ГОСТ Р ИСО 18763-2019

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КАЧЕСТВО ПОЧВЫ

Определение токсического воздействия загрязняющих веществ на всхожесть и рост на ранних стадиях высших растений

Soil quality. Determination of the toxic effects of pollutants on germination and early growth of higher plants

ОКС 13.080.30

Дата введения 2021-01-01

Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (АО "ВНИИС") на основе официального перевода на русский язык англоязычной версии указанного в пункте 4 стандарта, который выполнен АО "ВНИИС"

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 025 "Качество почв, грунтов и органических удобрений"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 августа 2019 г. N 497-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 18763:2016* "Качество почвы. Определение токсического воздействия загрязняющих веществ на всхожесть и рост на ранних стадиях высших растений" (ISO 18763:2016 "Soil quality - Determination of the toxic effects of pollutants on germination and early growth of higher plants", IDT).

________________
     * Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан Техническим комитетом ISO/TC 190 "Качество почв", подкомитетом SC 4 "Биологические методы" Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

Введение

Экотоксикологическое тестирование проб почвы или отходов, сбрасываемых на почву, необходимо для оценки потенциального экологического риска, возникающего в силу загрязнения почвы или сброса таких отходов, как осадки сточных вод, на сельскохозяйственные земельные участки. Также существует необходимость контроля качества почвы после рекультивации промышленных площадок. Вследствие этого разработано практичное и быстрое тестирование всхожести и роста, основанное на прорастании семян и росте сеянцев в контролируемых условиях окружающей среды.

Данное испытание не требует предварительной обработки семян и проводится в прозрачных планшетах, инкубирующихся вертикально, для того чтобы обеспечить видимость корней и ростков проросших семян. После 72-часового периода воздействия планшеты для тестирования фотографируются, и полученное изображение может быть проанализировано посредством анализа изображения по нескольким параметрам, таким как процентные показатели всхожести семян, длины корней и высоты ростков. Для обеспечения учета разной степени чувствительности, свойственной различным видам растений, испытания проводят с использованием семян трех видов растений: одного однодольного - сорго двухцветного (Sorghum saccharatum) и двух двудольных - кресс-салата (Lepidium sativum) и горчицы белой (Sinapis alba).

Значительным преимуществом данного тестирования является тот факт, что после съемки и сохранения фотографий планшетов для тестирования измерения с помощью анализа изображений можно перенести на устанавливаемый пользователем срок.

В качестве негативного контроля могут быть использованы референтные или стандартные почвы, такие как стандартная искусственная почва ИСО, изготовленная в соответствии с ИСО 11269-1 и ИСО 11269-2.

Коммерчески доступные семена со сроком хранения более одного года позволяют проводить данное тестирование в любое время года.

Два раунда международных межлабораторных сравнительных испытаний показали, что данное тестирование дает хорошие результаты.

По результатам значительного количества исследований опубликованы данные по проведению такого тестирования с различными видами почв и почвенных материалов и с несколькими типами видов растений.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения влияния почвы и околопочвенных материалов на всхожесть семян и ранние этапы роста высших растений. Конечные результаты являются показателями, полезными для оценки качества почвы как ареала обитания организмов. Настоящий стандарт применим ко всем почвам, в которых почвенные организмы активны, и может быть использован для оценки следующих факторов:

- характера воздействия почвы на растения в силу токсичности твердых или жидких химикатов, загрязняющих почву или иные материалы (компост, ил, отходы), а также химикатов, добавленных в почву;

- изменений в характере воздействия почвы на растения после проведения мероприятий по восстановлению почвы.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта. Для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

ISO 11269-1, Soil quality - Determination of the effects of pollutants on soil flora - Part 1: Method for the measurement of inhibition of root growth (Качество почвы. Определение воздействия загрязняющих веществ на флору почвы. Часть 1. Метод измерения замедления роста корней)

ISO 11269-2, Soil quality - Determination of the effects of pollutants on soil flora - Part 2: Method for the measurement of inhibition of root growth (Качество почвы. Определение воздействия загрязняющих веществ на флору почвы. Часть 2. Воздействие контаминированной почвы на прорастание и ранний рост высших растений)

ISO/TS 20281, Water quality - Guidance on statistical interpretation of ecotoxicity data (Качество воды. Руководящие указания по статистической интерпретации данных по экотоксикологии)

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 искусственная почва (artificial soil): Смесь песка, каолинита, торфа и карбоната кальция, приготовленная согласно стандартам ИСО 11269-1 и ИСО 11269-2.

3.2 контрольная почва (control soil): Референтная или стандартная почва, используемая в качестве контроля и в качестве среды при приготовлении серии разбавлений с исследуемыми почвами или референтными веществами.

3.3 референтная почва (reference soil): Незагрязненная почва из определенного места (например, отобранная поблизости от загрязненного участка) со свойствами (содержание питательных веществ, pH, содержание органического углерода и механический состав), близкими к свойствам исследуемой почвы.

3.4 стандартная почва (standard soil): Почва, отобранная в поле или приготовленная искусственно, свойства которой (pH, механический состав, содержание органического углерода) находятся в известном диапазоне.

Примечание - Свойства стандартных почв могут отличаться от свойств исследуемой почвы.

3.5 исследуемая почва (test soil): Природная или искусственная чистая почва, в которую добавлена исследуемая субстанция, или загрязненная природная почва (почва с площадки) [5].

3.6 появление ростков (seedling emergence): Появление видимого ростка над поверхностью покровного материала.

[ИСО 17126:2005, 3.1, с изменениями]

3.7 прорастание семян (germination): Появление корешка длиной не менее 1 мм.

3.8 чистая вода (pure water): Вода определенной степени чистоты, получаемая, например, путем однократной перегонки, деионизации, ультрафильтрации или обратного осмоса [5].

3.9 длина корня (root length): Длина корня от семени до кончика корня.

3.10 длина ростка (shoot length): Длина части растения, растущей вверх, от семени до кончика растения.

3.11 влагонасыщенность (water saturation): Максимальный объем влаги, который почва может удержать, преодолевая силу тяжести, в условиях покоя почвы, условно определяется как содержание влаги через два-три дня после полного влагонасыщения.

[ИСО 11074:2015, 2.1.5 влагоемкость грунта, с изменениями]

3.12 влагонасыщенная почва (water saturated soil): Почва, достигшая максимально возможного содержания влаги.

3.13 влагоемкость (water-holding capacity): Масса воды, испаряющейся из влагонасыщенной почвы при высушивании почвы до постоянной массы при температуре 105°С, разделенная на сухую массу почвы [7].

3.14 негативный контроль (negative control): Материал или субстанция, который(ая) при тестировании в рамках определенной процедуры демонстрирует пригодность процедуры к обеспечению воспроизводимой, уместно негативной, инертной или минимальной ответной реакции в рамках системы тестирования.

[ИСО 10993-10:2010, 3.12, с изменениями]

3.15 процентный показатель воздействия (effect percentage): Снижение всхожести семян и роста корней и/или ростков растений в исследуемой почве по сравнению с контрольной почвой, выраженное в процентах.

     4 Принцип

Данный метод основан на сравнении всхожести и раннего роста однодольных и двудольных растений в исследуемой почве и/или в серии смесей с содержанием контрольной почвы. Данный метод также может быть использован для тестирования компоста, ила или отходов.

Семена одного однодольного растения, такого как Sorghum saccharatum (L.) Moench, и двух двудольных, таких как Lepidium sativum L. и Sinapis alba L., подвергаются воздействию исследуемых материалов в контролируемых условиях. По прошествии (72±1) ч фиксируют количество проросших семян и длину корней тест-растений в исследуемой почве и контрольной почве.

При использовании других видов семян продолжительность проращивания может быть скорректирована в зависимости от времени, необходимого для прорастания семян и скорости роста корней.

В рамках тестирования используют уникальные плоские и мелкие прозрачные планшеты (6.3), состоящие из двух камер, нижняя из которых содержит увлажненную почву.

Семена отобранных тест-растений размещают на равном расстоянии друг от друга около срединной перегородки планшета (6.3) на черной фильтровальной бумаге (6.5), помещенной поверх увлажненной почвы.

После закрытия планшетов (6.3) прозрачными крышками, планшеты вертикально помещают в держатель (6.4) и выдерживают при температуре (25±1)°С в течение (72±1) ч.

В конце проращивания длина каждого корня (и ростка, при желании) может быть измерена напрямую линейкой и зафиксирована.

В качестве альтернативы может быть получено цифровое изображение планшетов (6.3) с проросшими растениями (с помощью либо цифровой камеры, либо веб-камеры, либо планшетного сканера) для последующего хранения в компьютерном файле. Последующее измерение длины корней осуществляют с помощью анализа изображения. Анализ всхожести и роста корней может быть сделан незамедлительно или отложен на устанавливаемый пользователем срок.

Примечание - Та же процедура при желании может быть применена для измерения длины ростков. Вычисление соотношения высоты ростка к длине корня является возможным дополнительным параметром воздействия.

     5 Реактивы, тест-организмы и среды

5.1 Вода

Чистая вода с электропроводностью менее 10 мкСм/см.

5.2 Тест-организмы

Тест-организмами являются семена одного однодольного растения, такого как Sorghum saccharatum (L.) Moench, и двух двудольных, таких как Lepidium sativum L. и Sinapis alba L.

Исследования проведены с использованием не только трех видов растений, указанных в 5.2, но и других однодольных и двудольных видов растений. Обобщенные сведения о данных исследованиях приведены в приложении А.

Следует избегать семян, покрытых инсектицидами и/или фунгицидами.

5.3 Контрольная почва

В качестве контрольной почвы могут быть использованы либо референтные, либо стандартные почвы, если в этих почвах можно ожидать незатрудненный рост тест-растений.

При сравнении удлинения корней в почвах известного и неизвестного качества контрольная почва и исследуемая почва должны обладать одним гранулометрическим составом и быть настолько похожими, насколько это практически возможно по всем параметрам, кроме присутствия химиката или загрязняющего вещества, являющегося предметом исследования. В действительности значительные различия в свойствах почв кроме присутствия загрязняющего вещества могут приводить к различиям в длине корней и тем самым к получению ложноположительных результатов тестирования.

В качестве альтернативы может быть использована искусственная почва, приготовленная в соответствии с ИСО 11269-1 и ИСО 11269-2.

Субстрат, называемый "искусственная почва", имеет следующий состав: