Искусственная инсеминация проводится женщине в течение одного менструального цикла трехкратно: за 1 день до расчетного времени овуляции, в день овуляции и на следующий день после овуляции.
Нативная сперма может быть использована для инсеминации не позже чем через 2 часа после ее получения.
После получения спермы она должна пройти стадию саморазжижения, наступающую после хранения при комнатной температуре. Это время может колебаться от 10 минут до 1 часа. Криоконсервант добавляется к разжиженной сперме в соотношении 1:1, после чего производится расфасовка спермы в соломки из полимера.
Процесс криоконсервации требует, чтобы сперма была охлаждена до температуры -196 градусов С, т.е. температуры жидкого азота, который является лучшей средой для длительного хранения спермы.
Охлаждение спермы производится с помощью специальной аппаратуры. Для этого может быть использован универсальный охладитель программный КОП-6 и другие марки замораживателей биоматериалов.
Соломки со спермой помещаются в горизонтальное положение в камеру охладителя. Если замораживается сперма сразу от нескольких доноров, то образцы одного донора следует отделить от образцов другого донора.
При замораживании сперма преодолевает два опасных температурных порога: от +20 градусов С до +5 градусов С; от +5 градусов С до -20 градусов С, поэтому для исключения вредного влияния температурных перепадов околонулевых температур образцы спермы должны охлаждаться медленно, со скоростью 1 градус С в минуту. После достижения околонулевой температуры необходима экспозиция образца при данной температуре в течение 30-60 минут. Последнее условие необходимо для стабилизации подвижности сперматозоидов, что способствует повышению их криорезистентности.
Дальнейшее замораживание следует продолжать быстро - со скоростью не менее 20 градусов С в минуту до температуры около -70 градусов С. После этого трубочки с образцами спермы должны быть перенесены в жидкий азот, в котором они перекладываются в полимерную пробирку, маркированную для данного донора, и там хранятся.
Другим методом криоконсервации спермы является метод криоконсервации с помощью сухого льда (СО2). Для данного метода не требуется сложного оборудования. После разжижения сперма смешивается в пробирке с криопротекторами в соотношении 1:1. Пробирка помещается в обычный холодильник на 2 часа. В течение этого времени происходит медленное падение температуры до +4 градусов С.
В куске сухого льда формируются луночки диаметром около 1,0 см и глубиной до 0,5 см с помощью специальной формы, имеющей на поверхности выступы до 0,5 см и нагретой до температуры около 40 градусов. В готовые лунки разливается охлажденная сперма. Затем замерзшие капли спермы переносятся (пересыпаются) в маркированные полимерные пробирки.
Полимерные пробирки со спермой, замороженной с помощью сухого льда, или с соломками, содержащими сперму, замороженную в программном охладителе, хранятся в криобиологических сосудах с жидким азотом типа Х-34А с пронумерованными вкладными кассетами. Срок хранения спермы до 10 лет.
При использовании криоконсервированной спермы образец спермы размораживается непосредственно перед процедурой инсеминации на водяной бане при температуре 37 градусов С в течение 4-5 минут.
Искусственная инсеминация производится женщине в процедурной комнате на гинекологическом кресле. Шейка матки обнажается в зеркалах (типа Куско, Симса), фиксация шейки пулевыми щипцами не производится: 0,5 мл спермы набирается в специальный одноразовый пластиковый шприц (при его отсутствии можно пользоваться металлическими наконечниками от шприца Брауна, соединенными с туберкулиновым шприцем. Половина набранного количества спермы (0,25 мл) вводится в цервикальный канал в области внутреннего зева. При этом следует избегать проведения шприца или канюли за область внутреннего зева. После этого удаляется влагалищное зеркало и металлический или пластиковый колпачок типа Кафка соответствующего размера с 0,25 мл спермы в нем надевается на шейку матки.
В полости матки сперма вводится при наличии шеечного фактора бесплодия или ретродевиации матки. После введения спермы также на шейку матки надевается колпачок с 0,25 мл спермы.
После указанной процедуры женщина остается в гинекологическом кресле в течение 10-15 минут. Шеечный колпачок рекомендуется снять через несколько часов (как правило, это производится самой женщиной). Шеечный колпачок не должен находиться на шейке более 10 часов.
Каждая процедура искусственной инсеминации фиксируется в журнале учета процедур. При этом отмечается:
- ф. и. о. женщины;
- номер ее медицинской карты амбулаторного больного;
- дата проведения процедуры;
- номер процедуры;
- день менструального цикла;
- ректальная температура в день процедуры;
- какой вид и объем спермы использовали - нативная или криоконсервированная;
- код спермы донора.
В индивидуальной карте донора, в листе учета спермы отмечается расход спермы (графы 11-15) и результаты искусственной инсеминации.
Если в результате искусственной инсеминации после двух циклов оплодотворения беременность не наступила, то женщине показано проведение стимуляции овуляции по существующим методикам, а также проведение пробы Шуварского со спермой донора. Если беременность не наступает после 5-6 циклов осеменения, то необходимо повторно провести углубленное обследование и коррекцию выявленных нарушений.
Искусственная инсеминацин должна по возможности удовлетворять требованию: "одной женщине в одном цикле используется сперма одного и того же донора".