ГОСТ Р 51198-98
(ИСО 4134-78)

Группа Н19

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Метод определения -(+)-глутаминовой кислоты

Meat and meat products. Method for determination of  -(+)-glytamic acid content

ОКС 67.120.10

ОКСТУ 9209

Дата введения 2000-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. N 336

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4134-78 "Мясо и мясные продукты. Определение содержания -(+)-глутаминовой кислоты" с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (2, 4, 6.6, 6.8, 6.12, 6.13, 7.1 и 9.1)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2010 г.

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения -(+)-глутаминовой кислоты.

     2 Нормативные ссылки

ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

     3 Определение

Массовая доля -(+)-глутаминовой кислоты - массовая доля -(+)-глутаминовой кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.

     4 Сущность метода

-(+)-глутаминовую кислоту экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют и доводят активную кислотность фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование -(+)-глутамата в -кетоглутарат в ходе реакции с никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) в присутствии глутаматдегидрогеназы (ГДГ):

-(+)-глутамат + НАД + НО -кетоглутарат + НАДН + NН + Н.

Затем окисляют эквивалентное количество восстановленной формы НАДН хлоридом йодонитротетразолия (ИНТ) в присутствии липоаминдегидрогеназы (ЛАДГ):

НАДН + ИНТ-хлорид + Н HAД + формазан.

Измеряют массовую долю образовавшегося формазана на спектрофотометре при длине волны 492 нм.

     5 Реактивы

Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.

Примечание - Однократно дистиллированная вода может содержать ионы металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неспецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.

Препарат НАД должен содержать не менее 90% основного вещества.

-(+)-глутаминовая кислота должна содержать не менее 98% основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия качества реактивов требованиям настоящего стандарта.

5.1 Раствор хлорной кислоты (HClO)=1,0 моль/дм

8,6 см раствора хлорной кислоты массовой доли 70% и плотности 1,67 г/см помещают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят объем раствора до метки водой.

Примечание - При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемой для осаждения белков.

5.2 Раствор гидроксида калия (KOH)=2 моль/дм

Растворяют 56,1 г гидроксида калия (KOH) в воде, доводят объем раствора до 500 см.

5.3 Буферный раствор активной кислотности 8,6 рН

5.3.1 Растворяют 1,86 г гидрохлорида триэтаноламина в воде, доводят активную кислотность раствора до 8,6 рН раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений рН-метр. Затем добавляют 0,68 г октилфенолдекаэтиленгликолевого эфира (например, Тритон =100) и доводят объем раствора до 100 см водой.

5.3.2 Растворяют 0,86 г двузамещенного фосфорнокислого калия (KНРO) и 0,007 г однозамещенного фосфорнокислого калия (KНРO) в воде и доводят объем раствора до 100 см.

5.3.3 Смешивают 20 см раствора по 5.3.1 и 5 см раствора по 5.3.2.

Раствор хранят при температуре 4 °С.

5.4 Раствор НАД

Навеску НАД массой 0,025 г растворяют в 5,0 см воды в небольшой колбе со шлифом, колбу закрывают пробкой.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

5.5 Раствор йодонитротетразолия [2-(р-йодофенил)-3-(р-нитрофенил)-5-фенилтетразолия] хлорида (ИНТ-хлорида)

Растворяют 0,030 г ИНТ-хлорида в 50 см воды, колбу закрывают пробкой.

Раствор устойчив не менее 2 мес при температуре 4 °С в темноте.

5.6 Раствор ЛАДГ

Растворяют 0,003 г лиофильно высушенной липоаминдегидрогеназы в 1 см воды.

Раствор устойчив не менее трех недель при температуре 4 °С.

5.7 Раствор ГДГ

Используют раствор глютаматдегидрогеназы концентрации 10 мг/см, свободный от сульфата аммония, этилендиаминтетрауксусной кислоты и глутаминазы, поставляемый в готовом виде (например в расфасовке по 1,0 см), удельной активностью не менее 900 Е/см.

Раствор устойчив не менее 12 мес при температуре 4 °С.

5.8 Стандартный раствор -(+)-глутаминовой кислоты

Растворяют 0,050 г -(+)-глутаминовой кислоты в 25 см воды. Активную кислотность раствора устанавливают 7,0 рН раствором гидроксида калия (5.2), после чего доводят объем раствора до 50 см.

Раствор хранят при температуре 4 °С и непосредственно перед использованием разводят водой в соотношении объемов 1:49.

     6 Средства контроля и вспомогательные устройства

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1-6.11.

6.1 Мясорубка механическая лабораторная, снабженная перфорированной пластинкой с отверстиями диаметром не более 4 мм.

6.2 Миксер лабораторный.

6.3 Центрифуга лабораторная с пробирками вместимостью 50 или 100 см.

6.4 Иономер или рН-метр диапазоном измерений от 1 до 14 рН и допускаемой погрешностью ±0,05 рН.

6.5 Фильтры бумажные гофрированные диаметром 15 см.

6.6 Колбы мерные вместимостью 100 и 250 см и допускаемой относительной погрешностью ±0,2%.

6.7 Дозаторы пипеточные объемами доз 25, 50 и 100 см и относительной погрешностью дозирования ±1%.

6.8 Пипетки градуированные вместимостью 0,05; 0,2; 0,5 и 2,5 см и допускаемой относительной погрешностью ±1%.

6.9 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.10 Спектрофотометр (фотометр) со следующими техническими характеристиками: спектральный интервал - не более 10 нм; интервал измерений оптической плотности - от 0,000 до 2,000; погрешность установки длины волны - ±3 нм; среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности измерений - не более 0,15%.

6.11 Кюветы фотометрические толщиной поглощающего слоя 10 мм.