ГОСТ 7047-55 Витамины А, С, D, В(1), В(2) и РР. Отбор проб, методы определения витаминов и испытания качества витаминных препаратов

V. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА Д

(Химический метод)

19. Применяемые реактивы

а) Хлороформ химически чистый, не содержащий примесей. Хлороформ промывают три-четыре раза дистиллированной водой, отделяют от воды, высушивают свежепрокаленным сернокислым натром или хлористым кальцием в течение суток и отгоняют на водяной бане при температуре 61 °С. Хранить в склянках темного стекла с притертой пробкой не более 1 мес.

Хлороформ подвергают испытанию на его пригодность для анализа при помощи следующих реакций:

1) Реакция на наличие свободного хлора в хлороформе: 10 см хлороформа взбалтывают в 40 см дистиллированной воды. Водный слой отделяют. 10 см водного слоя не должны окрашиваться в синий цвет при добавлении 0,5 см бесцветного 10%-ного раствора иодата калия и 0,5 см раствора крахмала.

2) Реакция на содержание спирта: хлороформ, не содержащий спирта, не восстанавливает 0,1%-ный раствор перманганата калия (при проведении реакции дают постоять 15 мин).

3) Реакция на содержание воды: при охлаждении до 3-4 °С 10 см хлороформа не должны давать мути.

4) Реакция на содержание органических примесей: 15 см хлороформа и 10 см концентрированной серной кислоты помещают в склянку с притертой пробкой (склянка предварительно ополаскивается 2 раза хлороформом и 2 раза серной кислотой); после стояния в течение одного часа при 15 °С в слое серной кислоты не должно появляться окрашивания.

б) Раствор треххлористой сурьмы. Продажную треххлористую сурьму промывают очищенным хлороформом, пока не будет стекать прозрачный и бесцветный раствор и высушивают в эксикаторе над серной кислотой в течение 1-2 сут в темноте. Насыщенный раствор треххлористой сурьмы в очищенном хлороформе приготовляют при 20 °С.

в) Серный эфир. Очистка эфира от перекисей производится следующим образом: в склянку помещают 500 см эфира, 50 см 4%-ного раствора KMnO, 5 см 40%-ного раствора NaOH или KOH, взбалтывают и оставляют на сутки в темноте. Смесь переносят в делительную воронку, нижний слой сливают, эфир промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают в течение суток сернокислым натрием, перегоняют и сохраняют в темноте. Эфир необходимо проверять на отсутствие перекисей по качественной реакции с раствором йодистого калия.

г) Ацетилхлорид. Температура кипения 51 °С. Сохранять в склянке или капельнице из темного стекла с притертой пробкой.

д) Спирт этиловый. Для освобождения спирта от альдегидов настаивают в течение 10-12 ч над твердым NaOH (5-10 г на 1 дм спирта) и перегоняют.

е) Натрий сернокислый кристаллический, безводный х.ч. или свежепрокаленный.

ж) Кали едкое, 10%-ный спиртовой раствор.

з) Фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор.

и) Углекислый газ, полученный в аппарате Киппа или из баллона, или азот.

к) Иодистый калий, 10%-ный раствор.

Все применяемые реактивы должны соответствовать требованиям действующих стандартов или технических условий.

20. Необходимая аппаратура

Электроколориметр или штуфенфотометр.

21. Составление калибровочной кривой

Для построения калибровочной кривой применяют чистый, кристаллический кальциферол, растворенный в хлороформе, содержащий 10000 ин. ед. витамина Д в 10 см (1 ин. ед. витамина Д соответствует 0,025 г чистого кальциферола). Хлороформенный раствор витамина Д хранится не более одного дня.

Измерение интенсивности окраски хлороформенного раствора кристаллического кальциферола с треххлористой сурьмой проводят в электрофотоколориметре со светофильтром 480-530 м или штуфенфотометре.

Для приведения электрофотоколориметра к нулю пользуются хлороформенным раствором треххлористой сурьмы. Для получения точек калибровочной кривой берут 1,0; 0,75; 0,5 и 0,25 см стандартного раствора витамина Д, доводят хлороформом до объема 1 см, добавляют по 3 капли ацетилхлорида и 6 см раствора треххлористой сурьмы. Отношение испытуемого раствора к раствору треххлористой сурьмы составляет 1:6.

Общий объем реакционной смеси должен составлять 7 см.

Точно через 4 мин после добавления последнего реактива измеряют получаемые окраски и величины экстинкции откладывают на графике по оси ординат, а соответствующие концентрации витамина Д - по оси абсцисс.

В пределах содержания витамина Д от 200 до 1000 ин. ед. в 1 см на графике получается прямая линия.

22. Определение витамина Д в масляных концентратах с омылением