4 Сущность метода
4.1 Сущность метода
В основе метода [1, 2, 3] лежит реакция ферментативного гидролиза сахарозы с помощью ФЗ с образованием равных количеств D-глюкозы и D-фруктозы. В последующей реакции, катализируемой ферментом ГК с участием АТФ, D-глюкоза (общая глюкоза), которая образовалась при гидролизе сахарозы и D-глюкоза, содержащаяся в исходной пробе (свободная глюкоза), подвергается фосфорилированию по шестому атому углерода с образованием Г-6-Ф. Под действием НАДФ Г-6-Ф в присутствии Г6Ф-ДГ преобразуется в глюконат-6-фосфат и НАДФН. Массовая концентрация образовавшегося НАДФН эквивалентна массовой концентрации преобразованной D-глюкозы (4.2). Количественное измерение НАДФН осуществляется спектрофотометром (фотометром).
Массовая концентрация сахарозы пропорциональна разности оптических плотностей растворов НАДФН, полученных преобразованием исходной пробы (свободная глюкоза) и пробы, в которой проведен ферментативный гидролиз сахарозы (общая глюкоза).
В соках, нектарах и сокосодержащих напитках с низкой массовой концентрацией сахарозы - менее 5 г/дм (содержание сахарозы в природных фруктовых и овощных соках приведено в приложении А) и высокой массовой концентрацией D-глюкозы перед количественным определением сахарозы проводят йодное окисление избытка глюкозы в щелочной среде.
4.2 Реакции, происходящие при определении сахарозы
(1)
(2)
(3)