ГОСТ 14746-69 Среда глюкозо-цитратно-желточная для хранения спермы быков при температуре 2-5 °С
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Глюкозо-цитратно-желточную среду готовят непосредственно перед ее применением на станциях искусственного осеменения в соответствии с Инструкцией по искусственному осеменению крупного рогатого скота, утвержденной Министерством сельского хозяйства СССР, и Ветеринарно-санитарными правилами работы станций с пунктов искусственного осеменения, утвержденными Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР.
1.2. В состав ГЦЖ среды входят компоненты, указанные в табл.1.
Таблица 1
Наименования компонентов | Нормы |
1. Глюкоза по ГОСТ 6038-51 или медицинская в г | 3,0 |
2. Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный по ГОСТ 5.1314-72 в г | 1,4 |
3. Желток куриного яйца в мл | 10±2 |
4. Стрептомицин сернокислый или солянокислый для внутримышечных инъекций в тыс. единиц | 75-100 |
5. Пенициллин кристаллический (калиевая или натриевая соль) для внутримышечных инъекций в тыс. единиц | 75-100 |
6. Стрептоцид белый растворимый в г | 0,12±0,02 |
7. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 в мл | 100 |
1.3. Глюкоза медицинская ч.д.а. или х.ч., антибиотики и белый растворимый стрептоцид должны отвечать требованиям Государственной фармакопеи. Все препараты перед применением проверяют на безвредность для спермиев животных. Безвредность антибиотиков определяют по ВТУ 117-67, утвержденным Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, а глюкозы и цитрата - по эталонам этих препаратов, установленных Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов.
1.4. Содержание влаги в глюкозе допускается не более 10%.
При приготовлении среды препарат берут в большем количестве, чем указано в рецепте, с учетом содержания кристаллизационной воды.
Количество глюкозы () в г вычисляют по формуле:
,
где - количество безводной глюкозы, требуемое рецептом;
- содержание воды в препарате в процентах по анализу.
1.5. Желток куриных яиц берут от проверенных здоровых кур, из яиц со сроком хранения при температуре 2-5 °С не более 7 суток. Желательно брать желтки, окрашенные в ярко-оранжевый цвет.
1.6. Среду готовят в день разбавления спермы. Компоненты, входящие в состав среды, отвешивают на аналитических весах.
Перед отвешиванием реактивов проверяют точность весов и используют для навески часовое стекло, обработанное тампоном, смоченным 96%-ным этиловым спиртом по ГОСТ 5962-67*.
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000. - Примечание изготовителя базы данных.
1.7. Для приготовления среды используют стерильные колбы и мерные цилиндры по ГОСТ 1770-64*.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 1770-74. Здесь и далее. - Примечание изготовителя базы данных.
Дистиллированную воду кипятят 15-20 мин и берут ее в необходимом объеме.
Глюкозу и цитрат стерилизуют ультрафиолетовыми лучами в бактерицидной камере (УНБК-1) в течение 15-20 мин или в растворе текучим паром при 100 °С в течение 30 мин.
После охлаждения раствора до 80-90 °С в стерильных условиях добавляют в него стрептоцид. Затем при температуре 58-60 °С в раствор добавляют желток куриных яиц. Для этого скорлупу яиц обеззараживают тампоном, смоченным 70%-ным раствором этилового спирта, или ультрафиолетовыми лучами в настольной бактерицидной камере в течение 10-15 мин.
Яйцо раскалывают стерильным скальпелем, белок сливают в чашку, а желток осторожно перекладывают на стерильный лист фильтровальной бумаги, чтобы удалить остатки белка и оболочку желтка. Желтки перекатывают к краю фильтровальной бумаги, прокалывают оболочку и сливают их в стерильный цилиндр или мензурку.