ГОСТ Р 70296-2022

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ

Метод полуколичественной оценки содержания ДНК кур, быка домашнего, свиньи, лошади в мясной продукции, в том числе из мяса птицы

Food products. The method for semi-quantitative assessment of the content of chicken, bovine, pig, horse DNA in meat products, including poultry

ОКС 67.050

         67.120.10

         67.120.20

Дата введения 2022-12-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 "Охрана жизни и здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 августа 2022 г. N 794-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясную продукцию, в том числе из мяса птицы (мясо, мясо птицы, сырье для производства мясной продукции на всех этапах переработки, колбасные и кулинарные изделия, полуфабрикаты), в том числе подвергавшуюся термической обработке, и устанавливает метод полуколичественной оценки содержания ДНК кур (Gallus gallus), быка домашнего (Bos taurus), свиньи (Sus scrofa), лошади (Equus caballus) относительно общей ДНК млекопитающих и птиц с использованием полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.

Стандарт не распространяется на консервированную продукцию и не предназначен для качественного выявления видоспецифичной ДНК кур, быка домашнего, свиньи, лошади. Исследование в соответствии с настоящим стандартом проводится только после подтверждения наличия ДНК кур, быка домашнего, свиньи, лошади в исследуемом образце с использованием качественных методов.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 5962 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ 7702.2.0 Продукты убоя птицы, полуфабрикаты из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

ГОСТ 26678 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

ГОСТ 28311 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 30363 Продукты яичные жидкие и сухие пищевые. Технические условия

ГОСТ 31719 Продукты пищевые и корма. Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)

ГОСТ 31985 Услуги общественного питания. Термины и определения

ГОСТ 32951 Полуфабрикаты мясные и мясосодержащие. Общие технические условия

ГОСТ 33102 Продукция мясной промышленности. Классификация

ГОСТ ISO/IEC 17025 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ Р 52427 Промышленность мясная. Продукты пищевые. Термины и определения

ГОСТ Р 52833 (ИСО 22174:2005) Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения

ГОСТ Р 58144 Вода дистиллированная. Технические условия

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если изменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины, определения, сокращения и обозначения

3.1 В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52833, ГОСТ 7702.2.0, ГОСТ 33102, ГОСТ 32951, ГОСТ Р 52427, ГОСТ 31985, ГОСТ 31719 и ГОСТ 30363, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1 адрес ячейки: Буквенно-цифровой код, который определяется именем столбца и номером строки, на пересечении которых находится ячейка электронной таблицы.

3.1.2 амплификация ДНК: Процесс, многократно увеличивающий число копий фрагмента ДНК, например, участка генома какого-либо организма.

3.1.3 анализируемая проба (проба для анализа): Проба, подготовленная для проведения испытаний или анализа, которую полностью и единовременно используют для проведения испытания или анализа.

3.1.4 встроенная функция: Заранее написанная процедура преобразования данных в электронной таблице.

3.1.5 диапазон ячеек: Группа последовательно расположенных ячеек.

3.1.6 ДНК-зонд для ПЦР в режиме реального времени: Олигонуклеотид, меченный флуоресцентным красителем и использующийся для гибридизации со специфическим участком молекулы ДНК.

3.1.7 ДНК-полимераза: Термостабильный фермент (ДНК-зависимая ДНК-полимераза), катализирующий синтез ДНК на ДНК-матрице.

3.1.8 коэффициент вариации RSD: Отношение стандартного отклонения к среднему значению, показывающее степень изменчивости по отношению к среднему показателю выборки.

3.1.9 коэффициент корреляции Пирсона : Значение, характеризующее существование линейной зависимости между двумя величинами.

Примечание - Коэффициент корреляции Пирсона может принимать значения от 0 до 1. При наличии линейной зависимости коэффициент стремится к единице.

3.1.10 лабораторная проба: Проба, предназначенная для лабораторных исследований или испытаний.

3.1.11 мастермикс: Смесь реагентов, необходимых для амплификации ДНК в ПЦР, включающая специфические праймеры и дНТФ.

3.1.12 нуклеотидная последовательность: Порядок чередования нуклеотидных остатков в ДНК.

3.1.13 отрицательный контроль ПЦР (К-): Реакционная смесь для проведения ПЦР, заведомо не содержащая целевой нуклеиновый материал.

3.1.14 полимеразная цепная реакция; ПЦР: Циклический ферментативный синтез ДНК, позволяющий амплифицировать фрагмент ДНК in vitro.

3.1.15 положительный контроль ПЦР (К+): Реакционная смесь для проведения ПЦР, заведомо содержащая целевой нуклеиновый материал (положительный контрольный образец).

3.1.16 смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов; дНТФ: Раствор, содержащий дезоксиаденозинтрифосфат, дезоксицитидинтрифосфат, дезоксигуанинтрифосфат, дезокситимидинтрифосфат, являющиеся "строительными блоками" для синтеза новых комплементарных цепей ДНК.

3.1.17 специфичность: Способность применяемого метода распознавать исключительно целевую последовательность и отличать ее от сходных последовательностей и загрязняющих примесей.

3.1.18 среднеквадратичное отклонение; СКО: Статистический показатель, характеризующий разброс измеряемых значений вокруг среднего значения.

3.1.19 электронная таблица: Компьютерная программа, позволяющая проводить вычисления с данными, представленными в виде двумерных массивов.

3.1.20 ячейка электронной таблицы: Область, определяемая пересечением столбца и строки электронной таблицы, имеющая свой уникальный адрес.

3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения и обозначения:

ВК - внутренний контроль;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

п.н. - пара нуклеотидов;

Ct - значение порогового цикла ПЦР, т.е. значение цикла амплификации, на котором флуоресценция от расщепленного зонда превысила значение фоновой флуоресценции;

dCt - разница значений пороговых циклов Ct для видоспецифичной последовательности и внутреннего контроля;

LG(%) - десятичный логарифм значения процентного содержания ДНК животного в пробе.

     4 Условия выполнения испытаний и требования безопасности

4.1 Общие требования, предъявляемые к компетентности испытательной лаборатории и проведению испытаний - по ГОСТ ISO/IEC 17025.

Общие требования и организация работы лаборатории, использующей методы амплификации ДНК для молекулярно-генетических испытаний, устройство и оснащение лаборатории - по [1].

4.2 Общие требования к персоналу лаборатории - по ГОСТ ISO/IEC 17025 и [1]. Персонал должен знать правила работы в лаборатории, использующей методы амплификации ДНК, санитарно-гигиенические нормы, правила охраны труда, пожарной и электробезопасности. Персонал, выполняющий испытания, должен владеть методами выделения ДНК, ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.

4.3 При работе с электроустановками следует соблюдать требования электробезопасности, установленные в ГОСТ 12.1.019.

4.4 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

     5 Средства измерений, оборудование, реактивы и материалы

При проведении испытаний оборудование следует обслуживать в соответствии с инструкциями производителя и требованиями ГОСТ ISO/IEC 17025.

5.1 Для проведения испытаний применяют следующие средства измерений и оборудование:

- амплификатор для проведения ПЦР в режиме реального времени;

________________

Примером подходящего оборудования может служить амплификатор Rotor-Gene Q (Qiagen Германия) или Rotor-Gene 6000 (Corbett Research Pty Ltd. Австралия). Данная информация не является рекламой и рекомендована для удобства пользователей настоящего стандарта.

- набор автоматических дозаторов одноканальных лабораторных по ГОСТ 28311 с варьируемыми объемами доз;

- термостат твердотельный с диапазоном температур от 25°С до 100°С для микропробирок;

- флуориметр или спектрофотометр для измерения концентрации ДНК;

________________

Примером подходящего оборудования может служить анализатор NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, США) или флуориметр Quantus (Promega, США). Данная информация не является рекламой и рекомендована для удобства пользователей настоящего стандарта.