Р 4.1.1672-03 Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище

4. Метод определения фосфолипидов (определение суммарного фосфора)

Метод основан на способности фосфора, соединяясь с молибденом аммония образовывать фосфорномолибденовую кислоту, которая восстанавливается амидоловым реагентом и дает голубое окрашивание.     

Специфические приборы и реактивы

Спектрофотометр.

Молибдат аммония, 8,4%-ный.

Амидоловый реагент, 1%-ный, свежеприготовленный.

Спиртовой раствор фосфора, 1,097 г растворяют в 250 см воды, этот запасной раствор разбавляют водой и получают рабочий раствор, содержащий 10 мкг фосфора в 1 см.     

Подготовка проб

Пипеткой отбирают аликвотную часть раствора липидов (содержащую 10-100 мкг фосфора, но не более 2 мг липидов) и переносят ее в толстостенную пирексовую пробирку с делениями, соответствующими 12,5 и 25 см. Растворитель упаривают досуха в токе воздуха при 350 °С, к остатку прибавляют 2,0 хлорной кислоты, немного стеклянных шариков и нагревают пробирку на электрической плитке или газовой горелке до тех пор, пока раствор не станет прозрачным и бесцветным. Охлажденный раствор разбавляют водой по 12,5 см, тщательно перемешивают, добавляют 1,0 см раствора молибдата аммония, перемешивают и оставляют на 20 мин до появления голубой окраски.     

Проведение испытания

Окрашенный раствор разбавляют водой по 25 см, перемешивают. На спектрофотометре типа СФ-46 в парных кюветах 1 см определяют поглощение при 680 нм полученного раствора и р-ра холостого опыта.

Обработка результатов

Расчет производят по калибровочной кривой, построенной по стандартному раствору . Используют аликвотные пробы стандартного раствора, содержащие от 30 до 60 мкг фосфора. Закон Бера соблюдается в интервале 10-100 мкг фосфора.