Метод основан на способности дегидрогеназ живых клеток зародыша восстанавливать бесцветный раствор хлористого тетразола в фармазан. В результате зародыш таких семян приобретает красный (малиновый) цвет, зародыши мертвых семян остаются неокрашенными. Кроме полностью окрашенных и полностью не окрашенных, могут встречаться семена с частично окрашенными зародышами. По положению и размеру некротических пятен на зародыше семена классифицируют как жизнеспособные или нежизнеспособные.
2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
2.1.1. Для проведения анализа применяют:
- весы лабораторные 1-4-го классов точности по ГОСТ 24104-80* с наибольшим пределом взвешивания до 200 г;
_____________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).
- термостаты обогреваемые и охлаждаемые с диапазоном регулирования температуры в рабочей камере от +3 °С до +35 °С, допустимые колебания температуры в рабочей камере ±2 °С;
- микроскоп биологический стереоскопический с увеличением от 3,5 до 88;
- лупу 7 увеличения;
- иглу препаровальную;
- чашки Петри;
- лезвие;
- пинцет;
- стаканчики химические или колбы вместимостью 50, 100, 1000 см по ГОСТ 23932-90;
- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026-76;
- бумагу индикаторную для определения рН раствора;
- 2, 3, 5-трифенилтетразол-хлорид (тетразол хлористый);
- калий фосфорнокислый, однозамещенный (КНРО), ч. по ГОСТ 4198-75;
- натрий фосфорнокислый двузамещенный (NaHPO·2НО), ч. по ГОСТ 11773-76;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
- воду свежекипяченую;
- воду питьевую по ГОСТ 2874-82*.
_____________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98 (здесь и далее).
(Поправка, ИУС 8-83).
2.1.2. Приготовление водного раствора тетразола
Для окрашивания зародышей используют 0,5%-ный водный раствор тетразола (5 г тетразола растворяют дистиллированной или свежекипяченой водой с pH 6,0-7,0 и доводят до объема 1000 см). Если значение pH воды меньше 6 или больше 7, используют буферный раствор, который готовят следующим образом:
- раствор N 1 - растворяют 9,078 г КНРО в 1000 см дистиллированной воды;