Р 4.1.1672-03 Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище

3.2. Определение состава стеринов методом ГЖХ

Метод основан на прямом газохроматографическом анализе стеринов, выделенных из липидов путем тонкослойной хроматографии фракции неомыляемых веществ.     

Условия проведения анализа

Выделение липидов проводят одним из унифицированных методов, предложенным для данного продукта и исключающим разрушение стеринов.

Экстракцию неомыляемых веществ следует проводить, по возможности быстро, предохраняя пробы от попадания на них прямого солнечного света.

Отгонку диэтилового эфира из проб следует проводить под вакуумом водоструйного насоса при комнатной температуре.     

Подготовка к проведению анализа

Подготовку проводят по п. "Колориметрический метод определения содержания стеринов".

Проведение анализа

Выделение стеролов из липидов

Омыление липидов, экстракцию неомыляемых веществ, выделение стеринов методом тонкослойной хроматографии проводят по п. "Колориметрический метод определения содержания стеринов".     

Газохроматографический анализ

Аппаратура, используемая для проведения анализа, выбор оптимальных условий для разделения стеринов, определение эффективности хроматографических колонок изложены в п. выше.

Устанавливают следующие условия анализа на хроматографе: стеклянная или стальная колонка длиной 1,5-2,0 м и внутренним диаметром 3-4 мм, заполненная силанизированным целитом 545 (60-100 меш), обработанным 3% полиметилсилоксаном SE-30 или аналогичной неподвижной фазой. Скорость потока газа-носителя 60-100 см/мин. Температура термостата колонки 250-270 °С, инжектора 300 °С, детекторов 280 °С.

Вводят в хроматограф около 3 мкл каждого компонента.     

Обработка результатов

Рассчитывают площади пиков каждого компонента () по формуле:

, где

- ширина i-го пика на половине его высоты, мм;

- высота i-го пика, мм;

- поправочный коэффициент.

Для получения поправочных коэффициентов составляют 3-4 стандартные смеси стеролов, входящих в исследуемые образцы, и холестерола. По хроматограммам стандартных смесей, полученных в идентичных условиях, определяют поправочные коэффициенты по отношению к холестеролу, коэффициент которого принят за единицу, по формуле:

, где