ГОСТ Р 51197-98
(ИСО 4133-79)

Группа Н19

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Метод определения глюконо--лактона

Meat and meat products. Method for determination of glucono--lactone content

ОКС 67.120.10

ОКСТУ 9209

Дата введения 2000-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. N 335

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4133-79 "Мясо и мясные продукты. Определение содержания глюконо--лактона" с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (6.6, 6.8, 6.12, 7.1 и 9.1)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2010 г.

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения глюконо--лактона.

     2 Нормативные ссылки

ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

     3 Определение

Массовая доля глюконо--лактона - массовая доля глюконо--лактона, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.

     4 Сущность метода

Глюконо--лактон экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют, затем проводят гидролиз глюконо--лактона, содержащегося в фильтрате, гидроксида калия с образованием глюконата.

Преобразуют глюконат в 6-фосфоглюконат в ходе реакции с аденозин-5-трифосфатом (АТФ) в присутствии глюконаткиназы (ГК):

глюконат + АТФ 6-фосфоглюконат + АДФ.

Восстанавливают 6-фосфоглюконатом эквивалентное количество никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) в присутствии 6-фосфоглюконатдегидрогеназы (6-ФГДГ):

6-фосфоглюконат + НАДФ НАДФН + СО + Н + рибулозо-5-фосфат.

Измеряют массовую долю образовавшейся восстановленной формы никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФН) на спектрофотометре при длине волны 365 нм.

     5 Реактивы

Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.

Примечание - Однократно дистиллированная вода может содержать ионы металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неспецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.

Препарат НАДФ должен содержать не менее 90% основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.

5.1 Раствор хлорной кислоты (HClO)=0,4 моль/дм

17,3 см раствора хлорной кислоты массовой доли 70% и плотности 1,67 г/см помещают в мерную колбу вместимостью 500 см и доводят объем раствора до метки водой.

Примечание - При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемого для осаждения белков.

5.2 Раствор гидроксида калия (KOH)=2 моль/дм

Растворяют 56,1 г гидроксида калия в воде, доводят объем раствора до 500 см.

5.3 Буферный раствор активной кислотности 8,0 рН

Растворяют 2,64 г глицилглицина (СНNO) и 0,284 г хлорида магния гексагидрата (MgCl·6НО) в 150 см воды. Устанавливают активную кислотность раствора 8,0 рН при 20 °С раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений рН-метр. Доводят объем раствора до 200 см.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °

С.

5.4 Раствор НАДФ

Растворяют 50 мг динатриевой соли никотинамидадениндинуклеотидфосфорной кислоты (НАДФ-Na) в 5,0 см воды.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

5.5 Раствор аденозин-5-трифосфата (АТФ)

Растворяют 250 мг динатриевой соли аденозин-5-трифосфорной кислоты (АТФ-Na) и 250 мг гидрокарбоната натрия (NaHCO) в 5,0 см воды.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

5.6 Суспензия 6-ФГДГ

Используют поставляемую в готовом виде суспензию 6-фосфоглюконатдегидрогеназы из дрожжей, содержащую 6-ФГДГ концентрации 2,0 мг/см и удельной активности не менее 220 Е/см, а также глюконаткиназу и НАДФН-оксидазу массовых долей не более 0,05% каждого.

Суспензия устойчива не менее 6 мес при температуре 4 °С.

5.7 Суспензия ГК

Используют поставляемую в готовом виде суспензию глюконаткиназы из E.coli, содержащую ГК концентрации 1,0 мг/см и удельной активности не менее 26 Е/см и НАДФН массовой доли не более 0,05%.

Суспензия устойчива не менее 6 мес при температуре 4 °С.

     6 Средства контроля и вспомогательные устройства

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1-6.11.

6.1 Мясорубка механическая лабораторная, снабженная перфорированной пластинкой с отверстиями диаметром не более 4 мм.

6.2 Миксер лабораторный.

6.3 Центрифуга лабораторная с пробирками номинальной вместимостью 50 или 100 см.

6.4 Иономер или рН-метр диапазоном измерений 1-14 рН и допускаемой погрешностью ±0,05 рН.

6.5 Фильтры бумажные гофрированные диаметром 15 см.

6.6 Колбы мерные вместимостью 100, 200 и 250 см и допускаемой относительной погрешностью ±0,2%.

6.7 Дозаторы пипеточные объемами доз 25 и 100 см и относительной погрешностью дозирования ±1%.

6.8 Пипетки градуированные вместимостью 0,01; 0,05; 0,1; 0,5 и 2,5 см и допускаемой относительной погрешностью ±1%.

6.9 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.10 Спектрофотометр (фотометр) со следующими техническими характеристиками: спектральный интервал - не более 10 нм; интервал измерений оптической плотности - от 0,000 до 2,000; погрешность установки длины волны - ±3 нм; среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности измерений - не более 0,15%.

6.11 Кюветы фотометрические толщиной поглощающего слоя 10 мм.

6.12 Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ±0,001 г.

     7 Порядок подготовки к проведению измерения

7.1 Отбор проб - по ГОСТ Р 51447.

7.2 Пробу массой не менее 200 г, полученную из репрезентативной выборки, хранят в условиях, предотвращающих порчу и изменение состава.

     8 Порядок проведения измерений

8.1 Подготовка пробы к проведению измерений

Образец пробы гомогенизируют, дважды пропуская через мясорубку (6.1) и тщательно перемешивая.

Образец хранят не более 24 ч в заполненном доверху, герметически закрытом контейнере таким образом, чтобы предотвратить порчу или изменение состава.

8.2 Навеска для проведения анализа