• Текст документа
  • Статус
  • Скан-копия
Оглавление
Поиск в тексте
Действующий


ГОСТ ISO 11133-2016

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     
     
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ И ВОДЫ

     
Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

     
Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media



МКС 07.100.30

Дата введения 2017-07-01

Предисловие


Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе официального перевода на русский язык англоязычной версии указанного в пункте 5 стандарта, который выполнен ОАО "ВНИИС"

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 июня 2016 N 49)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 7 ноября 2016 г. N 1605-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 11133-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 11133:2014* "Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред" ("Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media", IDT).
________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru. - Примечание изготовителя базы данных.



Международный стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВЗАМЕН ГОСТ ISO/TS 11133-1-2014 и ГОСТ ISO 11133-2-2011


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

Введение


В лабораториях, проводящих микробиологические исследования, основными целями являются поддержание жизнеспособности, восстановление жизнеспособности, выращивание и/или подсчет широкого спектра микроорганизмов. Во всех традиционных методах микробиологического культивирования, а также во многих альтернативных методах используют питательные среды. Многие составы питательных сред имеются в продаже, и гораздо большее количество сред, предназначенных для конкретных целей обеспечения роста, описано в литературе.

Многие испытания и методики зависят от способности питательных сред обеспечивать получение достоверных и воспроизводимых результатов. Требования к среде могут быть специфичными как к пробе, так и к выявляемым микроорганизмам. Таким образом, соответствие питательных сред установленным эксплуатационным критериям является предварительным условием надежности любой работы в области микробиологии. Необходимо проведение достаточного количества испытаний, чтобы установить:

a) приемлемость каждой партии среды;

b) пригодность данной среды для конкретной цели;

c) способность среды обеспечивать получение достоверных результатов.

Эти три критерия являются важной частью процедур управления внутренним качеством и наряду с соответствующей документацией позволяют осуществлять эффективный мониторинг питательных сред, что способствует получению прецизионных и надежных данных. Для проведения надежного микробиологического анализа важно использовать питательные среды признанного качества. Для всех сред, описанных в стандартных методах, важно установить минимальные критерии приемлемости, требуемые для гарантирования надежности. Рекомендуется, чтобы при проведении определения эксплуатационных характеристик питательной среды проводились испытания в соответствии с настоящим стандартом.

Установление повсеместно принятых минимальных эксплуатационных критериев для питательных сред позволит получать продукцию с более стабильным качеством, что будет способствовать снижению количества испытаний, которые необходимо проводить в лаборатории пользователя.

Более того, критерии приемлемости, измеренные в рамках методов, установленных в настоящем стандарте, допускается использовать во всех микробиологических лабораториях для оценивания таких свойств питательных сред, как производительность, селективность и/или элективность.

При проведении микробиологического анализа пищевых продуктов, кормов для животных и воды требования настоящего стандарта являются первоочередными при оценке качества питательных сред.

1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает условия, касающиеся обеспечения качества питательных сред, а также устанавливает требования к приготовлению питательных сред, предназначенных для микробиологического анализа пищевых продуктов, кормов для животных, проб окружающей среды из зоны производства пищевых продуктов и кормов для животных, а также всех видов воды, предназначенной для потребления или используемой при производстве пищевых продуктов.

Настоящие требования применимы ко всем видам питательных сред, которые приготовляют для использования в лабораториях, проводящих микробиологический анализ.

Настоящий стандарт также устанавливает критерии и описывает методы определения рабочих характеристик (эксплуатационных испытаний) питательных сред. Настоящий стандарт следует применять следующим поставщикам и изготовителям:

- торговым организациям, которые выпускают и/или распространяют готовые к использованию или частично готовые восстановленные или обезвоженные среды;

- некоммерческим организациям, которые поставляют среды третьей стороне;

- микробиологическим лабораториям, которые готовят питательные среды для собственного применения.

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте приведены нормативные ссылки на нижеприведенные стандарты, которые являются обязательными при применении настоящего стандарта.* Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все изменения).
_______________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.



ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 6887-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов)

ISO 6887-3, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов)

ISO 6887-4, Microbiology of food and animal feed - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления различных продуктов)

ISO 6887-5, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб для анализа, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 5. Специальные правила подготовки молока и молочных продуктов)

ISO 6887-6, Microbiology of food and animal feed - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary production stage (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб для анализа, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 6. Специальные правила приготовления проб, отобранных на начальной стадии производства)

ISO 7704, Water quality - Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses (Качество воды. Оценка мембранных фильтров, используемых для микробиологических анализов)

ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

ISO 8199, Water quality - General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)

3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.

Примечания

1 В данном разделе приведены основные определения, касающиеся обеспечения качества питательных сред, а также терминология, касающаяся определения рабочих характеристик (эксплуатационных испытаний), питательных сред и тест-микроорганизмов.

2 В таблицах Е.2 и F.2 приведены пояснения к аббревиатурам наименований питательных сред.

3.1 Основные термины и определения

3.1.1 управление качеством (quality control): Область менеджмента качества, основным объектом которой является выполнение требований к качеству.

Примечание - См. ссылку [1].

3.1.2 партия питательной среды (batch of culture medium, lot of culture medium): Однородная и полностью прослеживаемая единица среды, связанная с определенным количеством бестарного продукта, полуфабриката или конечного продукта, которая соответствует одному типу и качеству, которая была произведена в течение определенного периода производства и которой был присвоен один и тот же номер партии.

3.1.3 хромогенный субстрат, флуорогенный субстрат (chromogenic substrate, fluorogenic substrate): Субстрат, содержащий хромофорную/флуорофорную группу, усваиваемый бактериями или грибами.

Примечание - После расщепления хромогенного/флуорогенного субстрата выделяется хромофор/флуорофор, и окрашенный/флуоресцирующий конечный продукт становится видимым либо может быть обнаружен при помощи ультрафиолетовой лампы.

3.2 Терминология, касающаяся определения рабочих характеристик (эксплуатационных испытаний)

3.2.1 эффективность питательной среды (performance of culture media): Реакция питательной среды на введение в нее (посев) тест-микроорганизмов в определенных условиях.

3.2.2 целевой микроорганизм (target microorganism): Микроорганизм или группа микроорганизмов, выявление и подсчет которых проводят.

3.2.3 нецелевой микроорганизм (non-target microorganism): Микроорганизм, который подавлен средой и/или условиями инкубирования или который не демонстрирует признаков, характерных для целевого микроорганизма.

3.2.4 производительность питательной среды (productivity of culture medium): Степень роста целевого микроорганизма на питательной среде при определенных условиях.

3.2.5 селективность питательной среды (selectivity of culture medium): Степень ингибирования нецелевого микроорганизма на или в селективной питательной среде при определенных условиях.

3.2.6 элективность (специфичность) питательной среды (electivity of culture medium, specificity of culture medium): Демонстрация при определенных условиях того, что нецелевые микроорганизмы не проявляют те же визуальные характеристики, что целевые микроорганизмы.

3.3 Терминология, касающаяся питательных сред

3.3.1 питательная среда (culture medium): Смесь веществ в жидком, полутвердом или твердом состоянии, в которую входят природные и/или синтетические ингредиенты, предназначенные для поддержания размножения (с ингибированием роста определенных микроорганизмов или без него), идентификации или сохранения жизнеспособности микроорганизмов.

Примечание - При использовании с дополнительными словами этот термин часто сокращают до слова "среда" (например, "обогатительная среда").

3.3.2 Питательные среды, классификация по составу

3.3.2.1 питательная среда с химически определенным составом (chemically defined medium): Питательная среда, состоящая только из ингредиентов с четко определенным химическим составом с известной молекулярной структурой и степенью чистоты.

3.3.2.2 питательная среда с химически неопределенным составом или с химически частично неопределенным составом (chemically undefined or partially undefined medium): Питательная среда, состоящая полностью или частично из природных веществ, переработанных или нет, химический состав которых определен не полностью.

Примечание - Гармонизированные обозначения для различных ингредиентов с химически неопределенным составом, используемых в питательных средах, приведены в приложении А.

3.3.2.3 хромогенная питательная среда, флуорогенная питательная среда (chromogenic culture medium, fluorogenic culture medium): Питательная среда, которая содержит один и несколько хромогенных/флуорогенных субстратов.

Примечание - Хромогенные питательные среды облегчают идентификацию бактерий или грибов посредством образования определенной окраски и определенных морфологических характеристик (типичный рост на питательной среде). Флуорогенная среда может быть визуализирована при помощи ультрафиолетовой лампы. Продукты биохимических реакций, которые необходимы для эффективности хромогенных/флуорогенных питательных сред, как правило, являются результатом ферментативной активности определенных микроорганизмов, которая в большой степени зависит от точного поддержания специальных условий (например, температуры, значения рН, концентрации субстрата).

3.3.3 Классификация питательных сред в соответствии с их физической консистенцией

3.3.3.1 жидкая питательная среда (liquid medium): Питательная среда, состоящая из водного раствора одного или нескольких компонентов (например, пептонная вода, питательный бульон).

Примечания

1 В некоторых случаях в жидкую питательную среду добавляют твердые частицы (например, среда с переработанным мясом).

2 Жидкие среды в пробирках, колбах или флаконах обычно называют термином "бульон".

3.3.3.2 плотная питательная среда, полужидкая питательная среда (solid medium, semi-solid medium): Жидкая питательная среда, содержащая затвердевающие материалы (например, агар-агар, желатин и т.д.) в различных концентрациях.

Примечания

1 Благодаря широкому использованию по всему миру питательных сред, затвердевающих с помощью агар-агара, в качестве синонима плотной питательной среды часто используют сокращенный термин "агар" и также в сочетании с существительными: например, "агар для подсчета микроорганизмов в чашках Петри".

2 Плотную питательную среду, разлитую по чашкам Петри, обычно называют plate ("чашка Петри"). Плотную питательную среду, разлитую по пробиркам или небольшим флаконам, которые держат в наклонном положении при застывании среды, часто называют slant или slope (скошенная плотная питательная среда, косой агар). Если среда заполняет дно емкости, образующийся слой называют столбиком.

3.3.4 Классификация питательных сред в соответствии со способом их применения

3.3.4.1 транспортная (питательная) среда (transport medium): Питательная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов без возможности существенного размножения в течение времени с момента отбора проб до момента обработки пробы в лаборатории.

Пример - Транспортная среда Стюарта или Эми (Stuart, Amies).

3.3.4.2 (питательная) среда для сохранения (preservation medium): Питательная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов в течение более продолжительного периода времени, чтобы защитить их от неблагоприятных воздействий, которые могут возникнуть при длительном хранении и способствовать восстановлению после этого периода.

Пример - Яичная питательная среда Дорсета (Dorset), скошенный питательный агар.

3.3.4.3 питательная среда суспензирования (diluent medium, suspension medium): Питательная среда, предназначенная для отделения микроорганизмов от плотного испытуемого продукта в жидкую фазу и/или для снижения их концентрации путем разбавления без размножения или ингибирования в течение времени контактирования.

Пример - Пептонный солевой раствор.

