ГОСТ 13496.7-97 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения токсичности (с Изменением N 1)

     4 Определение токсичности биопробой на кроликах (основной метод)

4.1 Сущность метода

Сущность метода заключается в проведении исследований на коже кролика, основанных на дермонекротическом действии токсичных веществ микогенного происхождения, извлекаемых из кормов ацетоном.

4.2 Аппаратура, материалы и реактивы:

- шкаф вытяжной;

- аппарат для встряхивания жидкостей;

- мельница лабораторная марки МРП-2 или других аналогичных марок;

- весы лабораторные общего назначения второго класса точности по ГОСТ 24104;

- баня водяная;

- колбы с пришлифованными пробками исполнения 2 вместимостью 500 или 1000 см второго класса точности по ГОСТ 1770;

- чашки выпарительные N 5 вместимостью 250 см по ГОСТ 9147;

- воронки лабораторные по ГОСТ 25336;

- цилиндры мерные исполнения 1 или 3 вместимостью 250 см по ГОСТ 1770;

- лопатки стеклянные для нанесения экстракта;

- сито металлическое штампованное с отверстиями диаметром 1 мм;

- ножницы;

- бумага фильтровальная по ГОСТ 12026;

- кролики массой 2-3 кг;

- воротник из фанеры размером 1620 см;

- ацетон ч. д. а. по ГОСТ 2603.

4.3 Подготовка к испытанию

4.3.1 Пробу фуражного зерна, комбикорма или комбикормового сырья (далее - корма), токсичность которой определяют, при необходимости, измельчают до прохода через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

В колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 500 см помещают 50 г измельченного корма, заливают 150 см ацетона и экстрагируют 24 ч, периодически встряхивая, или экстрагируют 3 ч на аппарате для встряхивания жидкостей. Слой экстрагента над пробой должен быть не менее 1 см.

После окончания экстракции жидкость фильтруют через бумажный фильтр в выпарительную чашку. Оставшуюся в колбе пробу корма дополнительно промывают небольшой порцией экстрагента (не менее 20 см), промывную порцию фильтруют через тот же фильтр.

Экстракт концентрируют до получения маслянистого остатка желтоватого или коричневого оттенка. Для ускорения процесса чашку для выпаривания с экстрактом помещают на водяную баню температурой от 30 до 40 °С. Экстракт, оставшийся на стенках чашки, смывают экстрагентом на дно чашки, затем снова концентрируют. При необходимости экстракт сохраняют в холодильнике.

Примечание - Экстрагирование токсинов этим же растворителем можно проводить в аппарате Сокслета.

4.3.2 У кролика на участке кожи размером 66 см в области бедра, лопатки или бока в день постановки пробы тщательно выстригают волосяной покров (до полного оголения). Повреждение кожи не допускается. Пигментированная кожа, а также кожа с признаками шелушения не пригодна для проведения испытания. На одном кролике допускается ставить одновременно не более четырех проб. Повторное использование кролика для постановки пробы допускается лишь при отрицательных результатах предыдущих исследований.

4.4 Проведение испытания

На выстриженный участок кожи кролика стеклянной лопаткой наносят, слегка втирая, половину экстракта, вторую половину экстракта оставляют для повторного нанесения на следующий день. Небольшую часть оголенного участка кожи оставляют свободной от экстракта для контроля. Если экстракта недостаточно для двух нанесений, его предварительно разбавляют растительным маслом так, чтобы общее количество его было не менее 1 г.