ГОСТ Р ИСО 20184-2-2021 Молекулярные диагностические исследования in vitro. Требования к процессам преаналитического этапа исследования замороженных тканей. Часть 2. Выделенные белки

     6.5 Выделение общего белка

6.5.1 Общие положения

Гистологическую характеристику клеточного состава и патологических изменений образца или фрагментов следует выполнять (например, на срезах, окрашенных гематоксилином) в соответствии с признанной на международном уровне гистопатологической классификацией (например, классификация опухолей ВОЗ/МАИР [14]). Если образец или фрагмент используют для молекулярной диагностики, фракция клеток-мишеней должна быть оценена до выделения белка. Количество клеток-мишеней должно быть достаточным для проведения исследования. Если образец используют не для диагностики, а, например, для научных исследований, рекомендуется использовать аналогичный подход.

Не должно допускаться оттаивание образца до его гомогенной дисперсии в лизирующем буфере, содержащем вещества, ингибирующие разложение или модификацию белков, таких как ингибиторы протеаз, киназ или фосфатаз. Образец следует тщательно измельчить или нарезать на мелкие части в замороженном состоянии и тщательно диспергировать в лизирующем буфере, содержащем вышеупомянутые ингибирующие вещества. Поэтому последующая гомогенизация замороженного образца или фрагмента в лизирующем буфере должна быть проведена сразу после помещения ткани в лизирующий буфер.

Если обработанный образец или фрагмент содержит морозильную среду, то это должно быть задокументировано.

Все инструменты, например пинцет, используемые в работе с замороженным образцом/фрагментом для его гомогенизации, криосреза или переноса в буфер для лизиса, должны быть очищены, чтобы минимизировать загрязнение протеазой, киназой или фосфатазой, а также следует охладить их перед использованием как минимум до температуры минус 20°C. Гистологи должны быть в перчатках. Соответствующие части микротома, включая многоразовое лезвие, должны очищаться после изготовления срезов каждого замороженного образца ткани/фрагмента. Следует рассмотреть возможность использования новых одноразовых лезвий на микротоме, чтобы избежать перекрестной контаминации.

Если есть сомнения в правильной идентификации образца или фрагмента, должна быть проведена верификация идентификации.

Выделение белка является ключевым этапом диагностического рабочего процесса, которому должно быть уделено особое внимание во время валидации всего рабочего процесса.

6.5.2 Использование промышленных наборов

При использовании наборов реагентов, находящихся в обращении, предназначенных для выделения белка из замороженных тканей, должны соблюдаться инструкции производителя по их использованию.

6.5.3 Использование собственных протоколов лабораторий

6.5.3.1 Если набор используют не в соответствии с его назначением, но в целях, определенных пользователем, должны быть написаны и использованы соответствующие инструкции пользователя.

6.5.3.2 Если лаборатория использует свой собственный протокол, отличающийся от протокола производителя набора, то должна быть проведена валидация в целях подтверждения, что он пригоден для этой цели.

Использование реагентов из наборов разных производителей может привести к ухудшению результатов, т.к. эти реагенты могут быть несовместимы. Компоненты для диагностического тестирования следует использовать вместе только в том случае, если компоненты совместимы и проведена валидация их совместной работы.