3.3.4.4 оживляющая (питательная) среда (resuscitation medium): Питательная среда, предназначенная для активации подверженных стрессу или поврежденных микроорганизмов и восстановления их способности к нормальному росту, но не обязательно способствующая их размножению.

Пример - Буферная пептонная вода.

Примечание - Данную среду можно также использовать как обогатительную среду (например, буферную пептонную воду).

3.3.4.5 обогатительная (питательная) среда (pre-enrichment medium, enrichment medium): Преимущественно жидкая питательная среда, которая благодаря составу обеспечивает особенно благоприятные условия для размножения микроорганизмов.

Пример - Триптон-соевый бульон.

3.3.4.5.1 селективная обогатительная (питательная) среда (selective enrichment medium): Обогатительная среда, которая поддерживает размножение конкретных микроорганизмов, частично или полностью подавляя рост других микроорганизмов.

Пример - Соевая пептонная среда Раппапорта-Василиадиса (Rappaport-Vasiliadis).

3.3.4.5.2 неселективная обогатительная (питательная) среда (non-selective enrichment medium): Обогатительная среда, которая поддерживает рост большинства микроорганизмов.

Пример - Питательный бульон из сердечно-мозговой настойки.

3.3.4.6 (питательная) среда для выделения (isolation medium): Плотная или полужидкая питательная среда, которая поддерживает рост микроорганизмов.

3.3.4.6.1 селективная (питательная) среда для выделения (selective isolation medium): Питательная среда для выделения, которая поддерживает рост конкретных микроорганизмов, частично или полностью подавляя рост других микроорганизмов.

Пример - Модифицированный агар с активированным углем, цефоперазоном и дезоксихолатом (агар mCCD).

3.3.4.6.2 неселективная (питательная) среда для выделения (non-selective isolation medium): Питательная среда для выделения, которая не приспособлена к избирательному подавлению роста микроорганизмов.

Пример - Питательный агар.

3.3.4.6.3 хромогенная селективная питательная среда, флуорогенная селективная питательная среда (chromogenic selective culture medium, fluorogenic selective culture medium): Хромогенная/флуорогенная питательная среда, которая также содержит селективные компоненты, которые частично или полностью ингибируют сопутствующую микрофлору, содержащуюся в испытуемом материале, тем самым способствуя точному выявлению целевых микроорганизмов.

Пример - Агар ТВХ, среда MUG/EC.

3.3.4.7 дифференциальная (питательная) среда (differential medium, characterization medium): Питательная среда, которая позволяет анализировать одну или несколько физиологических/биохимических характеристик микроорганизмов для их идентификации.

Пример - Агар ТВХ, лактозный агар с тергитолом 7, ТТС.

Примечание - Дифференциальные среды, которые можно использовать в качестве сред для выделения, называют средами для выделения/дифференциальными средами [например, агар на основе дезоксихолат-лизин-ксилозы (XLD), агар лактозный ТТС].

3.3.4.8 идентификационная (питательная) среда (identification medium): Питательная среда, предназначенная для получения специфической опознавательной реакции, которая обычно не требует последующего подтверждения.

Пример - агар с желчью, эскулином и азидом.

3.3.4.9 среда для подсчета (enumeration medium): Селективная или неселективная питательная среда, которая позволяет производить подсчет микроорганизмов.

Пример - Агар Baird-Parker, агар с дрожжевым экстрактом.

Примечание - Среда для подсчета может обладать свойствами оживляющей и/или обогатительной среды.

3.3.4.10 подтверждающая среда (confirmation medium): Питательная среда, которая способствует идентификации или определению характеристик микроорганизмов, которые проводят после предварительных стадий оживления, выделения и/или обогащения.

Пример - Агар Kligler с железом.

3.3.4.11 среда, содержащая нейтрализующие вещества (medium containing neutralizers): Транспортная среда, среда для суспензирования или питательная среда, которая содержит нейтрализующие ингредиенты, предназначенные для дезактивации моющих или дезинфицирующих средств, а также иных средств, вызывающих гибель микроорганизмов.

3.3.4.12 многоцелевая среда (medium having multiple uses): Питательная среда, относящаяся к нескольким категориям.

Пример - Кровяной агар является оживляющей средой согласно 3.3.4.4, средой для выделения согласно 3.4.4.6 и дифференциальной средой согласно 3.3.4.7, используемой для обнаружения гемолиза. Буферная пептонная вода является разбавителем согласно 3.3.4.3 и обогатительной средой согласно 3.3.4.5.

3.3.4.13 контрольная (эталонная) среда (reference medium): Питательная среда, как правило неселективная, используемая для сравнительной оценки эксплуатационных характеристик, применяемая независимо от испытуемой среды и пригодная для использования в качестве контрольной (эталлонной*).

________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


Пример - Триптоновый соевый агар (TSA).

3.3.5 Классификация питательных сред в соответствии с методом их приготовления

3.3.5.1 среда, готовая к использованию (ready-to-use medium): Жидкая, плотная или полужидкая среда, которая поставляется в чашках Петри, бутылках, пробирках и прочих контейнерах в форме, готовой к использованию, готовой к использованию после переплавки или готовой к использованию после переплавки и внесения добавок.

3.3.5.1.1 готовая питательная среда (finished culture medium): Среда, готовая к инокуляции.

3.3.5.1.2 среда, готовая к использованию после переплавки (ready-to-use medium after remelting): Среда, которую необходимо переплавить, например, для использования при глубинном посеве в чашках Петри или для разлива в чашках Петри.

3.3.5.1.3 среда, готовая к использованию после переплавки и внесения добавок (ready-to-use medium after remelting and supplementing): Среда, которую необходимо переплавить, в которую необходимо внести добавки и которую следует распределить по емкостям перед использованием (неполная среда, готовая к использованию).

Пример - Агар триптозный с сульфитом и циклосерином (TSC), агар Baird-Parker, агар с фибриногеном плазмы кролика (RPF).

3.3.5.2 питательная среда, приготовленная из имеющейся в продаже дегидратированной формы (medium prepared from commercially dehydrated formulations): Питательная среда в сухой форме, которая требует добавления воды и обработки перед использованием, в результате чего образуется один из двух видов среды:

- среда, полностью готовая к использованию;

- неполная среда, к которой необходимо добавить ингредиенты перед применением.

Пример - Порошки, компактные гранулы, лиофилизированные продукты.

3.3.5.3 питательная среда, приготовленная из отдельных ингредиентов (medium prepared from individual components): Питательная среда, приготовленная в микробиологической лаборатории полностью из конкретных ингредиентов.

3.4 Термины, касающиеся тест-микроорганизмов

3.4.1 тест-микроорганизмы (test organisms): Микроорганизмы, обычно используемые для эксплуатационных испытаний питательных сред.

Примечание - Тест-микроорганизмы далее определены в соответствии с их источником (см. 3.4.2-3.4.7).

3.4.2 контрольный (эталонный) штамм (reference strain): Микроорганизм, полученный непосредственно из официальной коллекции культур, являющейся членом Всемирной федерации коллекций культур (WFCC) или Европейской организации коллекций культур (ЕССО), для которого определены как минимум род и вид, который внесен в каталог и описан в соответствии с его характеристиками и предпочтительно при необходимости установлено его происхождение в плане пищевых продуктов, кормов для животных или окружающей среды зоны производства пищевых продуктов и кормов для животных или воды.

3.4.3 контрольные (эталонные) исходные культуры (reference stock): Набор отдельных идентичных культур, полученных в результате одного пересева контрольного штамма, либо имеющегося в лаборатории, либо полученного от поставщика.

3.4.4 исходная культура (stock culture): Первый пересев контрольной (эталонной) исходной культуры.

3.4.5 рабочая культура (working culture): Пересев контрольной исходной культуры, исходной культуры или стандартного образца, сертифицированного или нет.

3.4.6 стандартный образец (reference material, RM): Материал, содержащий определенное количество жизнеспособных микроорганизмов, достаточно однородный и стабильный в плане данных микроорганизмов, который пригоден для применения в процессах измерения.

Примечание - См. [3].

3.4.7 сертифицированный стандартный образец (certified reference material, CRM): Стандартный образец, прошедший метрологическую процедуру определения количества жизнеспособных микроорганизмов, сопровождаемый сертификатом, в котором указаны установленное значение количества жизнеспособных микроорганизмов, значение соответствующей неопределенности и приведены данные о метрологической прослеживаемости.

Примечание - См. [3].

4 Обеспечение качества питательных сред

4.1 Документация

4.1.1 Документация, требуемая от изготовителя

От изготовителя (коммерческих или некоммерческих организаций, поставляющих среды третьей стороне) требуется предоставление следующей информации о средах:

- наименование среды, отдельных ингредиентов, всех добавок и по возможности товарные коды среды;

- технические данные, например, состав, цель применения, количество (при необходимости), ссылки;

- сведения, касающиеся безопасности и/или рисков (при необходимости);

- код партии;

- значение рН готовой среды;

- информация о хранении и дата истечения срока годности;

- предписанный срок хранения;

- свидетельство о контроле качества с указанием используемого тест-микроорганизма и результатов эксплуатационных испытаний с критериями приемлемости.

4.1.2 Сдача-приемка продукции

Для каждой партии продукции (ингредиента или питательной среды) проводят проверку следующих показателей:

- идентификации продукции;

- целостности упаковки;

- даты истечения срока годности продукции;

- сопроводительной документации;

- количества полученных единиц продукции.

Регистрируют дату получения.

4.2 Хранение

4.2.1 Общие положения

Во всех случаях необходимо следовать инструкциям изготовителя.

4.2.2 Контроль качества и управление качеством обезвоженных (сухих) питательных сред и добавок

Питательные среды поставляют в форме обезвоженных порошков или гранул в герметично закрытых контейнерах, а добавки различных селективных или диагностических веществ поставляют либо в лиофилизированном, либо в жидком состоянии. Однако приобретение необходимо планировать заранее, чтобы обеспечить регулярный поток (т.е. "первым получен - первым использован").

При вскрытии нового контейнера осуществляют:

- проверку герметичности;

- запись даты первого вскрытия;

- визуальную оценку содержимого вскрытых контейнеров.

Качество среды будет зависеть от условий хранения после того, как вскроют новый контейнер. Потеря качества обезвоженных сред проявляется в изменении текучести (сыпучести) порошка, изменении гомогенности, комковании, изменениях цвета и т.д. Любую обезвоженную среду, которая абсорбировала влагу или демонстрирует очевидные изменения физического внешнего вида, не следует использовать.

При вскрытии бутылки с обезвоженной средой на бутылке ставят соответствующую дату и указывают максимальное время хранения.

4.3 Приготовление сред в лаборатории

4.3.1 Общие положения

Правильное приготовление питательных сред является одним из основных этапов для обеспечения достоверности микробиологического исследования, и ему необходимо уделить особое внимание.

Следуют нормам надлежащей лабораторной практики и инструкциям изготовителя в том, что касается операций с обезвоженными средами и другими ингредиентами, в частности с теми, которые содержат опасные вещества, такие как желчные соли, азид натрия, антибиотики и прочие селективные агенты.

При приготовлении сред из обезвоженных коммерчески доступных рецептур строго следуют инструкциям изготовителя. Документируют все сопутствующие данные, такие как код, номер партии, масса/объем, рН, дата приготовления, условия стерилизации, сведения об изготовителе.

При приготовлении сред из отдельных ингредиентов строго следуют рецептуре. Записывают все подробности (как и ранее), а также полную идентификацию всех используемых ингредиентов (код, номер партии и дату истечения срока годности при наличии таковых).

В приложении D приведен пример учетной карточки с данной информацией.

4.3.2 Качество основных ингредиентов питательных сред

Рецептуры основных ингредиентов питательных сред приведены в конкретных стандартах (см. библиографию). В рецептуре дополнительно могут быть указаны молекулярная масса и номер CASГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред химического вещества.
_________________
ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Номер CAS (регистрационный номер CAS) - это однозначный цифровой идентификатор Chemical Abstracts Service (CAS), присваиваемый химическим элементам, соединениям, полимерам, биологическим последовательностям, смесям и сплавам.


Иногда определенные ингредиенты (например, приведенные ниже), входящие в рецептуру, могут быть модифицированы для того, чтобы эксплуатационные характеристики среды были неизменными и стабильными.

Данные ингредиенты включают:

- пептоны, мясные и дрожжевые экстракты, питательные свойства которых подвержены изменениям;

- агар, желирующие свойства которого подвержены изменениям;

- буферные вещества;

- желчные соли, желчный экстракт, дезоксихолат, антибактериальные красители в зависимости от их селективных свойств;

- красители-индикаторы;

- антибиотики в зависимости от их активности и взаимодействия с другими ингредиентами.

Примечание - При выпуске сред в промышленном масштабе производители, как правило, дают указания, что рецептура среды может быть оптимизирована с тем, чтобы добиться соответствия требуемым эксплуатационным критериям. Распространенной является практика, когда вначале выбирают ингредиент и затем регулируют концентрацию от партии к партии с целью достижения одинаковых эксплуатационных характеристик и минимизации колебаний от партии к партии.

4.3.3 Вода

При приготовлении питательных сред используют только воду, которая подвергалась предварительной очистке - дистиллированную, деминерализованную, деионизированную, обработанную путем обратного осмоса либо эквивалентного качества, не содержащую веществ, которые могут ингибировать или иным способом повлиять на рост микроорганизмов в условиях испытания (например, следы хлора, аммиака или ионов металлов).

Очищенную воду хранят в герметично упакованных емкостях из инертного материала (нейтральное стекло, полиэтилен и т.п.), который не содержит ингибирующих веществ. Воду очищают перед использованием при приготовлении питательных сред.

Микробное загрязнение не должно превышать 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред колониеобразующих единиц (КОЕ) на кубический сантиметр, и оно должно быть предпочтительно менее 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ/смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред. Микробное загрязнение следует регулярно контролировать в соответствии с [4], проводя инкубирование при температуре (22±1)°С в течение (68±4) ч или используя аналогичный метод.

Примечание - Вода, которая была пропущена через ионообменник (деминерализованная), может содержать весьма значительное количество микроорганизмов. Таким образом, не рекомендуется использовать данный процесс без проверки воды на микробное загрязнение. Для поиска наилучшего способа минимизации микробного загрязнения следует проконсультироваться с производителем. Деминерализованная вода с высоким уровнем загрязнения, даже стерилизованная путем фильтрации, все еще может содержать вещества, подавляющие рост определенных микроорганизмов.


Электропроводность воды, используемой в лаборатории, должна быть не более 25 мкС/см (что эквивалентно сопротивлению ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,4 МОм·см) и предпочтительно ниже 5 мкС/см (степень чистоты 3 по [5]) при температуре 25°С, если не требуется иное. Электропроводность воды следует проверять перед использованием.

4.3.4 Взвешивание и растворение

Соблюдая необходимые меры предосторожности, аккуратно взвешивают требуемое количество обезвоженной среды или отдельных ингредиентов и постепенно смешивают с необходимым количеством воды, избегая образования комков. Соблюдают требуемый баланс; максимально допустимая ошибка составляет 1% или менее, как это установлено в ISO 7218 и ISO 8199. Если не указано иное, ингредиенты добавляют к требуемому объему воды, а не доводят объем водой до нужного уровня.

4.3.5 Растворение и диспергирование

Если необходимо, для растворения обезвоженные среды требуется быстро диспергировать путем периодического или постоянного перемешивания с последующим нагреванием. Средам, содержащим агар, перед нагреванием с перемешиванием для растворения необходимо дать несколько минут на пропитывание, и затем их разливают перед автоклавированием, если это необходимо. Следует избегать перегрева.

4.3.6 Измерение и регулирование рН

рН измеряют с помощью рН-метра и регулируют перед стерилизацией, если необходимо, так, чтобы после стерилизации и охлаждения до температуры 25°С среда имела требуемое значение рН ±0,2 ед. рН, если нет иных указаний. Регулировку рН обычно осуществляют с помощью раствора гидроксида натрия (NaOH) концентрацией приблизительно 40 г/дмГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (примерно 1 моль/дмГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) или разбавленной соляной кислоты (HCI) концентрацией приблизительно 36,5 г/дмГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (примерно 1 моль/дмГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред). При регулировании рН среды после стерилизации используют стерильные растворы. Дополнительная информация, касающаяся измерения рН, приведена в ISO 7218 и ISO 8199.

Примечание - Имеющиеся в продаже среды могут демонстрировать значительные изменения рН до и после обработки в автоклаве. Однако при условии использования дистиллированной или деионизованной воды надлежащего качества регулирование рН перед обработкой в автоклаве, как правило, не потребуется.

4.3.7 Разливка

Среду разливают по соответствующим емкостям, при этом оставляют достаточное свободное пространство над средой во избежание выкипания среды в процессе охлаждения после тепловой обработки при автоклавировании или переплавке либо перелива среды после внесения добавок.

Примечание - Данное свободное пространство может не потребоваться, если в процессе охлаждения в автоклаве поддерживается надлежащее давление.

4.3.8 Стерилизация

4.3.8.1 Общие положения

Готовые питательные среды стерилизуют в день приготовления.

Стерилизацию питательных сред и реактивов, как правило, проводят при помощи влажного пара (см. 4.3.8.2) или фильтрации (см. 4.3.8.3).

Определенным средам для стерилизации не требуется обработка в автоклаве, их можно использовать после кипячения. Например, среды для выращивания Enterobacteriaceae, содержащие бриллиантовый зеленый, особенно чувствительны к нагреванию и действию света, и после кипения их необходимо быстро охладить и защищать от интенсивного света. Некоторые реактивы также могут использоваться без стерилизации. В любом случае необходимо ссылаться на соответствующий стандарт или инструкции изготовителя.

4.3.8.2 Стерилизация влажным паром

Стерилизацию влажным паром выполняют в автоклаве или специальном аппарате для приготовления питательных сред.

Для объемов свыше 1000 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред режим стерилизации в автоклаве адаптируют соответствующим образом, чтобы обеспечить надлежащую тепловую обработку. В любом случае необходимо следовать положениям соответствующего стандарта или инструкциям изготовителя.

Примечание - Если в автоклаве обрабатывают большие объемы сред (>1000 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред), может произойти перегрев.


После нагревания необходимо дать средам остыть таким образом, чтобы предотвратить выкипание. Это особенно важно для сред в большом объеме и для сред, содержащих чувствительные к воздействию тепла ингредиенты, например, сред с бриллиантовым зеленым.

Дополнительная информация по стерилизации влажным паром приведена в ISO 7218 и в [11].

Стерилизацию паром оценивают при помощи значений FГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, принимая во внимание обработку паром в процессе нагрева и охлаждения. Параметры тепловой обработки необходимо определить для конкретной загрузки с тем, чтобы добиться надлежащей обработки емкостей независимо от местоположения в автоклаве.

4.3.8.3 Стерилизация фильтрацией

Стерилизацию фильтрацией можно выполнить под вакуумом или под давлением. Используют стерильное оборудование и мембраны с диаметром пор 0,2 мкм. Стерилизуют различные части фильтровального оборудования в соответствии с ISO 7218 или ISO 8199 либо используют заранее стерилизованное оборудование.

На некоторых фильтровальных мембранах могут задержаться протеины или другие вещества (такие как антибиотики). Для получения требуемой концентрации пользователь должен выбрать подходящий тип мембраны, например мембрану с малой способностью связывать белки, и использовать предварительно смоченный фильтр.

4.3.9 Подготовка добавок

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ - С готовыми добавками, содержащими токсичные вещества, особенно антибиотики, необходимо обращаться с осторожностью, избегая рассеивания порошка, что может вызвать аллергические или другие реакции у лабораторного персонала. Необходимо соблюдать технику безопасности и следовать инструкциям изготовителя при приготовлении растворов.

Нельзя использовать просроченные добавки, поскольку, например, для рабочих растворов антибиотиков срок годности истекает обычно в тот же самый день. При определенных обстоятельствах растворы антибиотиков можно хранить в замороженном состоянии подходящими объемами (аликвотами), но не допускается вторичное замораживание после размораживания. Пользователю рекомендуется обсудить с изготовителем потенциальную потерю активности в результате замораживания или определить ее самостоятельно.

4.4 Хранение и срок годности приготовленных сред

4.4.1 Среды, поставляемые из коммерческих источников

Следуют инструкциям изготовителя в том, что касается условий хранения, даты истечения срока годности и использования сред.

4.4.2 Среды, приготовленные в лаборатории

4.4.2.1 Общие положения

Все среды идентифицируют для обеспечения их прослеживаемости.

Срок годности сред может быть разным. Конкретные стандарты могут устанавливать определенные условия и сроки хранения, однако они должны быть проверены в лаборатории. Частоту процедур проверки устанавливают в лаборатории.

Среды хранят в условиях, в которых не происходит никаких изменений их состава, в частности в условиях защиты от света и высыхания. Если их не используют незамедлительно или их используют иным образом в соответствии с конкретным стандартом, среды хранят в холодильнике при температуре (5±3)°С.

Срок хранения сред в чашках Петри в холодильнике не должен превышать 2-4 недели, а бутылок и пробирок 3-6 месяцев, если в конкретных стандартах не указано иное или результаты проверки срока годности при хранении в лаборатории подтверждают возможность обеспечения более длительного периода сохранности. Дополнительная информация о максимальном сроке хранения для приготовленных сред приведена в ISO 8199, [17] и [21].

Рекомендуется среды, к которым добавлены лабильные добавки, использовать в день приготовления, если в конкретных стандартах не указано иное или результаты проверки срока годности в лаборатории не показывают более длительную сохранность (см. 4.4.2.2). Плотные среды, содержащие химически активные и/или лабильные вещества, следует хранить в таре, в которой осуществляют их плавление.

Перед применением или перед нагреванием питательные среды рекомендуется выдерживать до установления равновесия с окружающей температурой.

4.4.2.2 Оценка срока годности среды

Дату истечения срока годности для хранимых сред устанавливают путем проверки состояния среды после определенного периода времени хранения на основании ее физических, химических и микробиологических характеристик, как это установлено в настоящем стандарте. Частоту процедур проверки устанавливают в лаборатории.

Наблюдают любые изменения цвета среды, признаки испарения/обезвоживания, изменения величины рН или неудовлетворительной производительности, селективности или специфичности (при необходимости). Дату истечения срока годности устанавливают на основании периода хранения, по прошествии которого все вышеуказанные эксплуатационные характеристики остаются приемлемыми.

Примечание - Данная проверка также пригодна для сред, поставляемых из коммерческих источников.

4.4.2.3 Хранение сред в чашках Петри

Затвердевшие среды используют незамедлительно или хранят в перевернутом виде в условиях защиты снижения качества и обезвоживания, т.е. в темноте и/или в холодильнике при температуре (5±3)°С. На нижнюю часть или боковую поверхность чашки наносят дату приготовления среды и/или дату истечения срока годности, а также идентификационные данные. Допускается использовать альтернативную систему кодирования, соответствующую конкретным требованиям.

Срок годности среды в чашках Петри может быть увеличен при хранении в запечатанных пластиковых или целлофановых мешках. С целью минимизации конденсации влаги перед помещением в мешки чашки Петри охлаждают. Перед помещением чашек в холодильник поверхность агара не следует высушивать.

4.5 Подготовка к применению

4.5.1 Плавление агаризованных питательных сред

Расплавляют питательную среду, поместив ее на кипящую водяную баню или с помощью любого другого процесса, который дает аналогичные результаты (например, в автоклаве текучим паром, как это установлено в ISO 7218 и ISO 8199). Среды, которые ранее прошли обработку в автоклаве, рекомендуется снова нагревать в течение минимального времени, чтобы поддержать качество среды. Необходимо избегать перегрева и прекратить нагревание, если среда уже расплавилась. Выдерживают на теплоустойчивой поверхности при комнатной температуре в течение короткого периода времени, например, 2 мин, перед помещением в водяную баню для охлаждения во избежание растрескивания стекла.

Охлаждают расплавленную среду до температуры от 47 до 50°С на водяной бане с контролем температуры. Время, необходимое для достижения температуры от 47 до 50°С, зависит от типа среды, объема и количества сосудов в водяной бане. Расплавленную среду рекомендуется использовать по возможности сразу, оставляя в таком состоянии не более чем на 4 ч. При работе с особо чувствительными средами время выдержки расплавленной среды следует сократить, и это должно быть установлено в соответствующем стандарте. Неиспользованную среду не следует подвергать вторичному затвердеванию для последующего использования.

Устанавливают и документируют режим нагрева агара путем установки термометра в агаризованную среду в отдельном контейнере, аналогичном тому, который используется для испытуемой среды. Это зависит от количества и размеров контейнеров, помещенных в водяную баню.

Примечание - Среды, используемые в чашках Петри, следует нагреть до температуры от 44 до 47°С или как это установлено в соответствующем стандарте. Используют водяную баню, установленную на температуру от 44 до 47°С. Дополнительная информация, касающаяся использования и проверки водяных бань, приведена в ISO 7218.

4.5.2 Деаэрация питательных сред

Если необходимо обеспечить требуемое содержание воздуха (или кислорода), непосредственно перед применением нагревают питательную среду на кипящей водяной бане или текучим паром в течение 15 мин, приоткрыв крышку или колпачок; после нагревания плотно закрывают крышки и быстро охлаждают до необходимой температуры.

4.5.3 Введение дополнительных ингредиентов

Не устойчивые к нагреванию ингредиенты рекомендуется добавлять в среду после ее охлаждения до температуры ниже 50°С. Если среда содержит агар, стерильному ингредиенту дают достичь по меньшей мере комнатной температуры перед добавлением его в плотную среду. Холодные жидкости могут вызвать желатинизацию агара или образование прозрачных хлопьев, при этом требуемое диспергирование не достигается. Следуют инструкциям изготовителя. Все добавленные в среду ингредиенты осторожно и тщательно перемешивают, а затем распределяют по конечным контейнерам по возможности максимально быстро.

4.5.4 Приготовление плотных сред в чашках Петри

Разливают расплавленную агаровую питательную среду по чашкам Петри так, чтобы получить слой толщиной не менее 3 мм (например, для чашек диаметром 90 мм обычно требуется от 18 до 20 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред агара), или как это установлено в соответствующем стандарте. При хранении чашек, или когда инкубирование длится более 72 ч, или когда температура инкубирования выше 40°С, может потребоваться больший объем питательной среды. Дают агару охладиться и застыть, разместив чашки Петри с закрытыми крышками на холодной горизонтальной поверхности.

Готовые чашки с агаром следует хранить и использовать в соответствии с инструкциями изготовителя.

4.5.5 Приготовление среды для инокуляции

Для поверхностной инокуляции плотной питательной среды высушивают среду непосредственно перед использованием до тех пор, пока с поверхности среды не исчезнут капли. Слой среды не следует подвергать чрезмерному высушиванию.

При высушивании слоев среды важными являются следующие аспекты:

- степень влажности питательной среды является принципиальной, поскольку оптимальный рост бактерий зависит от количества влаги внутри или на среде. Значительная потеря влаги может привести, например, к увеличению концентрации ингибирующих веществ в селективной питательной среде и снижению активности воды на поверхности среды;

- при выращивании бактерий, которые не демонстрируют быстрый рост, и слои среды выглядят сухими после кондиционирования, ситуация такова, что высушивание не всегда является необходимым. В этом случае высушивание можно не проводить, поскольку это может только повысить вероятность загрязнения и приводит к ненужной потере влаги;

- температуру и время высушивания подбирают такими, чтобы вероятность загрязнения была минимальной и нагревание не повлияло бы негативно на качество питательной среды. Время высушивания зависит от степени присутствия конденсата в чашке Петри, и оно должно быть максимально коротким;

- во избежание загрязнения и когда слои среды высушивают не в ламинарном боксе, среду всегда высушивают таким образом, чтобы поверхность среды, инокуляция которой будет проводиться, была перевернута вниз.

На практике допускается высушивание слоя среды переворачиванием агаровой поверхности вниз, при этом крышка чашки Петри должна быть полуоткрыта; в боксе установлена температура от 25 до 50°С. Слои высушивают до тех пор, пока с поверхности крышек чашек Петри не исчезнут капли. При достижении этого высушивание прекращают. Слои агара допускается также высушивать, когда их поверхность направлена вверх, в безопасном ламинарном боксе (при комнатной температуре) в течение 30-60 мин, или выдерживать их в течение ночи при комнатной температуре с закрытыми крышками.

4.6 Инкубирование плотных сред в чашках Петри

В процессе инкубирования агаровые среды будут терять влагу. При определенных обстоятельствах это может повлиять на рост микроорганизмов. Факторами, влияющими на потерю влаги, являются состав среды, количество среды в чашке, тип термостата (например, термостат может быть оснащен устройством, обеспечивающим движение воздуха, или иными средствами), влажность атмосферы термостата, положение и количество чашек в термостате, температура инкубирования. Потерю влаги можно уменьшить путем размещения чашек в стопки, содержащие максимум шесть чашек, в пластиковые мешки с открытым верхом (во избежание избыточной конденсации). В качестве альтернативы влажность воздуха в термостате можно увеличить путем помещения открытой емкости с водой на дно прибора. Воду в емкости следует часто менять, а емкость подвергать дезинфекции, чтобы не допустить заражения грибками.

4.7 Утилизация сред

Использованные питательные среды необходимо утилизировать безопасным способом, в соответствии с нормативными документами, действующими на территории присоединившихся стран.

5 Тест-микроорганизмы для эксплуатационных испытаний

5.1 Общие положения

Новые или пересмотренные стандарты устанавливают эксплуатационные испытания питательных сред, в том числе технические условия на контрольные штаммы и критерии приемлемости, в соответствии с требованиями приложения J.

5.2 Выбор тест-микроорганизмов

Набор тест-микроорганизмов должен содержать микроорганизмы со стабильными характеристиками, которые являются представительными для данного вида и которые демонстрируют надежность оптимальных эксплуатационных характеристик конкретной приготовленной среды. Данные тест-микроорганизмы должны прежде всего содержать штаммы, которые легко доступны при их получении из эталонной коллекции культур. Вместе с тем допускается использовать штаммы, выделенные в лаборатории, если они демонстрируют требуемые характеристики. Предпочтительно следует использовать штаммы, выделенные из пищевых продуктов или воды, однако не для всех коллекций культур имеется соответствующая информация об источнике штамма.

Соответствующие характеристики контрольной исходной культуры исследуют и записывают в лаборатории. Если имеют место различия в характеристиках штаммов, исследуют возможные воздействия на питательную среду при получении одной и той же среды от различных производителей и приобретают дополнительную контрольную культуру из коллекции культур, в которой данная культура первоначально находилась.

ВАЖНОЕ ЗАМЕЧАНИЕ - Пользователи могут запрашивать информацию, касающуюся изменчивости штаммов и их эксплуатационных свойств, в ISO, ТК 34 "Пищевые продукты", ПК 9 "Микробиология", РГ 5 "Питательные среды" через секретариат ISO/TК 34/ПК 9.

Тест-микроорганизмы, используемые для тестирования каждой среды, могут включать:

- жизнестойкие положительные штаммы с типичными характеристиками целевого микроорганизма;

- нежизнестойкие положительные штаммы;

- отрицательные штаммы, не проявляющие требуемых характеристик, присущих целевому микроорганизму (отрицательные характеристики);

- штаммы, частично или полностью ингибированные.

В приложении Е приведены тест-микроорганизмы, которые используют в конкретных международных стандартах на пищевую микробиологию. В приложении F приведены тест-микроорганизмы, которые используют в конкретных международных стандартах на микробиологию воды.

Примечание - Некоторые национальные ограничения и директивы требуют использования сероваров, отличных от приведенных в данных таблицах. При выборе сероваров Salmonella ссылаются на соответствующие требования национальных нормативных документов.

5.3 Консервация и поддержание жизнеспособности тест-микроорганизмов

5.3.1 Общие положения

Существует несколько методов, например лиофилизация, хранение на шариках при температуре минус 70°С или с использованием жидкого азота, для успешного сохранения и поддержания всех микроорганизмов, имеющих отношение к микробиологии пищевых продуктов и воды. Один и тот же метод может не подойти ко всем штаммам. Приводятся также дополнительные методы сохранения микроорганизмов в соответствии с требованиями [14], [15], [36], [37], [38].

Количество пересевов тест-микроорганизмов следует задокументировать, чтобы предотвратить избыточное субкультивирование, которое увеличивает риск фенотипических изменений. Одной операцией считается перенос материала жизнеспособной культуры в свежеприготовленную среду, при этом должен наблюдаться рост микроорганизмов. Любой способ субкультивирования рассматривают как форму переноса. Приводится дополнительная информация в соответствии с [27], [28], [35], [38].

В приложении В приведены блок-схемы (см. рисунки В.1 и В.2) и дополнительная информация, касающаяся сохранения и приготовления тест-микроорганизмов.

5.3.2 Тест-микроорганизмы из коммерческих источников

При получении тест-микроорганизмов из эталонных коллекций или у коммерческих поставщиков, имеющих сертификацию по [2] или иную необходимую сертификацию, когда микроорганизмы находятся в своем оригинальном контейнере, следуют указаниям изготовителя относительно их культивирования и использования.

Лаборатории необходимо удостовериться, является ли доставленный штамм контрольным штаммом или контрольной исходной культурой, и установить, какое количество пересевов материала штамма проводилось до его получения. Соответствующую информацию документируют.

Лаборатория устанавливает наличие требуемых характеристик.

5.3.3 Контрольные исходные культуры, приготовленные в лаборатории

Контрольные исходные культуры, которые приготавливают из контрольных штаммов (см. приложение В, рисунок В.1) для проведения эксплуатационных испытаний, поддерживают и используют таким образом, чтобы свести к минимуму возможность перекрестного заражения, а также изменения типичных характеристик. Контрольные исходные культуры хранят несколькими порциями, как правило, либо сильно замороженными (например, при температуре ниже минус 70°С), либо в лиофилизированном виде. При более высокой температуре возможны снижение жизнеспособности микроорганизмов и генетические изменения.

Характеристики роста культур должны быть подробно задокументированы для каждой партии среды, с указанием данных о микроорганизмах, используемых в качестве тест-микроорганизмов.

Контрольные исходные культуры не допускается использовать для приготовления контрольных штаммов.

5.3.4 Исходные культуры

Исходные культуры готовят из лиофилизированных или сильно замороженных контрольных исходных культур (см. приложение В, рисунок В.2). С порциями культуры обращаются таким образом, чтобы не допустить возможного перекрестного заражения контрольной исходной культуры и/или ее порчи. Исходные культуры готовят путем ресуспензирования порции контрольной исходной культуры в или на неселективной среде. Среду инкубируют до получения культуры в стационарной фазе.

Информация о хранении и документировании приведена в 5.3.3.

В случае коммерчески доступных систем сохранения строго следуют инструкциям изготовителя.

Исходные культуры не допускается использовать для приготовления контрольных штаммов или контрольных исходных культур.

5.3.5 Рабочие культуры

Рабочие культуры готовят из исходных культур или контрольных исходных культур и используют для приготовления инокулята для испытаний.

Рабочие культуры не допускается использовать для приготовления контрольных штаммов, контрольных исходных культур, исходных культур или для приготовления последующих рабочих культур.

5.4 Микроорганизмы для эксплуатационных испытаний

5.4.1 Общие положения

Соответствующие микроорганизмы для стандартных эксплуатационных испытаний приведены в приложениях Е и F.

Объемы инокулятов и количества микроорганизмов являются весьма важными параметрами (см. 5.4.2.4 и 5.4.2.5).

Нижеприведенные руководящие указания даны в качестве примера методик, используемых для получения стандартных объемов инокулята для контроля качества питательных сред. Данные методики применимы в общем случае, однако для приготовления некоторых микроорганизмов может потребоваться создание особых условий, например, для анаэробов, галофильных, осмофильных или ксерофильных микроорганизмов, а также для тех, у которых особые требования к росту и питанию.

5.4.2 Приготовление

5.4.2.1 Приготовление исходных культур

При необходимости инокулируют плотную среду (например, триптонный соевый агар или кровяной агар) контрольной исходной культурой таким образом, чтобы образовались отдельные колонии. Инкубируют в соответствующих условиях: например, большинство аэробных бактерий инкубируют в течение 18-24 ч при температуре 37°С.

Проверяют чистоту данной плотной исходной культуры и используют ее в течение установленного времени (например, в течение 14 дней при определенной температуре во избежание значительных изменений в микроорганизмах).

5.4.2.2 Приготовление рабочих культур

Рабочие культуры готовят из контрольных исходных культур (или при необходимости из исходных культур), используя чистую культуру в стационарной фазе в неселективном бульоне. Для большинства аэробных бактерий это достигается после инкубирования в течение 18-24 ч.

Допускается приготовление рабочей культуры из коммерчески доступного эталонного образца (сертифицированного или несертифицированного), либо ее готовят в лаборатории. Концентрация приготовленной суспензии должна быть стабильной и однородной в течение периода ее использования в соответствии с [7], [10], [11], [21], [29], [30].

Допускается применение различных методик для обеспечения чистоты инокулята, его стандартизации, что позволит использовать его на последующих стадиях.

В зависимости от размера колоний отбирают одну или две колонии от среды с исходной культурой при помощи петли. Во избежание забора слишком большого количества инокулята рекомендуется использовать петлю, позволяющую отбирать 1 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред материала.

Инокулят переносят в неселективную жидкую среду (например, в триптонный соевый бульон [TSB]) и тщательно перемешивают.

Инкубируют в подходящих условиях в течение необходимого времени (например, 18-24 ч при температуре 37°С в случае большинства аэробных бактерий).

Данную рабочую культуру используют в течение установленного времени (например, в течение максимум трех дней при соответствующей температуре, чтобы не допустить значительных изменений в структуре микроорганизмов).

Информация, касающаяся приготовления и хранения спор бактерий и грибков, используемых в качестве рабочих культур, приведена в [10], [11], [24], [25], [30].

5.4.2.3 Приготовление суспензий (инокулята) для испытаний

Серию разведений готовят в разбавителе (например, в растворе Ringer с концентрацией, сниженной в четыре раза, пептонном солевом растворе), при этом выбирают самый оптимальный шаг разведения для получения требуемого количества микроорганизмов (КОЕ) в установленном объеме.

Разведение, требуемое для использования в качестве инокулята в испытаниях, определяют на основе предыдущих испытаний, все стадии которых проводились в четко определенных стандартизованных условиях.

Суспензию (инокулят) используют в течение установленного времени (например, в течение 2 ч при комнатной температуре или в течение 24 ч при хранении при температуре (5±3)°С; допускаются более длительные периоды хранения, если была произведена проверка пригодности материала в соответствии с [10], [21]).

Допускается использование замороженного инокулята, если будет показано, что данный микроорганизм способен выживать при низких температурах в течение установленного периода.

5.4.2.4 Объем инокулята

Объем инокулята, используемый для проведения количественных эксплуатационных испытаний, должен соотноситься с объемом, используемым в условиях испытаний для соответствующих сред.

В случае разбавителей и жидких сред, используемых для количественных испытаний, объем инокулята должен быть пропорционален объемам, используемым при применении соответствующих стандартов, и составляет 10% от объема исследуемой среды.

5.4.2.5 Концентрация микроорганизмов в инокуляте

5.4.2.5.1 Концентрация микроорганизмов в инокуляте при испытаниях на производительность

5.4.2.5.1.1 Количественное испытание

В случае количественного испытания, когда проводят подсчет микроорганизмов, для достижения приемлемой точности требуется концентрация микроорганизмов приблизительно 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ (см. таблицу 1). Для этого может потребоваться несколько чашек Петри.

Целесообразно применять диапазон от 80 до 120 КОЕ на чашку с минимальным количеством, равным 50 КОЕ на чашку. При использовании фильтров требуется то же самое количество КОЕ (используют один или несколько фильтров). В таблице 1 приведены значения 95-процентных доверительных интервалов, имеющих отношение к подсчету колоний.

В случае количественных испытаний разбавителей и жидких транспортных сред необходимая концентрация микроорганизмов в инокуляте должна быть от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ, чтобы концентрация, равная приблизительно 100 КОЕ, была в объеме, распределяемом по чашкам.


Таблица 1 - Пределы 95-процентных доверительных интервалов для количества колоний, подчиняющихся распределению Пуассона по [21], [26]

Количество подсчитанных колоний

Предельная точность (с точностью до процента)

Приблизительные пределы 95-процентных доверительных интервалов

500

±9

455-545

400

±10

360-440

320

±11

284-356

200

±14

172-228

100

±20

80-120

80

±22

62-98

50

±28

36-64

30

±37

19-41

20

±47

11-29

16

±50

8-24

10

±60

4-16

6

±83

1-11

5.4.2.5.1.2 Качественные испытания

Объем, используемый для испытания, должен содержать:

- от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ для качественных испытаний сред, разлитых по чашкам;

- не менее 100 КОЕ для испытаний на производительность сред обогащения или предварительного обогащения;

- от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ для качественных испытаний плотных транспортных сред.

5.4.2.5.2 Концентрация микроорганизмов в инокуляте при испытаниях на селективность

При испытании на селективность питательной среды суспензию нецелевых микроорганизмов, содержащую от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ, инокулируют на слой среды в чашке или в пробирку со средой.

5.4.2.5.3 Концентрация микроорганизмов в инокуляте при испытаниях на специфичность

При количественном испытании на специфичность питательной среды в чашке используют инокулят с концентрацией микроорганизмов от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ.

5.4.2.6 Инкубирование

Питательную среду инкубируют в условиях, установленных в соответствующем стандарте. В приложении Е приведены условия инкубирования, используемые при применении конкретного международного стандарта на микробиологию пищевых продуктов, в приложении F приведены условия инкубирования, используемые при применении конкретного международного стандарта на микробиологию воды.

Информация, касающаяся предотвращения потерь влаги агаровой средой в процессе инкубирования, приведена в 4.6.

Минимальное допускаемое время инкубирования, установленное в настоящем стандарте, используют в отношении целевого(ых) микроорганизма(ов), в то время как максимальное допускаемое время инкубирования для определения селективности устанавливают в соответствующем стандарте.

6 Проведение эксплуатационных испытаний питательных сред

6.1 Общие положения

Нижеследующие подпункты содержат описание требований ко всем видам питательных сред. Они применимы независимо от размера партии.

В практических условиях пробы могут содержать микроорганизмы, подверженные стрессу. Следует принять во внимание, что пригодность среды в плане восстановления данных клеток микроорганизмов проводят в соответствии с [21], [31]-[33].

Качество питательной среды зависит от качества основных ингредиентов среды, правильности рецептуры, качества методики приготовления, степени отсутствия микробного заражения, а также от надлежащих условий упаковки и хранения.

Управление качеством питательной среды адаптируют к целям использования среды (для количественных либо качественных испытаний). Перед использованием эксплуатационные характеристики каждой партии питательной среды тестируют в соответствии с категориями сред, описанными в 6.4. Если перед использованием среды проведение испытания не представляется возможным по причине нестабильности среды или добавок, проводят параллельное эксплуатационное испытание наряду с испытанием пробы.

6.2 Определение физических и химических показателей

Готовая питательная среда должна иметь определенные физико-химические характеристики, как это установлено в соответствующих стандартах. Кроме того, оценка качества, проводимая визуально, должна гарантировать, что каждая питательная среда соответствует установленным рекомендациям, например, в том, что касается:

- объема наполнения и/или толщины;

- внешнего вида, цвета и однородности;

- гелеобразной консистенции;

- содержания влаги.

Кроме того, необходимо определить значение рН.

Отдельные ингредиенты и любые питательные или селективные добавки также должны подвергаться оценке их качества.

6.3 Определение микробиологических показателей

6.3.1 Общие положения

Микробиологические эксплуатационные испытания проводят на пробах, которые являются представительными для партии конечного продукта по [6], [8], [9], [21].

6.3.2 Контрольная среда

В целях обеспечения надежности результатов эксплуатационных испытаний используемая контрольная среда должна иметь стабильное высокое качество.

Пользователю необходимо выполнить следующие условия:

- использовать количественный стандартный образец (см. 3.4.6), содержащий четко установленное количество микроорганизмов, при определении качества контрольной среды;

- использовать установленный процесс приготовления, в том числе переплавку (при необходимости);

- контактировать с одним и тем же изготовителем (или другим источником), который осуществляет поставку сред или их ингредиентов;

- использовать широкий спектр тест-микроорганизмов в работе (включая выявляемые микроорганизмы);

- выбирать нужную контрольную среду для определения качества;

- проводить требуемые процедуры, гарантирующие обеспечение качества среды, используемой в качестве контрольной.

При оценке пригодности контрольной среды нет необходимости учитывать все вышеуказанные аспекты. Лаборатория должна обосновать выбор конкретной методики.

Подходящие тест-микроорганизмы, методы контроля и критерии приемлемости для контрольной среды триптонного соевого агара (TSA) приведены в приложениях Е и F. При выполнении вышеуказанных условий допускается использовать другие неселективные контрольные среды.

6.3.3 Микробное заражение

В зависимости от размера партии питательной среды испытывают требуемое количество среды на наличие или отсутствие микробного заражения (на стерильность), проводя инкубирование в определенных условиях.

Испытуемой пробой должна быть как минимум одна чашка Петри или пробирка, если партия небольшая (менее 100 шт.). В случае более крупных партий изготовители должны разработать спецификации, например на основе ингредиентов среды, параметров и пределов процессов и типа упаковки, используя соответствующие допустимые пределы качества. Дополнительная информация приведена в [6], конкретных национальных стандартах и других источниках по [9], [21].

Критерии приемлемости устанавливают и подтверждают для каждой среды.

6.4 Общие требования для микробиологических эксплуатационных испытаний

6.4.1 Общие положения

Для проведения оценки партии готовой питательной среды, питательных ингредиентов или добавок надлежащим образом оценивают параметры роста при помощи количественных или качественных методов, как это установлено в настоящем стандарте.

Плотные, полужидкие и жидкие среды инокулируют подходящим объемом (см. 5.4.2.4) рабочей культуры, содержащей определенный тест-микроорганизм, используя подходящее устройство; действуют в соответствии с методикой инокуляции, установленной в соответствующих стандартах (см. приложения Е и F).

В настоящем стандарте приведены примеры количественных и качественных методов испытаний плотных и жидких питательных сред. Допускается выбор любого из приведенных методов, однако нет необходимости использовать все методы.

В случае, когда питательную среду предстоит использовать для целей подсчета, испытания проводят количественными методами.

При оценке новой среды или среды, поставляемой новым изготовителем, рекомендуется проводить количественные методы испытаний для получения дополнительной информации, чтобы обнаружить возможные изменения свойств среды.

В случае жидких сред взаимодействия, приводящие к успешному росту микроорганизмов, являются более сложными и, таким образом, выбор методов эксплуатационных испытаний будет менее очевиден, чем для плотных сред.

Информация о комбинации испытаний плотных сред с мембранными фильтрами приведена в ISO 7704.

Предполагается, что пользователь ознакомлен с основами микробиологических методов и соответствующие методы максимально не детализированы.

Соответствующие тест-микроорганизмы, методы контроля и критерии приемлемости приведены в приложениях Е и F.

Частоту проведения испытаний устанавливает конечный пользователь, принимая во внимание масштабы приготовлений в лаборатории, а также уровень обеспечения качества в лаборатории.

6.4.2 Среды, готовые к использованию

Изготовители коммерчески доступных сред, готовых к использованию, особенно тех, которые соответствуют ISO 9001, должны иметь действующую программу качества и могут выпускать сертификат качества, поставляемый вместе со средой. В этом случае пользователю может не потребоваться проведение всесторонних испытаний данных сред, однако необходимо гарантировать, что условия хранения соблюдаются такими, какие были рекомендованы изготовителем.

В отношении готовых к применению сред, в которые внесены добавки и которые проходят контроль со стороны изготовителя в соответствии с настоящим стандартом, рекомендуется провести как минимум качественные испытания.

Пользователь должен быть уверен, что изготовители коммерчески доступных сред, готовых к использованию, имеют действующую программу качества для данного вида продукции и выпускают сертификаты управления качеством, соответствующие требованиям настоящего стандарта, в которых приведены ожидаемые и полученные результаты. Лаборатория пользователя также проверяет документированные данные, гарантирующие, что критерии приемлемости изготовителя, касающиеся эксплуатационных испытаний, соответствуют внутренним требованиям лаборатории.

Чтобы удостовериться, что качество сред сохраняется в процессе их транспортирования, проводят периодические проверки.

Также проводят проверки сред после их хранения и дальнейших операций со средами в лаборатории пользователя (например, плотные среды расплавляют). Частота данных проверок должна быть обоснована.

В случае не полностью готовых сред, добавки к которым вносят в лаборатории пользователя (см. 3.3.5.1), необходимо проведение дополнительной проверки - либо проверяют результаты производительности, либо проводят качественное испытание, чтобы убедиться, что была внесена подходящая добавка.

6.4.3 Среды, приготовленные из коммерчески доступных обезвоженных рецептур

Для сред, используемых для подсчета, проводят количественное испытание. Для других типов сред часто бывает достаточным качественное испытание. Количественные испытания обеспечивают большую степень гарантии качества среды.

Для сред, которые не приводятся в приложениях Е и F, процедуры контроля качества должны быть установлены в соответствии с нижеприведенными рекомендациями.

В отношении сред, которые не содержат индикаторов или селективных агентов, допускается использовать ограниченное количество штаммов. Если среды содержат индикаторы или селективные агенты, следует использовать штаммы, демонстрирующие функции индикаторов и селективность. Для сложных сред, т.е. содержащих добавки, каждую партию среды проверяют с использованием штаммов с характеристиками, приведенными в 5.2.

6.4.4 Среды, приготовленные из базовых индивидуальных ингредиентов

В дополнение к требованиям, изложенным в 6.4.3, количественные испытания проводят с целью мониторинга трендов состояния качества базовых материалов, производительности среды и при ведении внутренних протоколов лаборатории.

6.5 Оценка эксплуатационных характеристик и интерпретация результатов

Партия питательной среды демонстрирует удовлетворительные эксплуатационные характеристики, если все используемые тест-микроорганизмы проявляют свои свойства в соответствии с установленными спецификациями. Партия считается приемлемой, если основные и микробиологические критерии качества соблюдены.

Если удовлетворительные эксплуатационные характеристики не достигнуты, см. приложение Н, где приведены возможные причины данного несоответствия.

6.6 Среды и реактивы для подтверждения

6.6.1 Среды для подтверждения

Эксплуатационные характеристики питательных сред, используемых для тестов на подтверждение, должны проверяться до их использования. Соответствующие положительные и отрицательные тест-микроорганизмы необходимо использовать для проверки таким образом, как это описано в конкретном стандарте (см. [9], [16]).

6.6.2 Реактивы для подтверждения

Перед использованием среды выполняют проверку на функциональность с использованием растворов для окраски по Граму, реактивов Ковача, VP, нитрита, оксидазы, каталазы и других реактивов, применяемых для демонстрации биохимических характеристик. Соответствующие положительные и отрицательные штаммы необходимо использовать для проверки, следует установить срок хранения. Для проведения тестов на подтверждение рекомендуется использовать реактивы аналитической степени чистоты. При использовании реактивов из коммерческих источников следуют инструкциям изготовителя в том, что касается хранения и использования реактивов (см. [18], [19]).

7 Методы эксплуатационных испытаний плотных питательных сред

7.1 Общие положения

Настоящий раздел содержит описание количественных и качественных эксплуатационных испытаний плотных питательных сред, приведенных в стандартах на пищевые продукты и воду. Данные методы являются основными и пригодными для большинства питательных сред. Методы могут быть непригодными для испытаний некоторых видов сред, используемых для роста плесеней. В приложении С приведены итоговые блок-схемы каждого метода.

7.2 Методы количественных испытаний

7.2.1 Методы количественных испытаний - определения

7.2.1.1 Производительность

Производительность должна достигать определенного минимального предела (см. соответствующий конкретный международный стандарт или приложения Е и F).

См. приложение G для использования контрольных графиков при мониторинге эксплуатационных характеристик плотных питательных сред согласно методике, приведенной ниже.

Для количественных методов коэффициент производительности PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (см. [21]) вычисляют по формуле:

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, (1)


где NГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред - общее количество колоний, полученных в или на питательной среде, подвергнутой испытанию, например, количество колоний в чашках;

NГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред - общее количество колоний, полученных в или на определенной контрольной питательной среде, в одной или нескольких чашках; оно должно быть приблизительно 100 КОЕ (см. 5.4.2.5.1).

Интерпретация результатов приведена в 7.2.2.1.2.

7.2.1.2 Селективность

Селективные питательные среды и неселективную контрольную среду инокулируют различными разведениями нецелевого(ых) микроорганизма(ов).

Коэффициент селективности SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (см. [22]) вычисляют по формуле:

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, (2)


где DГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред - максимальное разведение, демонстрирующее рост на неселективной контрольной среде;

DГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред - максимальное разведение, демонстрирующее сопоставимый рост на селективной испытуемой среде;

SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, DГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред и DГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред выражены в единицах logГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред.

Примечание - Например, если DГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред равно 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (=logГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред 4,0) и DГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред равно 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (=logГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред 3,0), то коэффициент селективности SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред=1,0.


Интерпретация результатов приведена в 7.2.2.1.2.

7.2.2 Количественный метод для плотных питательных сред

7.2.2.1 Общие положения

Данный протокол требует использования бактериальной суспензии с возможностью подсчета бактерий (которая может являться количественным стандартным образцом или испытуемой суспензией), имеющей требуемую концентрацию микроорганизмов целевого штамма. Выход микроорганизмов от новой партии питательной среды сравнивают с выходом микроорганизмов в неселективной питательной среде (контрольной среде) или в особых случаях от предварительно принятой партии среды того же состава.

7.2.2.1.1 Методика

a) используют рабочие культуры и инокуляты известной требуемой концентрации целевого штамма, а также при необходимости нецелевого штамма, как это описано в 5.3.2, или подходящий стандартный образец;

b) для одного микроорганизма используют одну или несколько чашек. Их количество зависит от размера партии, достоверности методики установления гарантии качества, надежности и количества микроорганизмов в испытуемой суспензии. Оператор в лаборатории должен привести обоснование выбранного количества чашек;

c) следует убедиться, что поверхность слоев среды должным образом высушена (см. 4.5.5);

d) проводят инокуляцию путем распределения инокулята по поверхности среды или методом мембранной фильтрации, чтобы получить количество, которое попадает в диапазон с рекомендуемыми пределами, приведенными в 5.4.2.5.1, для количественного испытания.

Для получения в чашках колоний, подлежащих подсчету, допускается также использовать модифицированный поверхностный капельный метод Miles-Misra, другие системы добавления по каплям или спиральный дозатор.

- Метод поверхностного посева в чашках используют для питательных сред, обычно используемых для подсчета таким образом.

- Контрольную среду или чашки со средой предварительно принятой партии инокулируют аналогичным образом.

- Чашки инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах.

- Проводят подсчет колоний, присутствующих в каждой чашке. Оценивают размер и внешний вид колоний, выросших в или на среде в условиях испытаний при сравнении с ростом на неселективной питательной среде (контрольной среде) или на предварительно принятой партии среды того же состава.

7.2.2.1.2 Вычисления и интерпретация результатов

В случае количественного испытания с подсчетом для достижения приемлемой точности (см. таблицу 1) необходим уровень приблизительно 100 КОЕ. Это может потребовать использования более одной чашки Петри.

Результаты считают действительными при выполнении следующих условий:

- для каждой чашки должен быть получен положительный количественный результат (целевой бактериальный рост);

- каждый отдельный заявленный результат попадает в стандартный диапазон анализа (не более 100 колоний для методов с фильтрацией и не более 150 колоний для поверхностных методов).

С целью интерпретации результатов вычисляют коэффициент производительности PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (см. 7.2.1.1) и при необходимости коэффициент селективности SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (см. 7.2.1.2).

a) PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред должен быть не менее 0,50 при сравнении селективной среды с неселективной контрольной средой, приведенной в приложениях Е и F. PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред должен быть не менее 0,70 при сравнении неселективной среды с неселективной контрольной средой или как это установлено в стандарте или приложениях Е и F. Это также имеет место в особых случаях, когда сравнение проводят с предыдущей партией.

b) Если PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред превышает 1,4, устанавливают причину этого.

c) SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред для нецелевых микроорганизмов должен быть не менее 2.

В особых случаях см. приложения Е, F и J. Данные критерии могут быть неприменимы к средам, которые не указаны в приложениях Е и F, например, к тем, которые описаны в региональных стандартах.

7.2.2.2 Использование стандартных образцов при проверке роста микроорганизмов

Применяют стандартные образцы (RM), сертифицированные стандартные образцы или стандартные образцы, произведенные в лаборатории, для получения стабильной бактериальной суспензии, содержащей известное количество колониеобразующих единиц целевых или нецелевых штаммов. Количество микроорганизмов, выросших на новой партии питательной среды, сравнивают с ожидаемым количеством КОЕ в стандартном образце, сертифицированном стандартном образце или стандартном образце, произведенным в лаборатории.

Для расчета допускаемых пределов можно использовать критическую разность (см. [34]). См. таблицу 1.

Информация о приготовлении и оценке внутренних стандартных образцов приведена в [21] и [29].

Качество стандартных образцов проверяют с использованием контрольной среды.

7.3 Испытания питательных сред, используемых для мембранной фильтрации

Проводят предварительную оценку качества используемых мембранных фильтров в соответствии с ISO 7704, чтобы установить их пригодность для использования.

При тестировании эксплуатационных характеристик питательных сред применительно к мембранной фильтрации используют рабочие культуры и инокуляты, как это описано в 5.4.2. Инокулируют среду-суспензию, в том числе жидкость-разбавитель, стерильную воду инокулятом с требуемой концентрацией микроорганизмов, приведенной в 5.4.2.5.

Жидкость фильтруют в соответствии с требованиями конкретного стандарта. Мембрану помещают на поверхность агара, который испытывают. Инокулируют достаточное количество мембран/слоев с целью получения в сумме приблизительно 100 КОЕ для испытаний на производительность. Процедуру повторяют с использованием новой мембраны и помещают вторую мембрану на поверхность контрольной среды, используя разведения, если они требуются для испытаний на селективность. Посевы инкубируют в соответствии с конкретным стандартом.

Данную процедуру повторяют каждый раз, когда меняют партию мембран или используют новую партию среды.

При необходимости с целью оценки влияния мембраны на результаты тестовый инокулят также распределяют по испытуемой среде и контрольной среде в отсутствие мембран.

7.4 Методы количественных испытаний*
________________
* Письмом Росстандарта от 27.10.2017 г. N 1715-ОГ/03 разъясняется, что "В наименовании пункта 7.4 ГОСТ ISO 11133-2016 допущена опечатка". Наименование пункта 7.4 следует читать: Методы качественного анализа. - Примечание изготовителя базы данных.

7.4.1 Количественный метод посева штрихом

7.4.1.1 Методика

Рабочие культуры и инокуляты используют согласно 5.4.2.

При определении производительности и специфичности используют слой испытуемой среды и проводят штриховой посев каждого тест-микроорганизма таким образом, чтобы получить отдельные колонии.

При определении селективности используют один слой испытуемой среды и проводят штриховой посев каждого тест-микроорганизма, прочерчивая единичную прямую линию при помощи петли, позволяющей отбирать 1 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред материала, на поверхности испытуемой среды. Для некоторых тест-микроорганизмов допускается проводить штриховой посев на том же слое среды в виде параллельных линий, избегая пересечений. Линии должны быть различимы, чтобы позволить наблюдение типичной морфологии. Допускается применять и другие стандартизованные методы штрихового посева.

Чашки инкубируют в условиях, установленных в конкретном стандарте.

7.4.1.2 Интерпретация результатов

Интенсивность роста на слое после инкубации оценивают следующим образом:

- 0 соответствует нулевому росту;

- 1 соответствует слабому росту (либо сокращению роста или размеров колоний);

- 2 соответствует выраженному росту.

Целевые микроорганизмы должны соответствовать уровню 2 и иметь характерный внешний вид, размеры и морфологию колоний. В испытании на селективность степень ингибирования зависит от типа среды. Рост нецелевых микроорганизмов должен быть частично или полностью подавлен.

7.4.2 Определение специфичности

Определение термина "специфичность" приведено в 3.2.6. Специфичность питательной среды - возможность при определенных условиях выявить существенные видимые физиологические характеристики, позволяющие отличить данные микроорганизмы по размеру и морфологии колоний, а также выявить их присутствие, отсутствие и/или степень выраженности биохимических реакций. Требования к рабочим культурам и инокулятам приведены в 5.4.2.

7.4.3 Другие количественные методы для плотных сред

Допускается использовать другие количественные методы (см. [9], [21]).

8 Методы эксплуатационных испытаний жидких питательных сред

8.1 Общие положения

Настоящий раздел описывает количественные и качественные методы эксплуатационных испытаний жидких питательных сред. Блок-схема каждого метода приведена в приложении С.

8.2 Количественный метод эксплуатационных испытаний жидких питательных сред с использованием пробирок (метод разведения до нулевого уровня)

8.2.1 Общие положения

Настоящий метод является основным методом, который допускается использовать для неселективной или селективной жидкой среды. Он также пригоден для проведения эксплуатационных испытаний жидких сред, используемых для подсчета, например, в методах наиболее вероятного числа.

8.2.2 Приготовление серии разведений

- Выбирают репрезентативное количество пробирок (см. 6.3.1).

- Готовят подходящую серию разведений из рабочей культуры целевых или нецелевых микроорганизмов в подходящем разбавителе, как это описано в ISO 6887-1 и ISO 8199, так, чтобы в наибольшем разведении (нулевой уровень) микроорганизмы отсутствовали (например, от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред). Наиболее часто используют серию десятичных разведений, тем не менее серии разведений с шагом 1/5 или 1/2 также являются пригодными.

- Серию разведений используют в течение установленного времени (см. 5.4.2.3).

- В течение времени выполнения работы переносят заданный объем (например, 0,1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред каждого разведения) на поверхность неселективной агаровой среды и распределяют по поверхности.

- Инкубируют в заданных условиях с целью обеспечения роста конкретного микроорганизма.

- Проводят подсчет количества колоний на поверхности агаровой среды для наименьшего разведения, содержащей не более 150 колоний, а также количество колоний для последующих разведений; результаты записывают.

8.2.3 Методика испытания жидкой среды

- Отбирают количество пробирок с испытуемой средой, соответствующее количеству пробирок серии разведений.

- Используя разведения, приготовленные по 8.2.2 и начиная с наибольшего разведения, инокулируют заданный объем суспензии тест-микроорганизма (например, 0,1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) в соответствующую пробирку со средой.

- Пробирки инкубируют в условиях, установленных в соответствующем стандарте (см. 5.4.2.6).

- После инкубирования при помощи петли, удерживающей объем материала 10 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, пересевают материал каждой пробирки с инкубированной средой (при этом каждый раз используют новую петлю) на неселективную агаровую среду.

- Инокулированные слои инкубируют в условиях, обеспечивающих эффективный рост микроорганизмов.

- После инкубирования исследуют каждый посев на наличие или отсутствие роста.

Примечание - Для целевых микроорганизмов, как правило, достаточно использовать разведения от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред. Для нецелевых микроорганизмов, как правило, достаточными являются разведения от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред.

8.2.4 Вычисления и интерпретация результатов

Производительность жидкой обогатительной среды является удовлетворительной, если наблюдается выраженный рост целевого микроорганизма (не менее 10 КОЕ из 10 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред материала петли) из разведений, которые позволяют получить менее 100 КОЕ при посеве 100 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред на поверхность среды.

Для селективных жидких сред определяют коэффициент селективности SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред на основе наибольшего разведения рабочей культуры, демонстрирующего выраженный рост (не менее 10 КОЕ) на слое агара, и наибольшего разведения инокулированной селективной жидкой среды, демонстрирующей отсутствие роста (или рост менее 10 КОЕ) нецелевого микроорганизма на неселективном агаровом слое. Значение SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред должно быть не менее 2.

Примечание - Дополнительные методы количественного испытания жидких сред применительно к оценке разрабатываемых сред или в сравнительных исследованиях приведены в приложении I.

8.3 Качественный метод эксплуатационных испытаний жидких селективных питательных сред с использованием пробирок

8.3.1 Общие положения

В данном методе используют целевые, нецелевые либо смесь целевых и нецелевых микроорганизмов в одной пробирке.

8.3.2 Методика

- Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит 10 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред среды или 10 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред порции из каждой партии для испытаний (см. 3.1.2 и 6.3.1). Действуют в соответствии с процедурой, описанной ниже, в соответствии с требованиями, установленными в приложениях Е и F.

- Приготовление инокулятов см. 5.4.2.3.

- Инокуляция целевым микроорганизмом: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона инокулятом, содержащим ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред100 КОЕ целевого микроорганизма, и перемешивают.

- Инокуляция нецелевым микроорганизмом: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона одним микроорганизмом при помощи инокулята с высокой концентрацией микроорганизма (>1000 КОЕ) и перемешивают.

- Инокуляция целевым и нецелевым микроорганизмами в одной пробирке, когда это требуется в соответствии с приложениями Е и F или когда проводят оценку новой среды или нового изготовителя: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона целевым микроорганизмом в количестве ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред100 клеток и большим количеством нецелевых микроорганизмов (ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред1000 клеток на каждую пробирку) и перемешивают.

- Пробирки инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах (см. 5.4.2.6).

- Отбирают петлей материал (приблизительно 10 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) из пробирки, содержащей целевой микроорганизм, и проводят посев штрихом на слое неселективной среды (например, TSA).

