• Текст документа
  • Статус
Оглавление
Поиск в тексте
Действующий

ГЛАВНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ САНИТАРНЫЙ ВРАЧ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПОСТАНОВЛЕНИЕ

от 30 ноября 2007 года N 80

О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО



Я, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г.Онищенко, проанализировав материалы государственного надзора за выполнением обязательных требований при обороте пищевых продуктов, содержащих компоненты, полученные с применением генно-инженерно-модифицированных организмов (далее - ГМО), отмечаю.

В Российской Федерации с 1996 года разработана и функционирует законодательная, нормативная и методическая база, позволяющая осуществлять оценку безопасности, и организован мониторинг за оборотом пищевой продукции, полученной из ГМО. Действующая система в значительной степени гармонизирована с требованиями Международных организаций и Европейского союза.

За период с 1996 по 2007 год в мире площади посевов генетически модифицированных культур возросли в 60 раз, достигнув более 110 млн.га. В настоящее время разрешено к применению в разных странах более 120 видов трансгенных растений, в том числе 86 - в Европе.

В Российской Федерации за эти годы прошли полный цикл исследований 17 видов генетически модифицированных культур. На 30.11.2007 на территории Российской Федерации действуют санитарно-эпидемиологические заключения и свидетельства о государственной регистрации на 12 видов пищевой продукции растительного происхождения, полученных с применением трансгенных технологий: 6 сортов кукурузы, 4 сорта картофеля, 1 сорт риса и 1 сорт сахарной свеклы.

В мире существуют разные подходы к этикетированию пищевых продуктов, полученных из ГМО. В США, Канаде, Аргентине данные продукты не этикетируются, в странах ЕЭС принят 0,9% пороговый уровень, в странах Японии, Австралии - 5%. При этом введение порогового уровня содержания ГМО, при котором необходимо этикетировать пищевые продукты, не связано с вопросом их безопасности, а преследует цели информирования населения об использовании технологии получения пищевых продуктов.

С 12 декабря 2007 года вступает в силу Федеральный закон от 25.10.2007 N 234-ФЗ "О внесении изменений в Закон Российской Федерации "О защите прав потребителей" и часть вторую Гражданского кодекса Российской Федерации" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2007, N 44, ст.5282), в котором подпунктом а) пункта 3 статьи 1 в абзац третий пункта 2 статьи 10 Закона Российской Федерации от 07.02.92 N 2300-1 "О защите прав потребителей" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1996, N 3, ст.140) внесено дополнение об обязательном наличии в отношении продуктов питания информации о наличии в них компонентов, полученных с ГМО, в случае если содержание указанных организмов в таком компоненте составляет более 0,9%.

Таким образом, с учетом объективной необходимости определения порядка соответствующего этикетирования пищевых продуктов, полученных из ГМО, как формы реализации права потребителя на своевременное получение необходимой и достоверной информации о составе пищевых продуктов, обеспечивающей возможность их правильного выбора, Закон Российской Федерации от 07.02.92 N 2300-1 "О защите прав потребителей" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1996, N 3, ст.140) был гармонизирован с требованиями Европейского союза по этикетированию пищевых продуктов, полученных из ГМО, установленными Директивой Европейского парламента и Совета от 22.09.2003 N 1829/2003 о генетически модифицированной пище и кормах, которая с апреля 2004 года ввела в странах Европейского Союза 0,9% пороговый уровень для этикетирования пищевых продуктов, полученных из ГМО.

Ранее аналогичный показатель был закреплен санитарно-эпидемиологическими правилами СанПиН 2.3.2.2227-07 "Дополнения и изменения N 5 к санитарно-эпидемиологическим правилам СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов" (зарегистрированы в Минюсте России 16.06.2007, регистрационный номер 9852), установившими с 01.09.2007, что содержание в пищевых продуктах 0,9% и менее компонентов, полученных с применением ГМО, является случайной или технически неустранимой примесью и пищевые продукты, содержащие указанное количество таких компонентов, не относятся к категории пищевых продуктов, содержащих компоненты, полученные с применением ГМО.

Система оценки безопасности пищевых продуктов, полученных из ГМО, включает проведение пострегистрационного мониторинга за ее оборотом, для осуществления которого разработаны методы идентификации ГМО в пищевых продуктах.

В системе Роспотребнадзора в субъектах Российской Федерации имеется лабораторная база по исследованию пищевых продуктов на наличие ГМО. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 31.12.2004 N 13 "Об усилении надзора за пищевыми продуктами, полученными из ГМО" (по заключению Минюста России от 18.02.2005 N 01/1203-ВЯ данное постановление не нуждается в государственной регистрации) определены головные центры по количественному исследованию пищевых продуктов на наличие ГМО в каждом федеральном округе.

За 9 месяцев 2007 года учреждениями Роспотребнадзора на наличие компонентов, полученных с применением ГМО, исследовано 29816 проб (2006 год - 37879, 2005 год - 18872, 2004 год - 12956, 2003 год - 4300) продовольственного сырья и пищевых продуктов. Из них компоненты ГМО содержали 652 пробы (2006 год - 1452, 2005 год - 1443, 2004 год - 1552, 2003 год - 511), что составило 2,2% (2006 год - 2,7%, 2005 год - 7,6%, 2004 год - 12%, 2003 год - 11,9%). Наиболее часто ГМО встречаются в мясных продуктах - 3,8% (2006 год - 6,6%, 2005 год - 15,8%, 2004 год - 20,5%, 2003 год - 14,8%), птицеводческих продуктах - 5,6% (2006 год - 3,8%, 2005 год - 9,1%, 2004 год - 15,43%, 2003 год - 29,5%), группе продуктов "прочие" (в основном растительные белки) - 3,3% (2006 год - 3,9%, 2005 год - 10,8%, 2004 год - 16,7%, 2003 год - 16,4%). В 2007 году увеличилась доля содержания компонентов ГМО в молочных продуктах (9 месяцев 2007 года - 5,1%, 2006 год - 1,3%).

Учреждениями Роспотребнадзора при исследовании пищевых продуктов количественным методом определения ГМО, по предварительным данным, выявлено, что оборот пищевых продуктов, содержащих компоненты ГМО более 0,9%, составляет менее 1% от оборота всех пищевых продуктов, однако 90% из них не имеют обязательной информации о наличии ГМО.

В связи с вышеизложенным с целью усиления Госсанэпиднадзора за пищевыми продуктами и в соответствии с Федеральным законом от 30.03.99 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст.1650; 2002, N 1 (ч.1), ст.1; 2003, N 2, ст.167; N 27 (ч.1), ст.2700; 2004, N 35, ст.3607; 2005, N 19, ст.1752; 2006, N 1, ст.10; 2006, N 52 (ч.1), ст.5498; 2007, N 1 (ч.1), ст.21; 2007, N 1 (1 ч.), ст.29; 2007, N 27, ст.3213, 2007, N 46, ст.5554) и Федеральным законом от 01.01.2000* N 29-ФЗ "О качестве и безопасности пищевых продуктов" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 2, ст.150; 2002, N 1 (ч.1), ст.2; 2003, N 2, ст.167, N 27 (ч.1), ст.2700; 2004, N 35, ст.3607; 2005, N 19, ст.1752, N 50, ст.5242; 2006, N 1, ст.10, N 14, ст.1458)
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать "от 02.01.2000". - Примечание изготовителя базы данных.


постановляю:

1. Организациям, осуществляющим ввоз, производство и оборот пищевых продуктов, принять меры по обязательному доведению до потребителя информации о наличии в продуктах питания компонентов, полученных с применением ГМО, в случае если их содержание составляет более 0,9%.

2. Утвердить методические указания*:
_________________
* Публикуются на сайте Роспотребнадзора: www.rospotrebnadzor.ru - Примечание изготовителя базы данных.

2.1. МУ 2.3.2.2306-07 "Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения" (приложение 1);

2.2. МУК 4.2.2304-07 "Методы идентификации и количественного определения генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения" (приложение 2);

2.3. МУК 4.2.2305-07 "Определение генетически модифицированных микроорганизмов и микроорганизмов, имеющих генетически модифицированные аналоги, в пищевых продуктах методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени и ПЦР с электрофоретической детекцией" (приложение 3).

3. Управлениям Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации и по железнодорожному транспорту:

3.1. Считать осуществление надзора за пищевыми продуктами, полученными из ГМО, приоритетным направлением деятельности на 2008 год;

3.2. Усилить государственный надзор за производством и оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО;

3.3. Обеспечить выполнение необходимых лабораторных исследований по исследованию пищевых продуктов, содержащих ГМО;

3.4. Осуществлять в средствах массовой информации и среди населения разъяснительную работу по вопросам безопасности пищевых продуктов, полученных из ГМО, и прав потребителей на получение полной и достоверной информации;

3.5. Доложить о проделанной работе до 01.04.2008.

4. Управлениям Роспотребнадзора по г.Москве, г.Санкт-Петербургу, Ростовской области, Нижегородской области, Свердловской области, Новосибирской области, Хабаровскому краю активизировать работу головных центров по количественному исследованию пищевых продуктов на наличие ГМО в федеральных округах.

5. ФГУЗ Центры гигиены и эпидемиологии принять меры по дооснащению лабораторных подразделений аналитическим оборудованием по исследованию количественного состава ГМО.

6. ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора до 01.03.2008 представить в Роспотребнадзор информацию о наличии в ФГУЗ "Центры гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации аналитического оборудования по качественному и количественному методам определения ГМО в пищевых продуктах и подготовке врачей-лаборантов.

7. Просить научно-исследовательские учреждения РАМН, РАН, РАСХН совместно с научно-исследовательскими учреждениями Роспотребнадзора уделять приоритетное внимание совершенствованию методов оценки безопасности и контроля за пищевой продукцией, содержащей ГМО.

8. Контроль за исполнением настоящего постановления возложить на заместителя Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Л.П.Гульченко.

Г.Онищенко

Зарегистрировано
в Министерстве юстиции
Российской Федерации
6 февраля 2008 года,
регистрационный N 11117

Приложение 1. МУ 2.3.2.2306-07 "Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения"

Приложение 1

УТВЕРЖДЕНО
постановлением
Главного государственного
санитарного врача
Российской Федерации
от 30 ноября 2007 года N 80

     
     
2.3.2. Пищевые продукты и пищевые добавки


Медико-биологическая оценка безопасности
генно-инженерно-модифицированных организмов
растительного происхождения


Методические указания
МУ 2.3.2.2306-07
 

I. Общие положения и область применения

1.1. Методические указания устанавливают требования к проведению оценки безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения (ГМО).

1.2. Требования, изложенные в настоящих Методических указаниях, применяются на этапе государственной регистрации ГМО, впервые поступающих на продовольственный рынок Российской Федерации.

1.3. Методические указания разработаны с целью обеспечения единой, научно- обоснованной системы оценки безопасности ГМО, и учитывают новые методические подходы, как разработанные в России, так и рекомендованные международными организациями (ВОЗ, ФАО и др.).

II. Экспертный анализ и оценка данных, характеризующих заявленные генно-инженерно-модифицированные организмы

2.1. Общая характеристика ГМО включает анализ информации, представленной заявителем:

- информации, позволяющей идентифицировать ГМО (вид, сорт, трансформационное событие);

- информации об исходном родительском организме (таксономическая характеристика, описание способа размножения и распространения; данные о токсических, аллергенных и других неблагоприятных свойствах);

- информации об организмах-донорах вносимых генов (таксономическая характеристика, история использования);

- информации о методе генетической модификации (описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки);

- информации о ГМО (описание свойств, приобретенных растением в результате модификации, описание структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации, характеристику экспрессии встроенных генов (экспрессия в процессе онтогенеза растения, интенсивность экспрессии в структурных компонентах растения, и др.), характеристику различий с родительским организмом (способ размножения, способность к перекрестному опылению, устойчивость к стрессовым воздействиям и др.), характеристику генетической и фенотипической стабильности (должны быть представлены данные, полученные в результате исследований нескольких поколений ГМО), характеристику способности к переносу генов в другие организмы (растения, микроорганизмы).

Оценка композиционной эквивалентности проводится на основании сведений, представленных заявителем, о результатах сравнения химического состава ГМО с химическим составом его традиционного аналога по следующим параметрам:

- содержание белка;

- аминокислотный состав;

- содержание жира;

- жирнокислотный состав;

- углеводный состав;

- содержание витаминов;

- содержание макро- и микроэлементов;

- содержание биологически активных веществ;

- содержание аллергенов;

- содержание антропогенных и природных контаминантов (токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, радионуклидов, вредных примесей и др.);

- содержание антинутриентов и других веществ, характерных для растительных организмов данного вида.

Перечень показателей варьируется в зависимости от свойств изучаемого растительного организма.

2.3. Оценка композиционной эквивалентности ГМО и его традиционного аналога проводится с учетом биологических колебаний значений показателей, характерных для растений данного вида.

2.4. Анализ результатов токсикологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- результаты оценки безопасности одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (молекулярная и биохимическая характеристика белка; наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической, или иной биологической активностью (при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank, и др.); изучение стабильности белка при обработке, хранении, технологической переработке; влияние температуры и рН, возможные модификации и/или образование стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивость белка к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте in vitro; исследования острой пероральной токсичности белка в эксперименте на грызунах; и др.);

- результаты оценки безопасности нативного продукта (данные 90-дневных исследований на грызунах, данные исследований на молодых быстро растущих животных (цыплятах-бройлерах, ягнятах и др.), - в случае если такие исследования проводились;

- результаты других токсикологических исследований.

2.5. Анализ результатов аллергологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- результаты оценки аллергенных свойств одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (сравнение с известными аллергенами с использованием баз данных, содержащих информацию о трехмерной структуре и функции известных аллергенов и родственных им белков); определение потенциальной аллергенности белка в иммунохимических исследованиях in vitro с использованием IgE, выделенных из сыворотки крови пациентов, страдающих аллергией; определение устойчивости к воздействию протеолитических ферментов (пепсина); скрининговые исследования с использованием сывороток крови пациентов, страдающих аллергией; дополнительные исследования (в т.ч. in vivo);

- результаты аллергологических исследований нативного продукта (сравнение набора аллергенов исследуемого ГМО с набором аллергенов его традиционного аналога и др.), - должны быть проведены в случае, если имеются данные об аллергенных свойствах организма-донора.

2.6. Анализ результатов других исследований (в случае, если такие исследования были выполнены) проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- результаты определения пищевой ценности (так как заданные и незаданные эффекты генетической модификации могут являться причиной изменения баланса макро- и микронутриентов, и, следовательно, вести к изменению пищевой ценности продукта);

- результаты применения новейших аналитических методов, таких как профильные технологии и др.

2.7. Анализ результатов пострегистрационного мониторинга в стране-заявителе и других странах, осуществляемого с целью выявления незаданных эффектов генетической модификации, которые не могли быть обнаружены на стадии регистрационных исследований, проводится на основании сведений, представленных заявителем.

III. Методы обнаружения, идентификации и количественного определения генно-инженерно-модифицированных организмов в пищевых продуктах

3.1. Экспертная оценка методов идентификации ГМО направлена на подтверждение их адекватности инструментальной и методической базе, используемой в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека для контроля за обращением ГМО и маркировкой пищевых продуктов, содержащих ГМО.

3.2. Экспертная оценка методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО в пищевых продуктах проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- метод идентификации одного или нескольких трансформационных событий;

- метод количественного определения одного или нескольких трансформационных событий;

- протоколы проведения анализов;

- описание праймеров;

- стандартные образцы состава и свойств.

IV. Медико-генетическая оценка генно-инженерно-модифицированных организмов

4.1. Медико-генетическая оценка ГМО включает проверку присутствия одной или нескольких синтетических генетических конструкций методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

4.2. Медико-генетические исследования проводятся на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- описание молекулярной структуры одной или нескольких синтетических генетических конструкций (нуклеотидная последовательность);

- метод идентификации и количественного определения одного или нескольких трансформационных событий;

- протокол проведения анализа;

- описание праймеров;

- стандартные образцы состава и свойств.

V. Оценка функционально-технологических свойств генно-инженерно-модифицированных организмов

5.1. Перечень и объем исследований по разделу V определяются экспертными (учеными) советами соответствующих аккредитованных испытательных центров Российской Федерации на основании анализа представленных материалов.

5.2. Изучаемые функциональные свойства:

- рН водной суспензии;

- растворимость;

- реологические свойства водных дисперсий;

- водоудерживающая и жироудерживающая способность;

- критическая концентрация гелеобразования;

- эмульсионная стабильность и др.

VI. Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов

6.1. Перечень и объем исследований по разделу VI определяются экспертными (учеными) советами соответствующих аккредитованных испытательных центров Российской Федерации на основании анализа представленных материалов.

6.2. Гигиенические исследования ГМО включают определение показателей качества и безопасности:

6.2.1. Перечень показателей безопасности определяется на основании требований СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов" для соответствующей группы продуктов.

Изучаемые показатели:

- содержание токсичных элементов;

- содержание микотоксинов;

- содержание пестицидов;

- содержание радионуклидов;

- содержание вредных примесей;

- микробиологические показатели;

- другие показатели (в случае необходимости).

6.2.2. Перечень показателей качества определяется на основании свойств соответствующего растительного организма, а также анализа представленных заявителем материалов. В случае если заявителем представлены исчерпывающие данные по оценке композиционной эквивалентности ГМО (содержание белка, аминокислотный состав, содержание жира, жирнокислотный состав, углеводный состав, содержание витаминов, макро- и микроэлементов, специфических компонентов, биологически активных веществ, антинутриентов и других веществ, характерных для растений данного вида) исследования могут быть ограничены определением влажности, золы, содержания белка, жира, углеводов, пищевых волокон.

6.2.3. В случае если генетическая модификация направлена на изменение химического состава ГМО, должны быть проведены исследования, подтверждающие заявленные изменения.

6.3. Токсикологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных:

6.3.1. Схема проведения эксперимента

Вид животных

крысы линии Вистар

Пол

самцы

Возраст

40-50 дней

Исходная масса тела

70-80 г

Количество животных в группе в начале эксперимента

не менее 50 особей в каждой группе

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных

Карантин

не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

Продолжительность эксперимента

180 дней

Забор материала для гематологических, биохимических, морфологических исследований

На 30-й и 180-й дни эксперимента

Количество животных, взятых на исследование

Не менее 10/группу

6.3.2. На протяжении эксперимента животные получают полусинтетический казеиновый рацион (ПКР). Исследуемый ГМО и его традиционный аналог включают в состав корма в максимально возможном количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ. Замена ингредиентов рациона должна быть проведена с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности.

Продуктовый набор и химический состав базового ПКР представлены в табл.1-2.

Таблица 1. Состав базового полусинтетического казеинового рациона

Таблица 1


Ингредиенты

Кол-во

Белок

Жиры

Углеводы

Калорийность

г

г

г

г

ккал

%

Казеин

25,0

20,20

0,38

-

84,22

22,1

Крахмал маисовый

58,0

0,58

-

50,2

203,12

53,3

Масло подсолнечное нерафинированное

5,0

-

4,99

-

44,91

11,8

Лярд

5,0

-

4,98

-

44,82

11,8

Солевая смесь*

4,0

-

-

-

-

-

Смесь в/р витаминов**

1,0

-

-

1,0

4,00

1,0

Смесь ж/р витаминов***

0,1

-

0,1

-

-

-

Микрокристалли-
ческая целлюлоза

2,0

-

-

-

-

-

ИТОГО

100,1

20,78

10,45

51,2

381,07

100

_______________

* состав солевой смеси представлен в табл.2

** 1 г содержит: тиамина (В1) - 0,4 мг, рибофлавина (В2) - 0,6 мг,

пиридоксина (В6) - 0,4 мг, никотиновой кислоты - 3,0 мг,

пантотената кальция - 1,5 мг, фолиевой кислоты - 0,2 мг,

цианкобаламина (В12) - 0,003 мг, викасола - 0,1 мг, L-метионина - 50 мг,

глюкозы - до 1 г.

*** 0,1 мл содержит: ретинола ацетата 800 МЕ, эргокальциферола - 70 МЕ,

О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО-токоферола ацетата - 5 мг, подсолнечного масла - до 0,1 мл.

Таблица 2. Состав солевой смеси

Таблица 2


N

Название соли

Химическая формула

Количество, г

1

Хлористый натрий

NaCl

139,3

2

Калий фосфорнокислый,

KHО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОPOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

388,8

3

Магний сернокислый

MgSOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

57,4

4

Кальций углекислый

CaCOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

380,4

5

Железо сернокислое

FeSOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО Ч 7HО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОO

26,4

6

Калий йодистый

KI

0,77

7

Марганец сернокислый

MnSOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО Ч 7HО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО0

4,55

8

Цинк сернокислый

ZnSOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО Ч 7HО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОO

0,53

9

Медь сернокислая

CuSOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО Ч 5HО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОO

0,48

10

Кобальт хлористый

CoClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО Ч 6HО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОO

0,024

11

Натрий фтористый

NaF

0,50

12

Алюмокалиевые квасцы

KО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОSOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОAlО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (SOО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО)О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО Ч 24HО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОO

0,11

ИТОГО

1000

6.3.3. Исследуемые показатели:

6.3.3.1. Интегральные показатели

Изучаемые показатели

Периодичность
сбора данных

Общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова)

каждые 2 дня

Поедаемость корма

ежедневно

Масса тела

каждые 7 дней

Масса внутренних органов (головной мозг, сердце, селезенка, легкие, тимус, гипофиз, печень, почки, надпочечники, семенники)

На 30-й и 180-й дни эксперимента

6.3.3.2. Гематологические показатели

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

- концентрация гемоглобина;

- гематокрит;

- общее количество эритроцитов;

- средний объем эритроцита (СОЭ);

- среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ);

- средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ);

- общее количество тромбоцитов;

- общее количество лейкоцитов;

- дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы).

На 30-й и 180-й дни
эксперимента

6.3.3.3. Биохимические показатели

6.3.3.3.1. Общий биохимический анализ крови.

Материал для исследований: сыворотка крови.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

- аланинаминотрансфераза (АЛТ);

- аспартатаминотрансфераза (АСТ);

- желчные кислоты;

- фосфатаза щелочная;

- билирубин общий;

- билирубин прямой;

- белок общий;

- альбумин;

- глобулин;

- креатинин;

- глюкоза;

- альфа-амилаза;

- липаза;

- лактатдегидрогеназа;

- общие липиды;

- триглицериды;

- холестерин;

- холинэстераза;

- мочевина;

- хлориды;

- натрий;

- фосфор;

- калий.

На 30-й и 180-й дни
эксперимента

6.3.3.3.2. Общий анализ мочи.

Материал для исследований: моча.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

- суточный диурез;

- цвет и прозрачность;

- относительная плотность;

- pH;

- белок;

- глюкоза;

- креатинин.

На 30-й и 180-й дни
эксперимента

6.3.3.3.3. Системные биомаркеры

6.3.3.3.3.1. Система антиоксидантной защиты.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Активность ферментов антиоксидантной защиты. Материал для исследований: эритроциты

- глутатионредуктаза;

- глутатионпероксидаза;

- супероксиддисмутаза;

- каталаза;







На 30-й и 180-й дни
эксперимента

Содержание продуктов перекисного окисления липидов. Материал для исследований: кровь, печень

- малоновый диальдегид.

6.3.3.3.3.2. Система ферментов метаболизма ксенобиотиков.

Материал для исследований: печень.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Активность ферментов 1-й и 2-й фазы метаболизма ксенобиотиков

- общее содержание цитохрома Р-450;

- 7-этоксирезоруфин-О-деэтилаза;

- 7-пентоксирезоруфин-О-деэтилаза;

- UDP-глюкуронозилтрансфераза;

- глутатионтрансфераза.

На 30-й и 180-й дни эксперимента

6.3.3.3.3.3. Система регуляции апоптоза.

1) стабильность мембран лизосом.

Материал для исследований: печень.

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Общая и неседиментируемая активность

- ферментов лизосом

- -галактозидаза;

- О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО-глюкуронидаза;

- арилсульфатазы А и В.

На 30-й и 180-й дни
эксперимента

2) другие методы.

6.3.3.4. Морфологические исследования

Исследуемые органы

Методы исследований

- кожа;

- головной мозг;

- сердце;

- аорта;

- селезенка;

- легкие;

На 30-й и 180-й дни эксперимента (плановый забор)


1. Макроскопические исследования

2. Микроскопические исследования:

а) обзорные гистологические исследования

3. Морфометрический анализ

- лимфатические узлы;

- тимус;

- щитовидная железа;

- гипофиз;

- ЖКТ: желудок, тонкая и толстая кишки;

- печень;

Вскрытие погибших в течение эксперимента животных (внеплановый забор)


1. Макроскопические исследования

2. Микроскопические исследования (перечень исследуемых органов может быть сокращен до минимально необходимого для установления причины смерти):

а) обзорные гистологические исследования.

- поджелудочная железа;

- почки;

- семенники.

Дополнительные исследования


1. Микроскопические исследования:

а) гистохимические исследования;

б) иммуногистохимические исследования клеточных популяций и их производных.

2. Электронно-микроскопические исследования.

6.4. Иммунологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на мышах линий СВА и С57Bl/6 и включают изучение его иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам:

действие на гуморальное звено иммунитета - в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана;

действие на клеточное звено иммунитета - в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана;

действие как сенсибилизирующего агента - в тесте чувствительности к гистамину;

действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium (сальмонеллы мышиного тифа).

В табл.3 представлены сравнительные характеристики мышей линий СВА и С57Bl/6.

Таблица 3. Характеристики мышей линий СВА и C57Bl/6

Таблица 3

Действующий фактор

Линия мышей

СВА

C57B1/6

Эритроциты барана

высокочувствительны

низкочувствительны

Гистамин

не чувствительны

чувствительны

Salmonella typhimurium

не чувствительны

чувствительны

6.4.1. Схема проведения эксперимента

Вид животных

мыши линий СВА и C57B1/6

Пол

самцы

Возраст

половозрелые

Исходная масса тела

18-20 г

Распределение по группам

Животных каждой линии делят на 2 группы:

группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион*

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных

Карантин

не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

_______________
* Состав базового рациона приведен в п.6.3.2.


Исследования начинают через 21 день с момента перевода мышей на экспериментальные рационы. В течение эксперимента ведутся наблюдения за поедаемостью корма и общим состоянием животных.

6.4.2. Исследуемые показатели:

1) действие ГМО на гуморальное звено иммунитета.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 20 животных) и опытной (не менее 20 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят 0,5 мл эритроцитов барана (20 млн. клеток/мл). Забор крови для исследований проводится на 7-й, 14-й и 21-й день после введения эритроцитов барана. Сыворотку крови титруют в реакции гемагглютинации общепринятым методом. Полученные данные обрабатывают методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты приводятся в виде Мm, где М - выборочное среднее измеряемых величин, m - стандартная ошибка.

2) действие ГМО на клеточное звено иммунитета.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий подкожно в межлопаточную область вводят 0,5 мл эритроцитов барана (2 млн. клеток/мл). Через пять дней всем мышам в подушечку одной задней лапы вводят разрешающую дозу эритроцитов барана - 0,02 мл (1 млрд. клеток/мышь); в контрлатеральную лапу - 0,02 мл 0,95%-ного раствора хлорида натрия. Местную воспалительную реакцию оценивают через 18-20 часов путем определения массы опытной и контрольной лапок. Интенсивность местной реакции определяют по индексу реакции (ИР).

3) действие ГМО как сенсибилизирующего агента к гистамину.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят гистамин гидрохлорид (2,5 мг/мышь в 0,5 мл физиологического раствора). Реакцию учитывают через 24 часа по проценту гибели мышей.

4) действие ГМО на естественную резистентность мышей к S. typhimurium изучают на модели внутрибрюшинного заражения мышей десятикратно отличающимися дозами S. typhimurium штамм 415. Через 21 день эксперимента мышей контрольной (не менее 30 животных) и опытной (не менее 30 животных) групп обеих линий заражают тремя дозами культуры: 1000, 100, 10 микробных клеток/мышь. После заражения за животными наблюдают в течение 21 дня. Вычисляют ЛД50, а также процент гибели животных по каждой дозе, затем проводят сравнительный анализ результатов.

6.5. Аллергологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных: потенциальную аллергенность оценивают, определяя тяжесть протекания системной анафилаксии и уровня циркулирующих сенсибилизирующих антител (субклассов IgGО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО + IgGО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО) у крыс, получающих в составе рациона исследуемый ГМО (группа "опыт") и его традиционный аналог (группа "контроль"). Метод основан на количественной сравнительной оценке тяжести реакции системной анафилаксии, возникающей при внутрибрюшинной (в/б) сенсибилизации взрослых крыс пищевым антигеном - овальбумином куриного яйца (ОВА) с последующим внутривенным (в/в) введением сенсибилизированным животным разрешающей дозы того же белка.

6.5.1. Схема проведения эксперимента

Вид животных

Крысы линии Вистар

Пол

Самцы

Возраст

Половозрелые

Исходная масса тела

150-180 г

Количество животных в группе в начале эксперимента

не менее 25 особей в каждой группе

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион (табл.4)

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных Рацион не содержит яичного белка.

Карантин

не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

Продолжительность эксперимента

29 дней

Забор материала для исследований

На 29-й день эксперимента

Таблица 4. Стандартный рацион вивария

Таблица 4

Ингредиент

Масса, г
на 1 крысу в день

Крупа овсяная

2,5

Зерновая смесь

14,0

Хлеб 2 сорт

4,0

Творог

2,0

Рыбная мука

0,5

Мясо 2 категория

4,0

Морковь

8,0

Зелень

8,0

Рыбий жир

0,1

Дрожжи

0,1

NaCl

0,15

Основные нутриенты

Белок

3,69

Жир

1,28

Углеводы

12,42

Энергия, ккал

76,0

6.5.2. Исследуемые показатели:

На 1-й, 3-й, 5-й день опыта крыс в/б сенсибилизируют ОВА, а на 21-й день эксперимента вводят дополнительную ("бустерную") дозу антигена, уменьшенную в 10 раз в сравнении с первоначальной. Кормление рационами продолжают до утра 29-го дня эксперимента и затем вводят раствор ОВА в/в, после чего оценивают на протяжении 24 ч тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по показателям числа летальных реакций, общего числа судорожных реакций и величины анафилактического индекса. Непосредственно перед введением разрешающей дозы у крыс отбирают 0,1-0,2 мл крови из хвостовой вены для определения уровня специфических антител.

Иммуноферментное определение уровней циркулирующих специфических антител к ОВА проводят согласно. Статистическую обработку результатов проводят согласно U-критерию Фишера для долевых показателей, непараметрическим критериям хи-квадрат и Мана-Уитни с использованием пакетов программ Excel и SPSS 11.5.

6.6. Генотоксикологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных. Оценка потенциальной генотоксичности ГМО включает выявление повреждений ДНК и выявление мутагенной активности в эксперименте in vivo. Метод выявления мутагенной активности основан на учете хромосомных аберраций в метафазных клетках пролиферирующих тканей. Регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет).

6.6.1. Схема проведения эксперимента

Вид животных

мыши линии С57B1/6

Пол

самцы

Возраст

половозрелые

Исходная масса тела

18-20 г

Количество животных в группе в начале эксперимента

не менее 15 особей в каждой группе

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион*

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных

Карантин

не менее 7 дней

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

Продолжительность эксперимента

30 дней

Забор материала для исследований

На 30-й день эксперимента

_______________
* Состав базового рациона приведен в п.6.3.2.

6.6.2. Исследуемые показатели:

1) в основе метода выявления мутагенной активности лежит регистрация видимых структурных нарушений хромосом в клетках костного мозга на стадии метафазы. Анализируют 100 метафаз от каждого животного. Учитывают число одиночных и парных фрагментов, хроматидных и хромосомных обменов, ахроматических пробелов (гепов) и разрывов по центромере, число клеток с множественными повреждениями и клеток с полной деструкцией хромосом. Оценку результатов цитогенетического анализа проводят путем сопоставления долей клеток с хромосомными аберрациями в контрольной и опытной группах.

2) регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет). Метод основан на регистрации различной подвижности ДНК и возможных фрагментов ДНК лизированных клеток, заключенных в агарозный гель, в постоянном электрическом поле. При этом ДНК мигрирует к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий "хвост кометы", параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК. Общая схема метода включает получение гель-слайдов (подложки), получение микропрепаратов, лизис, щелочную денатурацию, электрофорез, нейтрализацию/фиксацию, окрашивание и микроскопический анализ.

Микроскопический анализ проводят на эпифлуоресцентном микроскопе с соответствующими для конкретного красителя фильтрами при увеличении 200х-400х. На каждый микропрепарат анализируют не менее 100 "ДНК-комет". Анализ "ДНК-комет" может проводиться визуально или с помощью программно-аппаратного комплекса.

6.7. Исследования репродуктивной токсичности ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных и включают:

1) изучение влияния на генеративную функцию;

2) изучение эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пренатальном и постнатальном периодах развития.

6.7.1. Схема проведения эксперимента

Вид животных

крысы линии Вистар

Пол

самцы, самки

Возраст

40-50 дней

Исходная масса тела

70-80 г

Количество животных в группе в начале эксперимента

не менее 50 особей в каждой группе
30 О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО, 20 О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

Распределение по группам

Животных делят на 2 группы:

группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;

группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО

Рацион*

Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных

Карантин

не менее 7 дней

Начало опытного вскармливания

за 45-50 дней перед первым спариванием

Условия содержания

Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

_______________
* Состав базового рациона приведен в п.6.3.2.

6.7.2. Исследуемые показатели:

6.7.2.1. Интегральные показатели

Изучаемые показатели

Периодичность сбора данных

Общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова)

каждые 2 дня

Поедаемость корма

ежедневно

Масса тела

каждые 7 дней

6.7.2.2. Показатели, характеризующие генеративную функцию

Изучаемые показатели

Сроки сбора данных

Морфологические исследования семенников (определяют индекс сперматогенеза, среднее количество нормальных сперматогоний в каждом канальце, относительное количество канальцев с 12-й стадией мейоза)





половозрелые особи

Морфологические исследования яичников (примордиальные фолликулы, фолликулы с двумя и более слоями фолликулярных клеток, третичные фолликулы, атретические тела, желтые тела, общее количество генеративных форм)

6.7.2.3. Показатели, характеризующие пренатальное развитие потомства

Изучаемые показатели

Сроки сбора данных

1. Забой и вскрытие не менее 7 беременных самок на группу

2. Визуальное исследование матки, плаценты, плодов: выявление живых и мертвых плодов, подсчет количества желтых тел, мест имплантации, количество резорбций по правому и левому рогу матки (с последующим вычислением пред- и постимплантационной эмбриональной смертности)





19-20-й день беременности

3. Анализ эмбрионального материала (не менее 5 плодов от каждой крысы)

6.7.2.4. Показатели, характеризующие постнатальное развитие потомства

Изучаемые показатели

Сроки сбора данных

1. Контроль рождения потомства

20-22-й дни беременности

2. Учет величины помета в день родов, подсчет количества живых и мертвых крысят, подсчет особей разного пола, установление внешних уродств, измерение массы тела, определение краниокаудального размера

1-й день жизни

3. Учет показателей физиологического развития крысят: срок отлипания ушных раковин, появление первичного волосяного покрова, прорезывание резцов, открытие глаз, опускание семенников, открытие влагалища; выживаемость потомства.

1-30 дни жизни

4. Измерение массы тела и роста крысят

1, 4, 7, 14, 21 и 25 дни жизни

6.7.3. Отчет по результатам исследований репродуктивной токсичности ГМО должен включать цифровые данные в форме таблиц, содержащих основные сведения, необходимые для суждения о наличии или отсутствии у исследуемого ГМО неблагоприятного действия на внутриутробное развитие и процессы репродукции.

Приложение 2. МУК 4.2.2304-07 "Методы идентификации и количественного определения генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения"

Приложение 2

УТВЕРЖДЕНО
постановлением Главного
государственного
санитарного врача
Российской Федерации
от 30 ноября 2007 года N 80

     
     
Методы контроля и микробиологические факторы.
Пищевые продукты и пищевые добавки


Методы идентификации и количественного определения
 генно-инженерно-модифицированных организмов
 растительного происхождения


Методические указания
МУК 4.2.2304-07


1. Разработаны: ГУ НИИ питания РАМН (В.А.Тутельян, Е.Ю.Сорокина, О.Н.Чернышева, О.В.Анисимова, Н.А.Кашина); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Г.Онищенко, Л.П.Гульченко, Г.Е.Иванов); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (И.В.Брагина, Т.В.Воронцова, Т.Н.Потапова, Т.Ф.Авдеенко, С.Ю.Терехова, М.В.Зароченцев); ТУ Роспотребнадзора по г.Москве (Н.Н.Филатов, И.И.Пискарева, Н.Я.Салова, Е.В.Сизых); Московской медицинской академией им.И.М.Сеченова Минздравсоцразвития России (Б.П.Суханов); ФГУЗ Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Г.А.Шипулин, С.Б.Яцышина); ГУ Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН (А.В.Кузубов, Я.И.Алексеев, Д.А.Варламов, С.В.Боровская); Центром "Биоинженерия" РАН (К.Г.Скрябин, Б.Б.Кузнецов); ГОУВ Московским государственным университетом прикладной биотехнологии Минобрнауки России (И.А.Рогов, О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО, А.Ф.Валихов); Инновационной корпорацией "Биозащита" (И.В.Панкин).

2. Утверждены постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г.Онищенко 30.11.2007 N 80. Зарегистрирован в Министерстве юстиции Российской Федерации 06 февраля 2008 года, регистрационный номер 11117.

3. Введены в действие с 30.11.2007.

4. Введены взамен МУК 4.2.1902-04 "Определение генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения методом полимеразной цепной реакции"; МУК 4.2.1913-04 "Методы количественного определения генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания".

I. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы идентификации и количественного определения генно-инженерно-модифицированных организмов (ГМО) растительного происхождения в пищевых продуктах.

1.2. Представлены скрининговые методы, направленные на выявление и количественное определение рекомбинантной ДНК: промотора 35S из вируса мозаики цветной капусты, терминатора NOS из Agrobactetium tumefaciens и маркерных генов, позволяющие проводить предварительную проверку пищевой продукции.

1.3. Представлены методы, направленные на идентификацию и количественное определение рекомбинантной ДНК, характерной для генетических конструкций и уникальных трансформационных событий, для осуществления окончательной идентификации линии ГМО растительного происхождения.

II. Аппаратура, инструменты, лабораторная посуда, реактивы

2.1. Для проведения идентификации и количественного определения ГМО растительного происхождения используются следующая аппаратура и инструменты:

- амплификаторы типа ABI Prism 7000, iCycler iQ, Rotor Gene-3000 (6000), АНК -32, "Терцик МС-2" и другие;

- комплекс аппаратно-программный для анализа биологических микрочипов типа "ДЕРМИГЕН-001";

- прибор для горизонтального электрофореза типа "Mini-Sub Cell GT System" с комплектом кювет и гребенок;

- источник напряжения типа "Power Pac 300" с диапазоном регулируемого напряжения 50-300 В;

- трансиллюминатор типа Т12 с защитным экраном, диапазон излучения 300-400 нм;

- видеосистема типа "Gel Doc 2000О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО", предназначенная для ввода в компьютер, анализа и документирования изображений люминисцирующих следов ДНК в гелях, окрашенных бромистым этидием, чувствительность - не менее 10 нг ДНК (по бромистому этидию);

- холодильник бытовой электрический типа "Электролюкс", с температурой морозильной камеры минус 20°С;

- микроцентрифуга настольная типа Эппендорф (частота вращения не менее 13000 минО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО);

- термостат типа "TERMO 24-15" под пробирки типа Эппендорф вместимостью 0,5 и 1,5 мл, диапазон температур от 15°C до 120°C, количество гнезд - не менее 20 каждого типа, точность поддержания температуры - 0,2°C, разность температур между соседними ячейками - не более 0,5°C;

- термостат суховоздушный типа ТВЗ-25 с рабочей температурой 42°C, рабочий диапазон от 20°C до 60°C, точность поддержания температуры О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО1°C;

- аппарат для встряхивания типа "Вортекс", скорость вращения 250-3000 минО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО;

- печь микроволновая (мощностью не менее 400 W);

- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г;

- анализатор потенциометрический типа МР 220, погрешность измерений рН ±0,01;

- гомогенизатор перистальтического типа "Стомайкер" или других моделей;

- облучатель бактерицидный настенный типа ОБН-150;

- дозаторы с переменным объемом дозирования: 0,2-2,0 мкл с шагом 0,01 мкл, с точностью О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО1,2%; 0,5-10,0 мкл с шагом 0,01 мкл, с точностью О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО0,8%; 2-20 мкл с шагом 0,01 мкл, с точностью О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО0,8%; 20-200 мкл с шагом 0,1 мкл, с точностью О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО0,6%; 100-1000 мкл с шагом 1 мкл, с точностью О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО3%; 2-10 мл с шагом 0,1 мл, с точностью О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО0

,5%.

2.2. Для проведения идентификации и количественного определения ГМО растительного происхождения используется следующая лабораторная посуда:

- цилиндры мерные лабораторные вместимостью 10, 25, 100, 1000 мл, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Z 327263-2 ЕА, Z 327301-2 ЕА, Z 327379-2 ЕА, Z 327476-2 ЕА;

- колбы мерные лабораторные вместимостью 25, 50, 100, 250, 1000 мл, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Z 329517-1 ЕА, Z 329525-1 ЕА, Z 329533-1 ЕА, Z329541-1 ЕА, Z 329576-1 ЕА;

- пробирки микроцентрифужные типа Эппендорф вместимостью 0,2, 0,5, 1,5 мл;

- наконечники с фильтром для дозаторов с переменным объемом дозирования до: 10; 20; 200; 1000 мкл; 10 мл.

2.3. Для проведения идентификации и количественного определения ГМО растительного происхождения используются следующие реактивы:

- кислота соляная, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Н 1758;

- кислота борная, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N В 7901;

- натрий едкий, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N 221465;

- натрий хлористый, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N S 3014;

- этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Е 5134;

- гексадецилтриметиламмониум бромид (СТАВ), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Н 5882;

- трис (оксиметил) аминометан, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Т 6791;

- альбумин бычий сывороточный сухой (БСА), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N B 4287;

- этидий бромистый, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Е 4391;

- спирт этиловый, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат N 459836;

- спирт изопропиловый, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N 19516;

- хлороформ, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N 151823;

- вода деионизированная, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N W 4502;

- вода дистиллированная, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N W 3500;

- 2-меркаптоэтанол, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N M 3148;

- термостабильный фермент Taq-полимераза, оптимум работы в области 70С-72С, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Д 1806;

- буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Р 2192;

- агароза для электрофореза (тип П), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N A 6877;

- маркер молекулярной массы ДНК, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Р 1473;

- стандартный образец состава генетически немодифицированного организма растительного происхождения, корпорация "Сигма Алдрич" (Fluka), кат. N 53198;

- стандартный образец состава ГМО растительного происхождения, корпорация "Сигма Алдрич" (Fluka), кат. N 44386;

- 2'-дезоксиаденозин-5'трифосфорной кислоты тетранатриевая соль, тригидрат (АТФ), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Д 4788;

- 2'-дезоксицитидин-5' трифосфорной кислоты тетранатриевая соль, тригидрат (ЦТФ), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Д 4913;

- 2'-дезоксигуанозин-5'трифосфорной кислоты тетранатриевая соль, тригидрат (ГТФ), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N Д 5038;

- 2'-дезокситимидин-5' трифосфорной кислоты тетранатриевая соль, тригидрат (ТТФ), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N T 9656;

- праймеры, ЗАО "Синтол", (Россия);

- натрия додецилсульфат (SDS), корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N L 4390;

- 3%-ный раствор перекиси водорода, корпорация "Сигма Алдрич" (Sigma), кат. N 7722.

2.4. Допускается использование другой аппаратуры, инструментов и реактивов с техническими характеристиками не хуже указанных выше отечественного и зарубежного производства, разрешенные для применения в установленном порядке.

III. Подготовка к анализу

3.1. Приготовление растворов:

- для приготовления 1М ТРИС - HCl (рН 7,5) в мерной колбе на 100 мл растворить 12,11 г Трис (оксиметил) аминометана в 80 мл дистиллированной воды, довести рН концентрированной соляной кислотой до 7,5, довести объем раствора до метки деионизованной водой, перемешать, хранить при температуре -20С° в течение не более года;

- для приготовления 5М NaCl растворить 29,22 г натрия хлористого в 100 мл дистиллированной воды, перемешать, хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года;

- для приготовления 30%-ной NaOH растворить 3 г натрия гидроокиси в 7 мл дистиллированной воды;

- для приготовления 0,5 М ЭДТА (рН 8,0) в мерной колбе на 100 мл растворить 18,62 г этилендиаминтетрауксусной кислоты в 80 мл дистиллированной воды, раствором 30%-ной натрия гидроокиси довести рН раствора до 8,0, дистиллированной водой объем раствора довести до метки, перемешать, хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года.

3.2. Приготовление хлороформа, насыщенного водой:

- смешать 100 мл( )хлороформа с 20 мл деионизированной воды и оставить на 24 ч для насыщения;

- срок хранения при температуре от 4°С до 5°С - не более 6 мес.

3.3. Приготовление 70%-ного раствора этилового спирта:

- смешать 70 мл( )96%-ного этилового спирта с 26 мл деионизированной воды;

- срок хранения при температуре от 4°С до 5°С - не более 2 мес.

3.4. Приготовление раствора БСА (20 мкг/ мл):

- растворить 0,002 г сухого альбумина бычьего сывороточного в 1 мл деионизиованной воды, 10 мкл полученного раствора смешать с 990 мкл деионизированной воды;

- срок хранения в морозильной камере при температуре минус 20°С - не более 6 мес.

3.5. Приготовление лизирующего буфера (2%-ного "СТАВ"):

- растворить 0,5 г гексадецилтриметиламмония бромида в 10 мл деионизированной воды, добавить 2,5 мл 1M Трис - HCl, 7 мл 5M NaCl, 1 мл 0,5 М ЭДТА, довести объем раствора деионизированной водой до 25 мл, перемешать;

- срок хранения при температуре от 4°С до 5°С - не более 6 мес.

3.6. Приготовление 1 х ТВЕ буфера для электрофореза:

- в мерной колбе на 1000 мл растворить 10,8 г Трис (оксиметил) аминометана, 5,5 г борной кислоты и 0,92 г этилендиаминтетрауксусной кислоты, довести дистиллированной водой до метки, перемешать до полного растворения;

- срок хранения 1 х раствора - 10 дней.

3.7. Приготовление раствора бромистого этидия - CО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОHО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОNО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМОBr (10 мг/мл):

- растворить 1 г бромистого этидия в 100 мл дистиллированной воды;

- срок хранения в посуде темного стекла при температуре от 4°С до 5°С - 12 мес.

3.8. Приготовление осаждающего буфера СТАВ:

- в мерную колбу внести 1 г СТАВ, 0,5 г NaCl, добавить 100 мл деионизированной воды, довести раствором 30%-ной натрия гидроокиси рН раствора до 8,0, довести объем деионизированной водой до 200 мл;

- хранить при 4°C не более 6 месяцев.

3.9. Приготовление 1,2 М NaCl:

- растворить 7,0 г NaCl в 100 мл деионизированной воды, перемешать;

- хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года.

3.10. Приготовление 10%-ного раствора SDS:

- растворить 10 г SDS в 90 мл дистиллированной воды;

- хранить при комнатной температуре не более 1 года.

IV. Выделение ДНК

4.1. Метод выделения ДНК с помощью СТАВ:

- навеску исследуемого гомогенизированного продукта массой 100 мг поместить в микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф на 1,5 мл;

- добавить 300 мкл деионизированной воды, перемешать шпателем;

- добавить 500 мкл лизирующего СТАВ-буфера с меркаптоэтанолом, тщательно перемешать шпателем;

- инкубировать при 65°С 90 минут;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- перести 500 мкл супернатанта в чистую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл;

- добавить 500 мкл хлороформа, перемешать на вортекс 30 секунд;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- перенести 500 мкл верхней фракции в чистую пробирку, добавить 500 мкл хлороформа, перемешать;

- центрифугировать 5 минут при 13000 об/мин;

- перенести верхнюю фракцию в чистую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл, не захватывая слой хлороформа;

- добавить 2 объема СТАВ-осаждающего буфера, перемешать пипетированием;

- инкубировать 60 минут при комнатной температуре;

- центрифугировать 5 минут при 13000 об/мин;

- удалить супернатант;

- растворить осадок в 350 мкл NaCl (1,2 М);

- добавить 350 мкл хлороформа, перемешать на вортекс 30 секунд;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- перенести верхнюю фракцию в чистую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл;

- добавить 0,6 объема изопропилового спирта, перемешать;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- удалить супернатант;

- добавить 500 мкл 70%-ного раствора этилового спирта и перемешать на вортекс;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- удалить супернатант;

- подсушить осадок не более 5 минут при 65°C для удаления капель спирта;

- растворить осадок в 100 мкл деионизированной воды, осторожно встряхивая, полученный раствор ДНК готов для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР);

- хранить при минус 20°С.

4.2. Сорбционный метод выделения ДНК:

- в центрифужные пробирки типа Эппендорф на 1,5 мл внести 300 мг бисера и 70-80 мг анализируемого материала, добавить 0,5 мл 5 мМ NaО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО - соль ЭДТА и термостатировать 30-60 минут при 65°С;

- к содержимому пробирки добавить 400 мкл лизирующего реагента, перемешать на вортекс до максимально однородного состояния, термостатировать при 65°C 60-120 минут;

- перемешать на вортекс, добавить 500 мкл бидистиллированной воды, перемешать на вортекс;

- центрифугировать 1 минуту при 12000 об/мин, прозрачный супернатант перенести в чистую пробирку;

- добавить 20 мкл сорбента, пробирку поместить на ротатор или перемешивать на вортекс 10 минут при 10-20 об/мин;

- центрифугировать 10 секунд при 12000 об/мин;

- удалить супернатант, к осадку добавить 200 мкл лизирующего реагента, перемешать на вортекс до однородного состояния, центрифугировать 10 секунд при 12000 об/мин;

- удалить супернатант, к осадку добавить 1 мл рабочего раствора солевого буфера, перемешать содержимое пробирки переворачиванием 5-10 раз, центрифугировать 10 секунд при 12000 об/мин;

- удалить супернатант, не задевая осадка;

- к осадку добавить 1 мл рабочего раствора солевого буфера, перемешать на вортекс, центрифугировать 10 секунд при 12000 об/мин, удалить супернатант;

- повторить предыдущий пункт еще раз;

- подсушить осадок при 65°С в течение 4-5 минут;

- к осадку добавить 50 мкл экстракционного раствора, отбор раствора из исходного флакона проводить при постоянном помешивании, не допуская выпадения в осадок гранул ионообменной смолы;

- суспендировать содержимое пробирки на вортекс 5-10 секунд до гомогенного состояния, затем термостатировать 10 минут при 65°С;

- повторно суспендировать пробу на вортекс, центрифугировать 1 минуту при 12000 об/мин;

- раствор ДНК перенести в чистую пробирку, хранить при минус 20°C.

V. ПЦР с электрофоретической детекцией

5.1. Идентификация видоспецифичной растительной ДНК.

5.1.1. Идентификация ДНК сои, ген лектина:

- праймеры:

1) 5' GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C 3',

2) 5' GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

193,70

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

25,00

Смесь нуклеотидов (4 млM)

12,50

Праймер 1 (20 мкМ)

6,25

Праймер 2 (20 мкМ)

6,25

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,30


- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/95°C,

Амплификация

30 сек/95°C, 30 сек/60°C, 40 сек/72°C,

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

3 мин/72°C

Фаза остывания

4°C


- после проведения амплификации пробы готовы для проведения электрофореза в агарозном геле, продукт амплификации - 118 пар нуклеотидов, приложение 2.1.

5.1.2. Идентификация ДНК кукурузы, ген зеина:

- праймеры:

1) 5' TGC TTG CAT TGT TCG CTC TCC TAG 3',

2) 5' GTC GCA GTG ACA TTG TGG CAT 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

193,70

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

25,00

Смесь нуклеотидов (4 мM)

12,50

Праймер 1 (20 мкМ)

6,25

Праймер 2 (20 мкМ)

6,25

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,30


- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/95°C

Амплификация

1 мин/94°C, 1 мин/60°C, 1 мин/72°C

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

7 мин/72°C

Фаза остывания

4°C


- после проведения амплификации пробы готовы для проведения электрофореза в агарозном геле, продукт амплификации - 329 пар нуклеотидов, приложение 2.2.

5.1.3. Идентификация ДНК картофеля, ген фосфоенолпируват карбоксилазы:

- праймеры:

1) 5' GTC TCC TTG GCT TGT CAT TTT ATG C 3',

2) 5' CAA GTT AGC TGC CAT CAT TCT GGC C 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

188,70

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

25,00

Смесь нуклеотидов (4 млM)

12,50

Праймер 1 (20 мкМ)

6,25

Праймер 2 (20 мкМ)

6,25

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,30


- реакционную смесь перемешать на вортекс и центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/95°C

Амплификация

1 мин/94°C, 1 мин/60°C, 1 мин/72°C

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

7 мин/72°C

Фаза остывания

4°C


- после проведения амплификации пробы готовы для проведения электрофореза в агарозном геле, продукт амплификации - 1149 пар нуклеотидов, приложение 2.3.

5.2. Скриниговый анализ.

5.2.1. Метод идентификации промотора 35 S:

- праймеры:

1) 5' GCT CCT ACA AAT GCC ATC A 3',

2) 5' GAT AGT GGG ATT GTG CGT CA 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

169,0

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

29,0

Раствор БСА (20 мкг/мл)

29,0

Смесь нуклеотидов (4 млM)

14,0

Праймер 1 (20 мкМ)

7,0

Праймер 2 (20 мкМ)

7,0

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,5


- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/94°C

Амплификация

20 сек/94°C, 40 сек/54°C, 60 сек/72°C

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

3 мин/72°C

Фаза остывания

1 мин/4°C

Скорость нагрева

0,77°C/сек

Скорость остывания

3,15°C/сек


- после проведения амплификации пробы готовы для проведения электрофореза в агарозном геле, продукт амплификации - 195 пар нуклеотидов, приложение 2.4.

5.2.2. Метод идентификации терминатора NOS:

- праймеры:

1) 5' GAA TCC TGT TGC CGG TCT TG 3',

2) 5' TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

169,0

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

29,0

Раствор БСА (20 мкг/мл)

29,0

Смесь нуклеотидов (4 млM)

14,0

Праймер 1 (20 мкМ)

7,0

Праймер 2 (20 мкМ)

7,0

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,5


- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/94°C

Амплификация

20 сек/94°C, 40 сек/54°C, 60 сек/72°C

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

3 мин/72°C

Фаза остывания

1 мин/4°C


- после проведения амплификации пробы готовы для проведения электрофореза в агарозном геле, продукт амплификации - 180 пар нуклеотидов, приложение 2.5.

5.2.3. Метод идентификации маркерного гена npt II:

- праймеры:

1) 5' GGA TCT CCT GCT ATC T 3',

2) 5' GAT CAT CCT GAT CGA C 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

16,53

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

3,30

Раствор БСА (20 мкг/мл)

3,30

Смесь нуклеотидов (4 млM)

0,62

Праймер 1 (32 пикомоль/мкл)

0,40

Праймер 2 (59 пикомоль/мкл)

0,20

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

0,15


- реакционную смесь перемешать на вортекс и центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/ 94°C

Амплификация

30 cек/95°C, 50 cек/50°C, 40 cек/72°C

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

3 мин/72°C

Фаза остывания

4°C


- после проведения амплификации пробы готовы для проведения электрофореза в агарозном геле, продукт амплификации - 173 пары нуклеотидов, приложение 2.6.

5.3. Идентификация линий ГМО.

5.3.1. Метод идентификации сои линии 40-3-2:

- 1-й раунд, внешние праймеры:

1) 5'CCA CTG ACG TAA GGG ATG ACG 3',

2) 5'CAT GAA GGA CCG GTG GGA GAT 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

188,70

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

25,00

Смесь нуклеотидов (4 млM)

12,50

Праймер 1 (20 мкМ)

6,25

Праймер 2 (20 мкМ)

6,25

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,30


- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/ 95°C

Амплификация

30 сек/95°C, 30 сек/60°C, 40 сек/72°C

Количество циклов амплификации

25

Конечное удлинение

3 мин/72°C

Фаза остывания

4°C


- после проведения амплификации пробы поместить на холод, хранение не более одного часа в холодильнике до проведения 2-го раунда;

- 2-й раунд, внутренние праймеры:

3) 5' ATC CCA CTA TCC TTC GCA AGA 3',

4) 5' TGG GGT TTA TGG AAA TTG GAA 3'.

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

193,70

Буфер для ПЦР с MgClО надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО (10х)

25,00

Смесь нуклеотидов (4 млM)

12,50

Праймер 3 (20 мкМ)

6,25

Праймер 4 (20 мкМ)

6,25

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,30


- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,5 мкл в каждую, добавить 0,5 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

Доступ к полной версии этого документа ограничен

Ознакомиться с документом вы можете, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

Что вы получите:

После завершения процесса оплаты вы получите доступ к полному тексту документа, возможность сохранить его в формате .pdf, а также копию документа на свой e-mail. На мобильный телефон придет подтверждение оплаты.

При возникновении проблем свяжитесь с нами по адресу uwt@kodeks.ru

О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

Название документа: О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

Номер документа: 80

2.3.2.2306-07

4.2.2304-07

4.2.2305-07

Вид документа: Постановление Главного государственного санитарного врача РФ

МУ (Методические указания)

МУК (Методические указания по методам контроля)

Принявший орган: Главный государственный санитарный врач РФ

Статус: Действующий

Опубликован: Российская газета, N 45, 01.03.2008 (текст постановления)
Дата принятия: 30 ноября 2007

Дата начала действия: 12 марта 2008
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах