• Текст документа
  • Статус
Документ в силу не вступил

ГОСТ 34480-2018

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Meat and meat products. Determination of amphenicols and penicillins by tandem liquid mass spectrometry method

МКС 67.120.10

Дата введения 2019-10-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Федеральный научный центр пищевых систем им.В.М.Горбатова" РАН (ФГБНУ "ФНЦ пищевых систем им.В.М.Горбатова" РАН)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 октября 2018 г. N 113-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны
по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны
по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2018 г. N 1023-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34480-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 октября 2019 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на продукты убоя и мясную продукцию, а также на мясо птицы, субпродукты и продукты его переработки, и устанавливает метод определения содержания амфениколовГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (хлорамфеникол, флорфеникол, флорфеникол амин, тиамфеникол) и пенициллиновГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (бензилпенициллин, ампициллин, диклоксациллин, оксациллин, феноксиметилпенициллин, клоксациллин, амоксициллин, нафциллин) с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ВЭЖХ-МС/МС).

________________

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии Настоящий стандарт не исключает возможность определения амфениколов и пенициллинов по ГОСТ Р 54904-2012 "Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором".

Диапазон измерений для хлорамфеникола - от 0,2 до 1000 мкг/кг, для остальных амфениколов и пенициллинов - от 1,0 до 1000,0 мкг/кг

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защитыГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

________________

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ ISO 3696-2013 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроляГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

________________

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

ГОСТ 4025-95 Мясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измеренийГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

________________

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

ГОСТ ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практикеГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

________________

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условияГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

________________

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018 "Вода дистиллированная. Технические условия".

ГОСТ 7269-2015 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 9792-73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 20469-95 Электромясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26272-98 Часы электронно-механические кварцевые наручные и карманные. Общие технические условия

ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

ГОСТ 28165-89 Приборы и аппараты лабораторные из стекла. Аквадистилляторы. Испарители. Установки ректификационные. Общие технические требования

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31467-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 супернатант: Жидкость, располагающаяся над твердым слоем (осадком, седиментом) после центрифугирования пробы.

3.2 элюент: Подвижная фаза (растворитель или смесь растворителей).

3.3 аналит: Вещество, определяемое в пробе объекта аналитического контроля.

4 Сущность метода

Метод основан на извлечении амфениколов и пенициллинов ацетонитрилом, очистке и концентрировании полученного экстракта с помощью твердофазной экстракции (ТФЭ) и последующем количественном определении методом ВЭЖХ-МС/МС.

5 Требования безопасности

5.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

5.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

6 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

Хроматограф жидкостный высокоэффективный, укомплектованный:

- трехквадрупольным масс-спектрометрическим детектором с источником ионизации распылением в электрическом поле (ESI) с диапазоном измерений массы от 2 до 2000 а.е.м.;

- градиентным насосом;

- хроматографической колонкой для ВЭЖХ длиной 50-150 мм и диаметром 2,1-4,6 мм с обращенной фазой С18, размером частиц 1,8-5,0 мкм;

- блоком термостатирования колонок с поддержанием температуры 40°C с точностью ±0,1°C;

- записывающим устройством с компьютерным управлением и автоматической программой обработки хроматографических данных в соответствии с комплектацией хроматографа.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 специального или высокого класса точности или весы лабораторные по нормативным документам государства, принявшего стандарт, с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±1,0 мг

Баня ультразвуковая лабораторная с регулятором времени.

Испаритель роторный по ГОСТ 28165.

Центрифуга лабораторная с центробежным ускорением 4000 g.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469.

Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.

Часы электронно-механические по ГОСТ 26272.

Банки стеклянные вместимостью 250-500 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии с крышкой.

Пипетки градуированные 1-2-1-0,5, 1-2-1-1, 1-2-1-2, 1-2-1-5, 1-2-1-10 по ГОСТ 29227 с относительной погрешностью дозирования не более ±5% или дозаторы автоматические с переменным объемом дозирования и относительной погрешностью дозирования не более ±1%.

Колба мерная 2-100-2, 2-500-2 по ГОСТ 1770.

Колба круглодонная К-1-50-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.

Пробирки центрифужные из полипропилена вместимостью 15 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии.

Флаконы - виалы хроматографические из темного стекла вместимостью 2,0 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии.

Фильтр мембранный из политетрафторэтилена с диаметром пор 0,45 мкм.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696* первой степени очистки.
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru. - Примечание изготовителя базы данных.

Кислота муравьиная, ос.ч.

Метанол, ос.ч.

Ацетонитрил, ос.ч.

Картриджи ТФЭ на основе обращенно-фазного сорбента С18 с размером диаметра частиц не более 60 мкм.

Стандартные образцы амфениколов (хлорамфеникол, флорфеникол, флорфеникол амин, тиамфеникол) и пенициллинов (бензилпенициллин, ампициллин, диклоксациллин, оксациллин, феноксиметилпенициллин, клоксациллин, амоксициллин, нафциллин) с содержанием основного вещества не менее 95,0%.

Внутренний стандарт амфениколов - хлорамфеникол-Д5 с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

Внутренний стандарт пенициллинов - бензилпенициллин-Д7 с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также материалов и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

7 Отбор и подготовка проб

7.1 Отбор проб проводят по ГОСТ 7269, ГОСТ 31467, ГОСТ 9792.

7.2 Пробу измельчают, дважды пропуская через мясорубку с диаметром отверстий решетки 2-4 мм, и тщательно перемешивают.

7.3 Подготовленную пробу помещают в стеклянную банку вместимостью 250-500 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, закрывают крышкой и хранят при температуре (4±2)°C не более 2 сут.

Допускается хранить подготовленную пробу в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18°C не более 30 сут.

8 Подготовка к измерению

8.1 Приготовление растворов

8.1.1 Приготовление растворов внутренних стандартов анализируемых веществ

Для приготовления растворов внутреннего стандарта хлорамфеникола-Д5 и бензилпенициллина-Д7 взвешивают индивидуальный стандартный образец массой, эквивалентной 10,0 мг определяемого компонента (хлорамфеникол-Д5 или бензилпенициллин-Д7), переносят в мерные колбы вместимостью по 100 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии. Для приготовления раствора хлорамфеникола-Д5 доводят объем мерной колбы до метки метанолом. Для приготовления раствора бензилпенициллина-Д7 доводят объем мерной колбы до метки деионизованной водой. По 1,0 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии раствора хлорамфеникола-Д5 и бензилпенициллина-Д7 переносят в мерные колбы вместимостью по 100 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии и доводят объем до метки деионизованной водой. Расчетная концентрация растворов составляет 1000 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии.

Примечание - При расчете концентрации градуировочных растворов учитывают содержание основного вещества в реактиве.

Срок хранения растворов при температуре минус 20°С - не более 9 мес.

8.1.2 Приготовление градуировочных растворов

Для определения амфениколов и пенициллинов готовят градуировочные растворы следующих массовых концентраций: 1000,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (раствор 1), 500,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (раствор 2), 100,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (раствор 3), 10,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (раствор 4), 1,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (раствор 5), 0,2 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (раствор 6 - для хлорамфеникола).

Для приготовления градуировочных растворов сначала готовят основной раствор. Для этого взвешивают индивидуальный стандартный образец массой, эквивалентной 10,0 мг определяемого компонента (амфениколов и пенициллинов), переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии и доводят объем до метки метанолом (для амфениколов) или деионизованной водой (для пенициллинов).

Для приготовления раствора 1 в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии переносят 1,0 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии основного раствора и доводят объем до метки деионизованной водой.

Примечание - При расчете концентрации градуировочных растворов учитывают содержание основного вещества в реактиве.

Для приготовления раствора 2 в хроматографическую виалу переносят 0,5 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии раствора 1 и 0,5 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды.

Для приготовления раствора 3 в хроматографическую виалу переносят 0,1 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии раствора 1 и 0,9 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды.

Для приготовления раствора 4 в хроматографическую виалу переносят 0,1 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии раствора 3 и 0,9 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды.

Для приготовления раствора 5 в хроматографическую виалу переносят 0,1 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии раствора 4 и 0,9 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды.

Для приготовления раствора 6 в хроматографическую виалу переносят 0,2 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии раствора 5 и 0,8 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды.

Срок хранения растворов при температуре минус 20°C - не более 9 мес.

Примечание - При расчете концентрации градуировочных растворов учитывают содержание основного вещества в реактиве.

Допускается приготовление градуировочных растворов иных концентраций в заданном диапазоне измерений метода.

8.2 Приготовление подвижной фазы хроматографической системы

Для проведения хроматографических измерений используют двухкомпонентную подвижную фазу:

- элюент A: 0,1%-ный раствор муравьиной кислоты в деионизованной воде.

В мерную колбу вместимостью 500 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии приливают 450 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды, добавляют 0,5 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии муравьиной кислоты, доводят объем до метки деионизованной водой и перемешивают;

- элюент B: 0,1%-ный раствор муравьиной кислоты в смеси ацетонитрила с метанолом (1:1).

В мерную колбу вместимостью 500 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии приливают 250 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии ацетонитрила и 250 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии метанола, а затем добавляют 0,5 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии муравьиной кислоты и перемешивают.

Перед проведением измерений элюенты дегазируют на ультразвуковой бане.

Растворы хранят в колбах с притертыми пробками в холодильнике при температуре (4±2)°C не более 1 мес.

8.3 Приготовление пробы

8.3.1 Экстракция амфениколов и пенициллинов

Пробу массой 2 г взвешивают с записью результата до второго десятичного знака, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 15 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, добавляют 10 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии ацетонитрила и вносят 0,05 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии раствора внутреннего стандарта (см. 8.1.1) хлорамфеникола-Д5 - при определении амфениколов и бензилпенициллина-Д7 - при определении пенициллинов, тщательно перемешивают. Экстракцию проводят на ультразвуковой бане при комнатной температуре в течение 15 мин. После этого пробу центрифугируют 5 мин с центробежным ускорением 4000 g. Полученный супернатант переносят в круглодонную колбу и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре не выше 40°C. К полученному остатку приливают 2 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды, перемешивают и используют для ТФЭ.

Примечание - Допускается упаривание в токе азота.

8.3.2 Очистка пробы методом ТФЭ

Картриджи ТФЭ предварительно активируют, пропуская 3 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии ацетонитрила, затем 3 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды. Анализируемый раствор наносят на картридж со скоростью 1 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии/мин. Картридж промывают, пропуская 2 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды, отбрасывая смывы. Аналиты элюируют 5 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии ацетонитрила со скоростью 1 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии/мин и переносят в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40°C. К сухому остатку приливают 2 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии деионизованной воды. Ставят на 5 мин на ультразвуковую баню до полного растворения остатка. Раствор пропускают через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу вместимостью 2 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии для ВЭЖХ-МС/МС анализа.

9 Проведение измерений

9.1 Условия хроматографических измерений

Условия проведения измерений методом ВЭЖХ-МС/МС подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа, масс-спектрометрического детектора и хроматографической колонки.

В качестве примера могут быть приведены следующие условия определения амфениколов и пенициллинов, выполненные на системе ВЭЖХ-МС/МС с хроматографической колонкой С18, 4,6ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии50 мм, 1,8 мкм.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (двухкомпонентная подвижная фаза):

объем вводимой пробы - 0,02 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии;

скорость потока подвижной фазы - 0,4 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии/мин;

температура термостата колонки - 40°C.

Параметры и условия ВЭЖХ представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Параметры и условия ВЭЖХ

Время, мин

Соотношение компонентов подвижной фазы

A, %

B, %

0

98

2

1

98

2

5

60

40

6

20

80

9

10

90

9,5

98

2

14

98

2

9.2 Настройка масс-спектрометрического детектора

Для анализа подобраны следующие параметры масс-спектрометрического детектирования:

температура источника - 100°C;

температура газа десольвации - 320°C;

скорость потока газа десольвации - 8 дмГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии/мин;

давление иглы распылителя - 30 psi (206,85 кПа).

Условия регистрации аналитических сигналов в режиме MRM приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условия ионизации распылением в электрическом поле (ESI) с регистрацией положительных (+) и отрицательных (-) ионов

Аналит

Молекулярный ион, m/z

Дочерние ионы, m/z

Напряжение фрагментора (Frag), В

Энергия диссоциации (CE), В

Хлорамфеникол

321,0(-)

152,0

92

13

257,0

5

Хлорамфеникол

323,0(+)

275,0

75

9

165,0

21

Хлорамфеникол-Д5

326,1(-)

157,0

90

15

Хлорамфеникол-Д5

328,1(+)

280,1

70

10

Флорфеникол

356,1(-)

119,1

110

10

185,1

6

Флорфеникол амин

248,1(+)

230,1

100

12

130,1

5

Тиамфеникол

354,1(-)

185,1

120

20

289,9

10

Бензилпенициллин

333,0(-)

192,0

130

20

289,0

10

Бензилпенициллин-Д7

340,0(-)

199,0

130

18

Бензилпенициллин-Д7

342,1(+)

183,1

110

16

Ампициллин

350,1(+)

192,1

100

14

106,1

7

Диклоксациллин

468,0(-)

424,1

90

15

327,0

5

Оксациллин

400,1(-)

259,0

110

12

356,1

7

Феноксиметилпенициллин

349,0(-)

208,0

110

15

305,0

5

Клоксациллин

434,1(-)

290,1

95

10

390,1

8

Амоксициллин

366,1(+)

208,0

100

5

114,1

17

Нафциллин

415,0(+)

256,0

110

15

160,0

10

Условия детектирования оптимизируют в ручном режиме. Для этого используют градуировочный раствор индивидуальных веществ концентрации 100,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, приготовленный по 8.1.2. При этом соотношение сигнал/шум (S/N) для дочерних ионов должно быть не менее 1:10 для раствора индивидуальных веществ концентрации 1,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии. Напряжение на фрагменторе оптимизируют с шагом 10 В по максимальному отклику протонированного молекулярного иона.

Энергию диссоциации (CE) оптимизируют с шагом 5 В по максимальному отклику характерного дочернего иона.

9.3 Градуировка ВЭЖХ-МС/МС системы

9.3.1 Градуировку ВЭЖХ-МС/МС системы проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора.

9.3.2 Градуировочную характеристику строят при помощи матричной градуировки. Для этого проводят приготовление экстракта пробы по 8.3, не содержащей амфениколы и пенициллины. На стадии перерастворения сухого остатка (см. 8.3.2) после твердофазной экстракции в анализируемую пробу добавляют 2 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии смеси градуировочных растворов анализируемых соединений, приготовленных по 8.1.2. Для построения градуировочной зависимости используют растворы следующих массовых концентраций: 1000,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, 100,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, 10,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, 1,0 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии и 0,2 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (для хлорамфеникола).

При построении градуировочной характеристики для количественного определения остаточного количества содержания пенициллинов и амфениколов в инжектор хроматографа вводят по 0,02 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии и не менее двух раз градуировочные растворы различных уровней массовых концентраций.

Фактические массовые концентрации рассчитывают с учетом чистоты стандарта и молекулярного веса соединения в диссоциированном состоянии. Полученные хроматограммы обрабатывают с использованием компьютерной системы обработки данных хроматографа. Определяют абсолютное время удерживания амфениколов и пенициллинов. С использованием средств программного обеспечения строят градуировочную зависимость для наиболее интенсивного дочернего иона. Коэффициент линейной корреляции полученной градуировочной зависимости должен быть не менее 0,98. При невыполнении этого условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Проведение градуировки обязательно при замене хроматографической колонки, а также при систематическом получении неудовлетворительных результатов контроля, выполняемого в соответствии с разделом 12.

9.4 Контроль аналитической системы

Контроль выполняют с использованием приготовленного по 8.1.2 градуировочного раствора с концентрацией аналитов 100 нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии. За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений. Полученный результат измерений не должен отличаться от действительного значения концентрации определяемых веществ в градуировочном растворе более чем на 5%, относительное стандартное отклонение времени удерживания аналитов - не более чем на 10%. В случае невыполнения указанного критерия стабильности градуировочной характеристики проводят новую градуировку.

Контроль аналитической системы осуществляют при условиях, указанных в 9.1 и 9.2, перед началом проведения измерений, а также при смене хроматографической колонки, чистке блоков аналитического прибора и т.д.

9.5 Выполнение измерений

Для контроля фона прибора перед началом серии измерений в хроматограф вводят 20 ммГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии (мкл) ацетонитрила.

В виалы вместимостью 2 смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии вносят приготовленный экстракт пробы и проводят измерения на системе ВЭЖХ-МС/МС при условиях, указанных в 9.1, 9.2.

По площадям хроматографических пиков наиболее интенсивного дочернего иона с использованием установленной градуировочной характеристики и программы обработки данных находят массовую концентрацию амфениколов и пенициллинов в анализируемой пробе.

Проводят два параллельных измерения анализируемой пробы и после каждого измерения вычисляют содержание амфениколов и пенициллинов.

Массовая концентрация амфениколов и пенициллинов в исследуемом растворе не должна превышать предельных значений градуировочных растворов. В случае превышения исследуемый раствор, содержащий амфениколы и пенициллины, с помощью механического дозатора разбавляют в рассчитанное количество раз раствором матричной калибровки, не содержащим анализируемые соединения, или раствором чистых образцов, содержащих близкое количество внутреннего стандарта, и проводят анализ разбавленных растворов.

10 Обработка результатов

10.1 В соответствии с данными, полученными при измерении градуировочных растворов, создают таблицу пиков с использованием программного обеспечения хроматографа. Расчеты содержания амфениколов и пенициллинов, а также площади пиков выполняют с помощью системы обработки данных в автоматическом режиме. Вычисление содержания амфениколов и пенициллинов проводят по наиболее интенсивному дочернему иону, для каждого соединения (см. таблицу 2).

10.2 Содержание амфениколов и пенициллинов X, мкг/кг, вычисляют по формуле

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, (1)

где C - массовая концентрация аналита в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику, нг/смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии;

V - объем растворителя после ТФЭ (см. 8.3.2), смГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии;

m - масса анализируемой пробы, г.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если удовлетворяются условия повторяемости (сходимости).

11 Метрологические характеристики

11.1 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности Р=0,95 приведены в таблице 3.

Таблица 3

Наименование

Диапазон

Показатели точности

определяемого аналита

измерений, мкг/кг

Границы относительной погрешности,

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, %

Предел повторяемости (сходимости),

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, %

Предел воспроизводимости

R, %

Хлорамфеникол

От 0,2 до 1000 включ.

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,45ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Флорфеникол

От 1,0 до 1000 включ.

35

0,30ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,40ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Флорфениколамин

35

0,30ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,40ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Тиамфеникол

35

0,30ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,40ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Бензилпенициллин

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,50ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Ампициллин

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,50ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Диклоксациллин

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,50ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии*

Оксациллин

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,50ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Феноксиметилпенициллин

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,50ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Кпоксациллин

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,50ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Амоксициллин

40

0,35ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,50ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Нафциллин

35

0,30ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

0,40ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, мкг/кг;

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии - среднеарифметическое значение результатов двух измерений, выполненных в разных лабораториях, мкг/кг.


___________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


11.2 Расхождение между результатами двух параллельных измерений, выполненных одним оператором при измерении одной и той же пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) r, значения которого приведены в таблице 3.

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, (2)

где ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии и ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии - результаты двух параллельных измерений, мкг/кг;

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии - предел повторяемости, мкг/кг.

11.3 Расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости R, значения которого приведены в таблице 3.

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, (3)

где ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии и ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии - результаты двух измерений, выполненных в разных лабораториях, мкг/кг;

R - предел воспроизводимости, мкг/кг

11.4 Границы относительной погрешности результатов измерений ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии, находящиеся с доверительной вероятностью P=0,95, при соблюдении условий настоящего стандарта не должны превышать значений, приведенных в таблице 3.

11.5 Контроль полноты извлечения внутренних стандартов амфениколов и пенициллинов выполняют в ходе каждого измерения. Степень извлечения внутренних стандартов должна быть в диапазоне от 40% до 130%. Если значение степени извлечения внутренних стандартов ниже или выше указанного диапазона, то проводят повторные исследования анализируемых проб. В случае повторного невыполнения указанного критерия степени извлечения строят новую матричную градуировку с использованием экстракта пробы по 8.3, не содержащей амфениколы и пенициллины.

12 Контроль точности результатов измерений

12.1 Контроль стабильности результатов измерений (повторяемости, промежуточной прецизионности и погрешности) проводят в соответствии с порядком, установленным в лаборатории, по ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 6.2).

12.2 Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости), осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-2. Расхождение между результатами измерений не должно превышать предела повторяемости ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии. Значения ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии приведены в таблице 3.

12.3 Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-2. Расхождение между результатами измерений, полученными двумя лабораториями, не должно превышать предела воспроизводимости R. Значения R приведены в таблице 3.

УДК 637.5.04.07:006.354

МКС 67.120.10

Ключевые слова: мясо, мясо птицы, субпродукты, мясная продукция, амфениколы, пенициллины, антибиотики, высокоэффективная жидкостная хроматография, масс-спектрометрический детектор

Электронный текст документа

подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:

официальное издание

М.: Стандартинформ, 2018

Доступ к полной версии этого документа ограничен

Текст документа вы можете получить на ваш адрес электронной почты, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

Что вы получите:

После завершения процесса оплаты вы получите доступ к полному тексту документа, возможность сохранить его в формате .pdf, а также копию документа на свой e-mail. На мобильный телефон придет подтверждение оплаты.

При возникновении проблем свяжитесь с нами по адресу spp@kodeks.ru

ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Название документа: ГОСТ 34480-2018 Мясо и мясные продукты. Определение амфениколов и пенициллинов методом тандемной жидкостной масс-спектрометрии

Номер документа: 34480-2018

Вид документа: ГОСТ

Принявший орган: Росстандарт

Статус: Документ в силу не вступил

Опубликован: Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2018 год
Дата принятия: 16 ноября 2018

Дата начала действия: 01 октября 2019
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах