ГОСТ 14746-69 Среда глюкозо-цитратно-желточная для хранения спермы быков при температуре 2-5 °С

     

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

2.1. Для контрольной проверки качества ГЦЖ среды, а также соответствия ее требованиям настоящего стандарта должны применяться правила отбора проб и методы испытаний, указанные ниже.

2.2. Контрольная проверка ГЦЖ среды производится государственным контролером на предприятии-изготовителе (станция искусственного осеменения) или Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

2.3. Для контрольной проверки отбирают готовую среду (100 мл) или препараты тех партий (серий), из которых приготовлена среда (глюкоза - 100 г; натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный - 100 г; яйца куриные - 5 шт.; антибиотики - по 5 флаконов).

2.4. Внешний вид, цвет и отсутствие механических примесей устанавливают путем осмотра колбы со средой в проходящем свете при периодическом встряхивании.

2.5. Стерильность проверяют путем высева среды по 1 мл на мясопептонный бульон (МПБ), 2%-ный мясопептонный агар МПА с 1% глюкозы и на мясопептонный печеночный бульон под вазелиновым маслом (среда Китт-Тароцци).

Наблюдают за посевами в течение 10 суток в соответствии с методикой ветеринарно-санитарной оценки спермы и сред, утвержденной Главным управлением ветеринарии МСХ CCСP.

2.6. Температуру среды 28-30 °С поддерживают в бактерицидной камере (УНКБ-1) или в термостате.

2.7. Концентрацию водородных ионов определяют с помощью потенциометра ЛПУ-01 или другими приборами того же класса точности.

Правильность показаний рН-метра проверяют по стандартным буферным растворам, имеющим рН 1,68; 4,00; 6,88 и срок хранения не более 3 месяцев при температуре 2-5 °С.

Подготовку прибора к работе и определение рН среды проводят по инструкции, прилагаемой к прибору.

2.8. Осмотическое давление среды определяют по разности температуры между точкой таяния льда (нулевая точка на термометре) и точкой истинной кристаллизации. Исследование проводят при помощи термометра Бекмана.

Перед началом работы каждый раз проводят калибровку термометра - установление нулевой точки. При этом термометр Бекмана помещают в мелкораздробленный тающий лед или снег и наблюдают уровень ртути в капилляре. Если уровень ртути окажется в нижней части шкалы или ниже делений шкалы термометра, то добавляют ртуть из верхнего резервуара. Для этого термометр перевертывают и нагревают рукой нижний резервуар ртути до тех пор, пока ртуть капилляра не соединится с ртутным столбиком верхнего резервуара. После этого термометр медленно охлаждают до температуры 2-3 °C, погрузив его на 7-10 мин в воду со льдом. Затем, держа термометр правой рукой за верхнюю его треть, коротким но сильным ударом верхней части термометра по большому или указательному пальцу левой руки отрывают излишнюю ртуть от ртутного столба верхнего резервуара.

Добиваются разрыва столбика ртути в месте соединения капилляра с верхним резервуаром. После этого ставят термометр в мелкораздробленный лед и определяют уровень ртутного столбика. Указанную манипуляцию повторяют до тех пор, пока верхний мениск ртутного столбика в капилляре при температуре таяния льда не будет стоять в верхней части шкалы между 3-5 °С.

Определяют нулевую точку с точностью до 0,01 °С и записывают ее. Для исследования ГЦЖ среду каждый раз заливают в объеме 4-5 мл в чистую пробирку такого размера, чтобы ртутный резервуар термометра был полностью погружен в жидкость и не касался стенок и дна пробирки; для этого термометр фиксируют при помощи резинового кольца или корковой пробки.

Термометр с пробиркой помещают в другую пробирку такого размера, чтобы между стенками пробирок оставалось пространство в 2-3 мм. Подготовленный таким образом термометр переносят в охлаждающую ванну. Исследуемую среду постоянно помешивают петлевидной мешалкой, наблюдая при этом за понижением уровня ртути в капилляре. После переохлаждения выделяется теплота кристаллизации и столбик ртути поднимается до истинной температуры замерзания ГЦЖ среды и некоторое время остается на постоянном уровне. Эту точку отмечают и записывают с точностью до 0,01 °С. Исследование повторяют. Для этого пробирку со средой отогревают в руке и определяют точку замерзания.

Если после двух исследований расхождения не превышают 0,01 °C, то проводят расчет осмотического давления. При расхождении после повторного исследования более чем на 0,01 °С проводят дополнительные исследования до получения необходимых расчетных данных.

При исследовании растворов разной концентрации пробирку и термометр после каждого исследования тщательно ополаскивают дистиллированной водой и просушивают.

Для охлаждения ванн применяют одну из указанных смесей:

а) смесь естественного льда с поваренной солью (3:1);

б) смесь спирта с сухим льдом;

в) спирт, охлажденный пропусканием через змеевик паров жидкого азота или воздуха.

Температуру в ваннах в период работы поддерживают на уровне минус 20-40 °С.

Осмотическое давление вычисляют по депрессии - ГЦЖ среды, что представляет собой разность между нулевой точкой на термометре и истинной температурой замерзания среды.

Пример:

Допустим, что нулевая точка на термометре Бекмана соответствует 4,46 °С. После трехкратного измерения истинная температура замерзания раствора составляет: 3,79; 3,80; 3,81 °С.

Среднее значение - 3,80 °С.

Определяем 4,46-3,80=0,66.

По формуле определяем осмотическое давление среды при 0 °С: