МУК 4.2.1111-02

     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса)
 для санитарно-микробиологического исследования питьевой воды

     

Дата введения 2002-05-01

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С.) при участии фирмы “SY-LAB”, Австрия (М.Шинкингер, Соколов Д.М.).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. N 12 от 14 февраля 2002 г.).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 26 февраля 2002 г.

4. С момента ввода данных методических указаний считаются утратившими силу “Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований питьевой воды с использованием микробиологического экспресс-анализатора “Бак Трак 4100” N 01-19/82-23 от 22.05.96 и раздел 6 “Исследование питьевой воды” методических указаний МУК 4.2.590-96 “Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора “Бак Трак 4100”.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для центров государственного санитарно-эпидемиологического надзора, осуществляющих контроль качества питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения, а также для лабораторий, организаций, предприятий и иных хозяйственных субъектов, обеспечивающих производственный контроль.

1.2. Методические указания устанавливают ускоренный метод качественного и количественного определения индикаторных микроорганизмов в питьевой воде в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 “Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества”.

1.3. Настоящие методические указания разработаны для осуществления объективного, достоверного и быстрого санитарно-микробиологического анализа питьевой воды с целью контроля ее качества и для обеспечения безопасности и безвредности воды в централизованных системах питьевого водоснабжения.

2. Сущность метода

Методические указания содержат описание санитарно-микробиологического исследования питьевой воды по показателям качества СанПиН 2.1.4.1074-01 “Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества” с использованием микробиологического экспресс-анализатора “Бак Трак 4100"* производства австрийской фирмы “SY-LAB”.

_______________

* Далее “Бак Трак”.

Предлагаемый анализатор является автоматизированной системой, созданной на основе импедансной технологии и предназначенной для ускоренной количественной и качественной оценки степени микробного загрязнения исследуемой пробы.

Импеданс - это сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал. Импедансная технология в микробиологии является непрямым культуральным методом для определения микроорганизмов с использованием измерения электрического сопротивления. Изменения импеданса происходят в питательной среде по мере того, как ее химический состав преобразуется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов. Под действием микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую среду.

В основном незаряженные или слабозаряженные субстраты превращаются в сильнозаряженные конечные продукты: белки утилизируются до аминокислот, углеводы и жиры - до органических кислот и т.д. Образующиеся метаболиты имеют меньший размер и, таким образом, более подвижны. Эти электрохимические процессы приводят к существенным изменениям импеданса. Когда количество микроорганизмов достигает порога около 10-10 клеток/мл, наблюдаются экспоненциальные изменения импедансного сигнала. Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса, называется временем определения импеданса (IDT). Значение IDT обратно пропорционально начальной концентрации микроорганизмов в исследуемой пробе. Ход кривых импедансного сигнала соответствует и отражает кривую роста микроорганизмов в исследуемой пробе.

Селективные питательные среды, специально разработанные для измерения импеданса в системе “Бак Трак 4100”, позволяют определять микробиологические показатели качества питьевой воды в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 и сокращают сроки получения результатов.

3. Нормативные ссылки

3.1. Федеральный закон “О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения” от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ.

3.2. “Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан” от 22.07.93 N 5487-1.

3.3. Санитарные правила и нормы “Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества”. СанПиН 2.1.4.1074-01.

3.4. Методические указания “Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды”. МУК 4.2.1018-01.

3.5. Методические указания “Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора “Бак Трак 4100”. МУК 4.2.590-96.

4. Проведение анализа

Исследование проводится по микробиологическим показателям качества питьевой воды, регламентированным СанПиН 2.1.4.1074-01 “Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества”.

Определяемые показатели:

1. Общее число микроорганизмов в 1 мл.

2. Общие колиформные бактерии в 100 мл.

3. Термотолерантные колиформные бактерии в 100 мл.

4. Споры сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.

5. Колифаги в 100 мл.

Отбор, хранение и транспортирование проб для исследования, а также подготовка их к анализу и методика работы при использовании мембранных фильтров проводятся в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 “Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды”.

4.1. Определение общего числа микроорганизмов

1. Питательная среда: BiMedia 001 А, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя.

2. Протокол измерения:

2.1. Установить температуру 37 °С на приборе “Бак Трак”.

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):

Время исследования (Duration) - 24 ч

Масштаб измерений (Scale):

3. Установка пороговых значений (Thresholds):

3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды - WATER.COR).

3.2. При отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 001 А производится определение общего количества бактерий классическим методом на чашках Петри в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 “Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды”.

Наименования рекомендуемых для использования в данном случае питательных сред приведены в разделе 6 данных методических указаний.

Результаты, полученные при классическом методе исследования (KOE/CFU в 1 мл), вносят в соответствующий файл (MAIN MENU / DATA FUNCTION / ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 001 А.

5. Внести 1 мл исследуемого образца воды в измерительную ячейку с 9 мл питательной среды.

6. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).

7. Для контроля среды используют одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 001 А (без инокулята).

8. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение.

9. После того, как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор “Бак Трак”.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

При пересечении порогового значения происходит автоматический подсчет численности микроорганизмов в исследуемом образце воды.

Результат определения КОЕ (CFU) выдается автоматически в виде количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого образца воды.

Учет результатов проводится по М-параметру.

4.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

Исследование может проводиться одним из трех методов:

1) мембранной фильтрации с последующим тестированием на микробиологическом экспресс-анализаторе “Бак Трак”;

2) титрационным с предварительным этапом накопления бактерий в жидкой питательной среде;

3) прямого измерения с использованием измерительных ячеек прибора “Бак Трак” объемом 100 мл.

4.2.1. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод)

Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из установленного объема анализируемой пробы воды и дальнейшем определении показателя на приборе “Бак Трак”. Используется метод мембранных фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01 “Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды”.

1. Среда BiMedia 160 B*, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя.

________________

* Возможно использование питательной среды BiMedia 160 С при необходимости определения индолообразования.

2. Протокол измерения:

2.1. Установить температуру 37 °С на приборе “Бак Трак”.

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Время исследования (Duration) - 24 ч

Масштаб измерений (Scale):

3. Установка пороговых значений (Thresholds):

3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные бактерии - COLI.COR).

3.2. В отсутствие калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 160 В производится определение наличия колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01.