуда производился отбор пробы, причина обследования (по плану, в связи с подозрением на возможное заражение продукта, сертификация, по эпидпоказаниям и т.д.), номер акта обследования, дата, фамилия сборщика (обследователя).

При проведении энтомологического контроля изделий из пуха и пера (подушки, куртки и др.), из шерсти животных или изделий с шерстяным наполнением (одеяла, матрасы) из партии товара для исследования выбирают несколько штук из расчета 5 изделий из 100. Изделие распарывают по шву на 10-20 см и из разных точек (с краев, из центра) берут 5-10 проб (примерно 0,3 г каждая). Пробы соединяют, хорошо перемешивают и выбирают для исследования усредненную пробу в 0,1-0,3 г. Для товаров из шкур животных придерживаются той же выборки - 5 изделий из 100.

При исследовании проб в лаборатории данные переносятся в специальный журнал, в котором затем указываются вес (объем) пробы, метод выборки членистоногих, результаты их определения (прилож.1). Этикетки и копии актов обследования сохраняются как приложение к журналу.

3.2. Методы исследования проб для обнаружения членистоногих

3.2.1. Исследование проб проводят не позднее 2 суток после сбора. Методы исследования различных видов продовольствия зависят от продукта и характера повреждений. Так, одни вредители объедают зерно только снаружи, другие - живут и питаются внутри зерен. Некоторые насекомые вытачивают ходы внутри таких продуктов как сухари, галеты, крупяные концентраты и т.п. Обнаружить этих вредителей можно по характеру повреждений, экскрементам и при измельчении исследуемого продукта. Различают зараженность явную и скрытую.

3.2.2. Явную зараженность устанавливают просеиванием через набор сит с отверстиями от 2,5 до 0,5 мм в диаметре. Субстрат, прошедший через все сита, и остатки на ситах исследуют с помощью 10-кратной лупы или стереоскопического бинокулярного микроскопа МБС. Если температура исследуемых образцов была ниже 15-18 °С, то перед определением зараженности их подогревают при 25-30 °С в течение 10-20 мин, пока членистоногие не начнут двигаться. Просматривать субстрат надо вначале на светлом фоне для обнаружения взрослых насекомых и некоторых видов клещей, а затем - на темном, т.к. бесцветные и беловатые амбарные клещи, личинки и куколки насекомых на светлом фоне плохо заметны. Особое внимание следует обратить на комочки и конгломераты, скрепленные паутиной; внутри них могут находиться насекомые. В случае отсутствия взрослых насекомых, личинок, их остатков (фрагментов надкрылий, конечностей, голов, сброшенных личиночных шкурок и т.п.) необходимо проверить наличие их экскрементов. Клещи находятся обычно в отсеве мелкого сита с отверстиями менее 1 мм.

3.2.3. Для выявления скрытой зараженности таких продуктов как зерно, горох, фасоль, орехи и т.п. требуются дополнительные методы исследования. Непосредственный осмотр часто может указать на заражение продукта вредителями. Подозрительные зерна (отличающиеся по цвету, с беловатыми крупинками, более тусклые или с пятнышками) бритвой или скальпелем раскалывают вдоль по бороздке, вскрытые зерна просматривают под бинокулярным микроскопом. Если наружный осмотр не дает результатов, зерна можно разделить по удельному весу при помощи флотации. Для этого пробу помещают в насыщенный раствор поваренной соли (при соотношении объемов субстрата и раствора 1:20), энергично перемешивают и дают отстояться в течение 10-15 минут. При этом зерна, в которых находятся взрослые насекомые, куколки и крупные личинки вредителей, всплывают на поверхность. Зерна с отложенными на них яйцами, или зерна, в которых содержатся мелкие личинки первых возрастов, остаются на дне вместе с неповрежденными семенами. Всплывшие зерна промывают дистиллированной водой, вскрывают и просматривают при помощи лупы или микроскопа МБС. Для обнаружения места откладки яиц и внедрения личинки вредителя в зерно применяют специальное окрашивание марганцовокислым калием, раствором йода или йодистого калия в соответствии с ГОСТами.

3.2.4. Для выявления живых клещей в мелкодисперсном субстрате (мука, пыль) небольшую порцию его помещают на бумагу или в чашку Петри, выравнивают, прижимая сверху другим листком бумаги. Через некоторое время на ровной поверхности появляются отчетливые дорожки - следы передвижения клещей. В небольших пробах живых подвижных клещей можно обнаружить, просматривая образцы в чашках Петри или эмалированных кюветах. Если клещи малоподвижны, выборка их значительно убыстряется и упрощается благодаря активизации клещей воздействием яркого света и повышенных температур, ибо движущихся клещей легче заметить и собрать. Пробу просматривают при ярком освещении настольной лампы, разложив тонким слоем в кювете. В течение 1-3 минут клещи появляются на поверхности пробы и по краям кюветы. Отобранные образцы просматривают при помощи лупы или микроскопа МБС.

3.2.5. Наиболее эффективным методом выявления живых клещей и мелких насекомых в различных субстратах, даже внутри семян, причем с минимальными трудозатратами, является использование фототермоэклектора (рис.1). Последний представляет собой конусовидную картонную или металлическую воронку (разной величины), в верхней трети снабженную вкладышем из металлической сетки с ячейками не более 1 мм. Эклектор устанавливают в вертикальном положении, над ним прикрепляют электрическую лампу 25-40 Вт. Под воронку ставят небольшую емкость (широкий бюкс, чашку Коха или чашку Петри), наполовину заполненную водой (если обитатели субстрата нужны живыми) или 70-75% спиртом с глицерином (см. ниже). Удобно использовать пенициллиновый пузырек, который при помощи резиновой соски прикрепляют к нижнему, узкому концу воронки, при этом диаметр узкого конца воронки должен быть чуть меньше отверстия пузырька или совпадать. На сетку помещают исследуемую пробу (объемом не более 50-70 см). Под действием света, а также по мере нагревания и высыхания пробы членистоногие уходят в более глубокие слои, при этом особи, находившиеся в зернах, покидают их. Спускаясь все ниже и ниже они через сетку попадают в пенициллиновый пузырек. Иногда проходит до 1-2 суток, прежде чем проба полностью высохнет. Для разбора большого количества материала применяют целую батарею эклекторов, соединенных вместе двумя рейками. В полевых условиях при достаточно высокой температуре воздуха можно использовать походные термоэклекторы, воронку которых легко сделать из гладкого картона или ватмана. Такие эклекторы устанавливают (или вешают) днем на улице в защищенном от ветра и солнца месте. Выборку клещей и других членистоногих, попавших в пенициллиновый пузырек, проводят в чашках Петри под бинокулярным микроскопом.

3.2.6. Приведенными выше методами почти невозможно выявить неподвижных или мертвых клещей, линочные шкурки, а тем более яйца. В таких случаях более эффективными являются методы флотации и инкубации. При использовании метода флотации исследуемый субстрат помещают в насыщенный раствор поваренной соли (см. выше). Клещи и линочные шкурки при этом всплывают. Верхний слой отстоявшейся жидкости вместе с клещами сливают через мелкоячеистое сито из мельничного газа. Оставшийся на сите осадок промывают большим объемом дистиллированной воды, освобождая от соли, и исследуют под бинокулярным микроскопом.

3.2.7. Метод инкубации используют для обнаружения яиц при подозрении на зараженность. Для этого исследуемую пробу помещают в стеклянный сосуд, затягивают сверху плотным мельничным газом и выдерживают в термостате при температуре 25 °С и 80% относительной влажности в течение 1-2 недель (для клещей) или при 27-32 °С и той же влажности не менее 1,5 месяцев (для насекомых). Этих сроков достаточно, чтобы убедиться в зараженности пробы яйцами. В благоприятных условиях термостата из них появляются личинки, которых легко обнаружить при помощи бинокулярного микроскопа.

3.2.8. Для обнаружения клещей в изделиях из пера птиц удобен метод мацерации. Пробу пера или соскоб мелкого пера и пуха с внутренней стороны ткани (0,3-0,5 г) помещают в пробирку или пенициллиновый флакон и заливают 3-5 мл 10% едкой щелочи (щелочь должна полностью смочить перо). Открытый сосуд берут большим пинцетом и, направляя горлышком от себя, держат, покачивая, над пламенем горелки, постепенно доводя раствор до кипения, и кипятят не более 1-2 мин. При таком кратковременном нагревании кутикула клещей, оболочки яиц, шарики экскрементов не разрушаются, а перо мацерируется. Образовавшуюся желто-коричневую гомогенную жидкость сливают в маленькую чашку Петри (если жидкости слишком мало, ее можно разбавить водой) и исследуют под бинокулярным микроскопом. Клещей выбирают и промывают, помещая в чашку Петри или часовое стекло с водой.

При исследовании изделий из шкур и меха животных клещей и насекомых выбирают вручную или вычесывают частым гребнем.

3.2.9. При работе всеми приведенными выше методами клещей, личинок и куколок насекомых выбирают тонким глазным пинцетом, препаровальной иглой или кисточкой, смоченными в воде или в спирте. Если есть возможность, клещей прямо из исследуемого субстрата заключают в препараты (см. ниже) во избежание потерь мелких особей. Если такой возможности нет, клещей помещают в пенициллиновый или другой плотно закрывающийся небольшой стеклянный пузырек с 70-75%-ным раствором этилового спирта. При необходимости длительного хранения спиртовых сборов, желательно добавить небольшое количество глицерина (около 5%). Взрослых насекомых хранят как принято в энтомологических коллекциях. Кратковременно сохранить клещей живыми можно в пробирке с влажной фильтровальной бумагой. Во всех случаях собранный материал должен быть снабжен этикеткой (место и номер сбора, субстрат, дата).

Оценка уровня зараженности продуктов проводится по стандартным методикам в соответствии с ГОСТами.

3.3. Методика изготовления микроскопических препаратов