Методические указания по санитарно-бактериологическому контролю на предприятиях общественного питания и торговли пищевыми продуктами

     4.3. Метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов в 1 г (мл) продукта - (Общее микробное число - ОМЧ) - "МАФАнМ"

Метод основан на способности мезофильных аэробов и факультативных анаэробов расти на питательных средах определенного состава при температуре 30°С с образованием колоний, видимых при увеличении в 2 раза.

Для определения количества мезофильных бактерий следует выбирать разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 30 и не более 300 колоний.

Из каждой пробы делают посев глубинным методом на 2 параллельные чашки Петри из 2-3 последовательных разведений в количестве 1,0 мл, используя для этого 2%-й агар, приготовленный из сухого питательного агара (см. стр.44)*. Контролировать температуру надежнее и проще, если агар разливают небольшими порциями в пробирки (12-15 мл). Агар в пробирках быстрее расплавляется и охлаждается более равномерно до нужной температуры. Чашки заливают расплавленным и остуженным до 45°С агаром сразу же после внесения материала. В противном случае может наблюдаться неравномерное распределение колоний в виде отдельных скоплений в толще агара; для более равномерного распределения посевного материала, кроме того, содержимое чашки перемешивают вращательными движениями.

__________________

* См. п.6. - Примечание изготовителя базы данных.

После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат дном вверх, инкубируют по рекомендации ФАО/ВОЗ при 30°С в течение 72 часов; при необходимости предварительный учёт производят через 48 часов. Количество колоний подсчитывают на каждой из засеянных чашек. Счёт колоний на чашках производят с помощью прибора для счёта колоний бактерий или лупы. Для лучшей видимости считают колонии на тёмном фоне (под чашку кладут тёмную бумагу), чашки помещают дном кверху. Каждую колонию отмечают на дне чашки чернилами или тушью.

При подсчёте придерживаются следующих правил:

а) если на чашке выросло небольшое количество колоний, примерно до 100, подсчитывают все колонии;

б) если колонии распределены равномерно и их количество измеряется несколькими сотнями (200-300 колоний), допускается подсчёт колоний не менее чем на 1/3 площади чашки. В этих случаях дно чашки делят карандашом на 6 секторов и считают колонии в 3 секторах. Затем делают пересчёт на всю площадь чашки: вычисляют среднее количество колоний на площади одного сектора и полученное количество колоний на одном секторе умножают на 6;

в) если на чашке вырастает более 300 колоний, они распределены равномерно и не представляется возможным повторить анализ, то, применяя прибор для счёта колоний бактерий, подсчитывают 10 полей зрения площадью до 1 см в разных местах чашки. Полученные числа складывают и выводят среднее арифметическое. Чтобы высчитать количество колоний на всей чашке, полученное среднее число умножают на площадь чашки (). Обычно диаметр чашки равен 8,5-10 см, =3,14. Подставив данные в формулу, получаем при диаметре чашки, равном 10 см, площадь чашки 78,5 см. При отсутствии прибора для счёта колоний бактерий можно использовать обычную миллиметровую бумагу, в которой вырезают “окошко” площадью 1 см. Подсчёт колоний производят с лупой, как указано выше.      

Пример, если среднее число колоний на 1 см составляет 18, диаметр чашки 10 см, то число колоний на всей площади чашки 18х78,5=1413, округляя в ответе, указывают 1400.

Число колоний, выросших на чашке, должно отражать количество жизнеспособных микроорганизмов, содержащихся в засеянном объёме исследуемого материала. Поскольку последний, как правило, засевают в разведенном виде, число выросших на чашке колоний умножают на степень взятого разведения, рассчитывают среднее арифметическое и устанавливают количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов в 1 г (мл) продукта.

При установлении количества мезофильных бактерий не все чашки могут быть использованы для вычисления среднего арифметического:

а) нельзя использовать посевы для вычисления среднего арифметического, если количество выросших колоний на чашках менее 30. В этом случае в протокол исследований вносят показатели обсемененности, полученные при подсчёте колоний только по одной или двум чашкам, число колоний на которых больше 30. В случае роста колоний на засеянных чашках в количестве менее 30, в результатах анализа рекомендуется следующая формулировка: "Рост единичных колоний при посеве (указать количество засеянного продукта)".