Статус документа
Статус документа


ГОСТ 32638-2020



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Метод оценки генных мутаций на клетках млекопитающих in vitro

Methods of testing the impact of chemical products on the human body. Method for evaluating the gene mutations in mammalian cells in vitro



МКС 75.080

         11.020

         11.120.01

Дата введения 2021-07-01



Предисловие


Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Российский научно-технический центр информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия" (ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июня 2020 г. N 131-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

ЗАО "Национальный орган по стандартизации и метрологии" Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 октября 2020 г. N 910-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32638-2020 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2021 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD Test N 476:2016 "Руководство по испытанию химических веществ. Метод оценки генных мутаций на клетках млекопитающих in vitro с использованием генов Hprt and xprt" ("Guideline for testing of chemicals. In Vitro mammalian cell gene mutation tests using the Hprt and xprt genes", MOD) путем:

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

- включения дополнительного раздела 1, дополнительных слов, которые выделены в тексте курсивом;

- изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВЗАМЕН ГОСТ 32638-2014

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение


Руководства Организации экономического сотрудничества и развития (OECD) периодически пересматриваются с учетом научного прогресса, изменений в нормативном законодательстве и с целью защиты животных. Впервые руководство OECD Test N 476 было принято в 1984 г. В 1997 г. был принят пересмотренный документ, включающий новые данные, полученные в этой области, отражающий почти тридцатилетний опыт работ с использованием данного метода и также являющийся результатом разработки отдельного нового руководства, посвященного методу оценки генных мутаций на клетках млекопитающих in vitro с использованием гена тимидинкиназы. Настоящее руководство является частью серии руководств по генетической токсикологии. Настоящий документ предоставляет краткую информацию об исследованиях в области генетической токсикологии и обзор последних изменений, которые были внесены в руководства по испытаниям.

________________

См. [1].

Целью метода оценки генных мутаций на клетках млекопитающих in vitro является обнаружение генных мутаций, индуцируемых химическими соединениями. В клеточных линиях, используемых в экспериментах, измеряют прямые мутации репортерных генов (генетических маркеров), в частности эндогенных гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы (Hprt - в клетках грызунов, HPRT - в клетках человека, в настоящем руководстве обобщенно именуемые геном Hprt и геном HPRT) и трансген ксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы (gpt) (обозначаемый XPRT).

Анализы мутации HPRT и XPRT выявляют разные спектры генетических событий. В дополнение к мутациям, обнаруженным анализом HPRT (например, замена пар оснований, сдвиг рамки считывания, небольшие делеции и вставки), аутосомное расположение трансгена gpt позволяет обнаружить мутации, возникающие в результате больших делеций и, возможно, митотической рекомбинации, не определяемой с использованием HPRT анализа, потому что ген Hprt расположен в Х-хромосоме. В настоящее время для нормативного регулирования XPRT анализ используют менее широко, чем HPRT анализ.

________________

См. [2]-[7].

     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает требования к проведению испытаний по оценке генных мутаций на клетках млекопитающих in vitro, вызываемых химическими веществами, путем измерения прямых мутаций генов тимидинкиназы (ТК) и гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы (HPRT) и трансгена ксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы (XPRT) и применяется для скрининга потенциальной мутагенности и канцерогенности веществ для млекопитающих.

     2 Термины и определения


В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 мутагены, замещающие пары оснований (base pair substitution mutagens): Вещества, вызывающие замещение пар оснований в дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК).

2.2 эффективность клонирования (cloning efficiency): Процент высеянных клеток низкой плотности, способных вырасти в колонию, которую можно подсчитать.

2.3 концентрации (concentrations): Конечные концентрации исследуемого химического вещества в культуральной среде.

2.4 цитотоксичность (сytotoxicity): Снижение относительной выживаемости клеток, подвергшихся воздействию, по сравнению с отрицательным контролем.

2.5 прямая мутация (forward mutation): Генная мутация от родительского типа к мутантному типу, которая приводит к изменению или потере активности фермента или функции кодируемого белка.

2.6 мутаген, вызывающий мутации со сдвигом рамки считывания (frameshift mutagens): Вещества, которые вызывают вставку или делецию одной или нескольких пар оснований в молекуле ДНК.

2.7 генотоксичность (genotoxic): Общий термин, охватывающий все типы повреждений ДНК или хромосом, включая разрывы ДНК, аддукты, перестройки, мутации, хромосомные аберрации и анеуплоидию.

Примечание - Не все виды генотоксических эффектов приводят к мутациям или стабильному повреждению хромосом.

2.8 HAT-среда (HAT medium): Среда, содержащая гипоксантин, аминоптерин, тимидин и используемая для очистки мутантов Hprt.

2.9 митотическая рекомбинация (mitotic recombination): Рекомбинация между гомологичными хроматидами во время митоза,

Примечание - Митотическая рекомбинация может приводить к индукции двухцепочечных разрывов ДНК или к потере гетерозиготности.

2.10 среда MPA (MPA medium): Среда, содержащая ксантин, аденин, тимидин, аминоптерин, микофеноловую кислоту, используемая для очистки мутаций хрrt.

2.11 мутагенный (mutagenic): Вызывающий наследуемое изменение последовательностей пар оснований ДНК в генах или в структуре хромосом (хромосомные аберрации).

2.12 частота мутаций; MF [mutant frequency (MF)]: Отношение числа выявленных мутантных клеток к общему числу выживших клеток.

2.13 время фенотипической экспрессии (phenotypic expression time): Период времени после воздействия, в течение которого генетическое изменение фиксируется в геноме и любые предшествующие генные продукты истощаются настолько, что изменяется фенотипический признак.

2.14 относительная выживаемость; RS [relative survival (RS)]: Мера цитотоксичности, связанная с воздействием.

Примечание - RS - это эффективность клонирования (СЕ) клеток, высеянных сразу после воздействия, с поправкой на потерю клеток в процессе воздействия, по сравнению с эффективностью клонирования в отрицательных контролях (выживаемость принимают равной 100%).

2.15 S9 фракция печени (S9 liver fractions): Супернатант гомогената печени после 9000 g центрифугирования, экстракт сырой печени.

2.16 смесь S9 (S9 mix): Смесь S9 фракции печени и кофакторов, необходимых для метаболической активности ферментов.

2.17 контроль растворителя (solvent control): Общий термин для определения контрольных культур только в растворителе, используемом для растворения исследуемого химического вещества.

2.18 необработанный контроль (untreated control): Культуры клеток, которые не подвергают обработке (т.е. отсутствуют химические вещества или растворители), но подвергают одновременно такому же анализу, что и культуры, обработанные исследуемым химическим веществом.

     3 Основные положения и ограничения

3.1 Испытания, проводимые in vitro, обычно требуют использования экзогенного источника метаболической активации. Экзогенная система метаболической активации не может полностью воспроизводить условия in vivo.

3.2 Следует избегать условий, которые могут привести к положительным артефактам (например, возможному взаимодействию с испытуемой системой), не вызванным прямым взаимодействием между исследуемыми химическими веществами и генетическим материалом клетки. Такие условия касаются изменения значения pH или осмотической концентрации раствора, взаимодействия с компонентами среды или высокого уровня цитотоксичности. Цитотоксичность, превышающую рекомендованные верхние уровни, приведенные в 5.2.2.3, считают чрезмерной для анализа HPRT.

________________

См. [8]-[10].

См. [11], [12].

Доступ к полной версии документа ограничен
Полный текст этого документа доступен на портале с 20 до 24 часов по московскому времени 7 дней в неделю.
Также этот документ или информация о нем всегда доступны в профессиональных справочных системах «Техэксперт» и «Кодекс».
Нужен полный текст и статус документов ГОСТ, СНИП, СП?
Попробуйте «Техэксперт: Лаборатория. Инспекция. Сертификация» бесплатно
Реклама. Рекламодатель: Акционерное общество "Информационная компания "Кодекс". 2VtzqvQZoVs