МУК 4.2.801-99 Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции

3.2. Подготовка проб к анализу

3.2.1. Подготовка проб для определения микробиологической чистоты

3.2.1.1. Перед вскрытием упаковки место соединения крышки с тарой обрабатывают 70%-ным раствором этилового спирта. Первую порцию в количестве примерно 10% содержимого упаковки отбрасывают, затем отбирают пробы и переносят в стерильную колбу или флакон вместимостью 100-200 см.

3.2.1.2. Для испытания готовят среднюю пробу не менее 15 г (см) из упаковок, отобранных по п.3.1.3, и состоящую из равных разовых проб. Такое же количество упаковок используют и для повторных испытаний. В случае, если масса (объем) парфюмерно-косметического средства в единичной упаковке менее 5 г (см), содержимое исследуют полностью или используют большее количество упаковок.

3.2.1.3. (5,0±0,1) г (см) или (10,0±0,1) г (см) средней пробы отбирают стерильно и помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45±1) см или (90±1) см 1%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе (п.6.4.2). Смесь тщательно перемешивают в течение 15-30 мин до полной гомогенизации (либо помещают на аппарат для встряхивания). При необходимости пробы прогревают на водяной бане или в термостате до 40-45 °С, но не более 10 мин. Для гомогенизации продукции, плохо растворимой в воде, используют стеклянные бусы.

Эмульсии типа вода-масло подготавливают аналогичным способом, используя 4%-ный раствор твина-80 в физиологическом растворе (п.6.4.2) и предварительно (до встряхивания) прогревая на водяной бане или в термостате до 40-45 °С в течение 20 мин.

Получают смесь, в 10 г (см) которой содержится 1 г (см) парфюмерно-косметического средства - первое разведение 1:10 (10). При необходимости делают последующие десятикратные 1:100 (10) и 1:1000 (10) разведения.

3.2.1.4. Полученные разведения используют для посевов. Время с момента окончания подготовки пробы до начала высева не должно превышать 30 мин.

3.2.1.5. Определение собственной антимикробной активности парфюмерно-косметической продукции.

Метод основан на подавлении роста тест-штаммов микроорганизмов под действием испытуемого парфюмерно-косметического средства. В качестве тест-штаммов используют Bacillus subtilis АТСС 6633 (или Bacillus cereus АТСС 10702), Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 (или Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453), Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р и культуру Candida albicans АТСС 885-653.

Определение собственной антимикробной активности проводится для парфюмерно-косметических средств, в состав которых входят консерванты и другие вещества, обладающие антимикробным действием.

Собственная антимикробная активность определяется однократно для каждой конкретной рецептуры парфюмерно-косметического средства.

Культуры Bacillus subtilis (Bacillus cereus), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus выращивают на одной из жидких сред по п.6.4.11.1 или п.6.4.11.2 при температуре (37±1) °С в течение (19±1) ч. Культуру Candida albicans выращивают на жидкой среде Сабуро по п.6.4.8.1 при температуре (30±1) °С в течение (48±3) ч.

Из каждой выросшей культуры готовят взвесь микроорганизмов, добавляя физиологический раствор по п.6.4.1 в соотношении 1:1000.

В пробирки вносят по 1 см первого разведения испытуемой пробы парфюмерно-косметического средства по п.3.2.1.3 и добавляют:

- в пробирку N 1 - 10 см буферного раствора по п.6.4.16 и 1 см взвеси Bacillus subtilis (Bacillus cereus);

- в пробирку N 2 - 10 см буферного раствора по п.6.4.16 и 1 см взвеси Candida albicans;

- в пробирку N 3 - 10 см одной из питательных сред по п.6.4.9 и 1 см взвеси Escherichia coli;

- в пробирку N 4 - 10 см одной из питательных сред по п.6.4.11 и 1 см взвеси Pseudomonas aeruginosa;

- в пробирку N 5 - 10 см одной из питательных сред по п.6.4.13 и 1 см взвеси Staphylococcus aureus.

Контролем служат пробирки с питательными средами и соответствующими тест-штаммами, в которые вместо испытуемого парфюмерно-косметического средства вносят то же количество стерильной дистиллированной воды.

Посевы инкубируют при (30±1) °С в течение (48±3) ч.

В случае отсутствия роста тест-штаммов микроорганизмов на соответствующих питательных средах отмечают антимикробное действие испытуемого средства.

Для устранения антимикробного действия входящих в состав парфюмерно-косметических средств консервантов или веществ, обладающих антимикробным действием, среднюю пробу в количестве (5,0±0,1) г (см) или (10,0±0,1) г (см) отбирают стерильно и помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45±1) см или (90±1) см 4%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе, или увеличивают разведение испытуемой пробы.

Дальнейшие испытания проводят в соответствии с п.4.

3.2.2. Подготовка проб к анализу на стерильность

Испытание парфюмерно-косметических средств на стерильность проводят методом прямого посева или методом мембранных фильтров.

Метод мембранных фильтров не применим для суспензий или гомогенатов парфюмерно-косметических средств, загрязняющих при фильтрации поры фильтров.

3.2.2.1. Перед вскрытием ампулы с парфюмерно-косметической продукцией обрабатываются этиловым спиртом. Шейка ампулы осторожно прогревается в пламени горелки. На хорошо прогретую шейку ампулы капают 1 каплю стерильного физиологического раствора (п.6.4.1). Ампулы осторожно вскрывают по месту образовавшейся в стекле трещины.

3.2.2.2. Содержимое 10 ампул или 10 других упаковок объединяют в единую пробу. Из объединенной пробы отбирают стерильно (5,0±0,1) г (см) или (10,0±0,1) г (см) парфюмерно-косметического средства.