- При использовании смешанной культуры целевого и нецелевых микроорганизмов отбирают петлей материал (приблизительно 10 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) и проводят посев штрихом на слое среды, специфичной для целевого микроорганизма.

- Отбирают петлей материал (приблизительно 10 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) культуры нецелевого микроорганизма и проводят посев штрихом на поверхность селективной среды (например, XLD).

- Посевы инкубируют в условиях, установленных в конкретных международных стандартах.

При использовании больших объемов среды пользователь может принять решение о пропорциональном увеличении размера инокулята с тем, чтобы были получены эквивалентные результаты.

8.3.3 Вычисления и интерпретация результатов

Производительность испытуемого жидкого бульона является удовлетворительной, если наблюдается выраженный рост (не менее 10 КОЕ или линия сплошного роста) целевого микроорганизма на среде, специфичной для данного микроорганизма.

Селективность испытуемого жидкого бульона является удовлетворительной, если наблюдается отсутствие роста (или менее 10 КОЕ) нецелевых микроорганизмов на поверхности неселективной агаровой среды.

8.4 Качественный метод эксплуатационных испытаний жидких сред с использованием одной пробирки (определение мутности)

8.4.1 Общие положения

Настоящий метод пригоден для эксплуатационных испытаний неселективных жидких питательных сред и селективных сред, используемых для испытаний с подтверждением (например, бульона с бриллиантовым зеленым, желчью и лактозой [BGBLB], см. [41]). Метод является чисто качественным, и подсчитанные баллы являются только ориентировочными. По сути, мутные среды могут тестироваться данным методом, если только с них пересевают на плотную среду с тем, чтобы продемонстрировать наличие роста.

Для прозрачных сред использована следующая градация:

- 0 соответствует отсутствию мутности;

- 1 соответствует незначительной мутности;

- 2 соответствует выраженной мутности.

8.4.2 Методика

8.4.2.1 Среда предварительного обогащения

- Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит 10 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред среды или 10 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред порции каждой испытуемой партии (см. 3.1.2 и 6.3.1).

- При эксплуатационных испытаниях среды предварительного обогащения, например буферной пептонной воды (BPW), инокулируют среду подходящим объемом инокулята (см. конкретный стандарт), содержащим ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред100 КОЕ, добавляя инокулят непосредственно в испытуемую среду.

- Приготовление инокулятов см. 5.4.2.3.

- Пробирку инкубируют в условиях, установленных в конкретном стандарте (см. 5.4.2.6).

- Исследуют среду на наличие роста микроорганизмов.

8.4.2.2 Подтверждающая среда

- При эксплуатационных испытаниях жидкой подтверждающей среды испытуемую среду инокулируют суспензией рабочей культуры (содержащей >10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ/смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) при помощи петли, позволяющей отбирать 1 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред материала.

- Пробирку инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах (см. 5.4.2.6).

- Если неинокулированная среда изначально мутная, проводят пересев на плотную среду, инкубируют слои в условиях, установленных в конкретных стандартах, и исследуют среду на наличие роста.

8.4.3 Интерпретация результатов

- Качественную оценку проводят визуально, наблюдая выраженную мутность (т.е. на уровне 2), что соответствует выраженному росту (см. 8.4.1). Качественную оценку непрозрачных сред при приготовлении проводят, наблюдая рост на плотной среде.

Примечания

1 В некоторых случаях рост микроорганизмов можно наблюдать только как агрегацию клеток или образование осадка из клеток на дне пробирки или бутылки. В данном случае улучшить оценку и интерпретацию может тщательное встряхивание.

2 При помощи данного метода можно также определять другие характеристики, такие как газообразование или изменение цвета.

9 Методы эксплуатационных испытаний разбавителей и транспортных сред

9.1 Общие положения

Микробиологические эксплуатационные испытания проводят на пробе, которая является репрезентативной для партии конечного продукта (см. 6.3.1).

9.2 Метод испытаний разбавителей

9.2.1 Метод количественного испытания разбавителей

9.2.1.1 Общие положения

Данный метод определяет способность разбавителя обеспечивать выживаемость микроорганизмов при отсутствии нежелательного размножения или сокращения их количества в течение периода контакта с разбавителем до посева на агар или инокуляции в жидкую среду.

9.2.1.2 Методика

Инокулируют испытуемую порцию (например, 9 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) разбавителя 1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред суспензии тест-микроорганизма, содержащей приблизительно 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред КОЕ/смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, и перемешивают (информация, касающаяся приготовления инокулята, приведена в 5.4.2). Незамедлительно отбирают 0,1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред инокулированного разбавителя и распределяют по поверхности неселективного агара (контрольная среда), например, cpeды TSA (tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред).

Выдерживают инокулированный разбавитель при комнатной температуре в течение периода времени, установленного в соответствующей части ISO 6887 (все части) или ISO 8199, который длится с момента окончания приготовления исходной суспензии и до момента, когда инокулят начинает контактировать с питательной средой (как правило, 45 минут). Перемешивают, отбирают тот же самый объем (0,1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) и повторно проводят посев на контрольной среде (tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред).

Контрольную среду инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени (например, при температуре 30°С в течение 72 ч).

9.2.1.3 Считывание и интерпретация результатов

После инкубирования подсчитывают колонии в чашках tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред и tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред.

Количество микроорганизмов, tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, после инкубирования разбавителя должно быть в пределах ±30% от первоначального количества (tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред).

9.3 Метод испытания транспортных сред

9.3.1 Общие положения

Настоящий метод устанавливает способность транспортной среды обеспечивать выживаемость инокулированных микроорганизмов в течение периода транспортирования при отсутствии нежелательного размножения или сокращения их количества.

Если транспортные системы оснащены устройством отбора проб, его используют для инокуляции транспортной среды. В иных случаях инокуляцию проводят в условиях, которые имеют место на практике.

Инокулированную транспортную среду инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени, как это принято на практике или установлено в конкретном стандарте [12], [13].

Пример - Транспортные системы для транспортирования проб в условиях пониженной температуры тестируют при температуре (5±3)°С, когда период транспортирования стандартный (например, составляет 24 ч до проведения повторного посева).

9.3.2 Метод количественных испытаний жидких транспортных сред

9.3.2.1 Методика

Порцию пробы (например, объемом 10 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) жидкой транспортной среды инокулируют подходящим тест-микроорганизмом, для которого используется среда. Количество микроорганизмов для каждой пробирки на 10 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред должно составлять от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред клеток; инокулят готовят по 5.4.2. Незамедлительно отбирают 0,1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред инокулированной среды и распределяют ее по поверхности неселективной агаровой среды (контрольной среды), например, TSA (tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред).

При инокуляции транспортной системы устройством для отбора проб устройство помещают в подходящий объем (например, для тампонов - 0,1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) разведения рабочей культуры (содержащей от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред клеток) приблизительно на 10 с и затем инокулируют транспортную среду устройством для отбора проб. Незамедлительно отбирают 0,1 смГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред инокулированной жидкой транспортной среды и распределяют ее по поверхности неселективной агаровой среды (контрольной среды), например, TSA (tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред).

Инокулированные транспортную и контрольную среды инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени, как это принято на практике или установлено в конкретном стандарте: например, транспортную среду - при температуре 25°С в течение 5 сут, контрольную среду - при температуре 30°С в течение 3 сут. После этого повторно проводят посев на контрольной среде (tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред).

9.3.2.2 Считывание и интерпретация результатов

После инкубирования подсчитывают колонии в чашках tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред и tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред.

Количество микроорганизмов, tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред, после инкубирования транспортной среды должно быть в пределах ±30% от первоначального количества (tГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред).

9.3.3 Метод количественных испытаний плотных транспортных сред

9.3.3.1 Методика

Инокулируют порцию пробы плотной транспортной среды подходящим тест-микроорганизмом, для которого используется среда. Количество микроорганизмов в инокуляте должно составлять от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред клеток; инокулят готовят по 5.4.2.

При инокуляции транспортной системы устройством для отбора проб устройство помещают в подходящий объем (например, для тампонов - 100 ммГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред) разведения рабочей культуры (содержащей от 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред до 10ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред клеток) приблизительно на 10 с и затем инокулируют транспортную среду устройством для отбора проб.

Инокулированную транспортную среду инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени, как это принято на практике или установлено в конкретном стандарте. Пересевают на неселективную агаровую среду (контрольную среду), например TSA, и инкубируют, как это принято на практике или установлено в конкретном стандарте.

9.3.3.2 Считывание и интерпретация результатов

После инкубирования исследуют неселективную агаровую среду на наличие роста микроорганизмов.

После инкубирования должен наблюдаться заметный рост.

10 Документирование результатов испытаний

10.1 Информация, предоставляемая изготовителем

Изготовитель или поставщик питательных сред по требованию должен предоставить конкретные характеристики роста микроорганизмов, а также основную информацию, касающуюся конкретной партии питательной среды.

10.2 Прослеживаемость

Все данные по повседневным эксплуатационным испытаниям должны быть задокументированы надлежащим образом и храниться в течение необходимого периода времени в соответствии с используемой системой качества. Для документирования и оценки результатов испытаний рекомендуется использование контрольных диаграмм (см. приложение D).

Приложение А (справочное). Обозначение ингредиентов питательных сред в международных стандартах на микробиологический анализ пищевых продуктов, кормов для животных и воды

Приложение А
(справочное)

А.1 Общие положения

С целью гармонизации описания различных ингредиентов питательных сред в микробиологических методах, изложенных в международных стандартах, ISO/TК 34/ПК 9 одобрил использование нижеприведенных обозначений.

А.2 Пептоны

- Ферментативный перевар казеина.

Примечание - Данный препарат содержит панкреатический или пептический перевар казеина, триптический перевар казеина и триптон;


- ферментативный перевар сои или соевого шрота;

- ферментативный перевар животных тканей.

Примечание - Данный препарат содержит мясной пептон, пептический перевар мяса, панкреатический перевар мяса;


- ферментативный перевар сердца;

- ферментативный перевар желатина;

- ферментативный перевар животных и растительных тканей.

Примечание - Данный препарат содержит триптозу;


- кислотный гидролизат казеина.

А.3 Экстракты и настойки

- Мясной экстракт и мясная настойка;

- сердечно-мозговой экстракт и сердечно-мозговая настойка;

- дрожжевой экстракт.

А.4 Агар

Бактериологический агар.

А.5 Другие препараты

- Эмульсия яичного желтка;

- сухое обезжиренное молоко;

- цельная, дефибринированная или лизированная кровь, кровяная мука, плазма, фибриноген, гемин определенных видов животных;

- бычья желчь для бактериологических целей;

- желчные соли.

Примечание - В том числе желчные соли N 3.


Приложение В (обязательное). Приготовление контрольных (эталонных) исходных культур и рабочих культур

Приложение В
(обязательное)

В.1 Приготовление контрольной (эталонной) исходной культуры из контрольного (эталонного) штамма


Рисунок В.1 - Блок-схема приготовления контрольной (эталонной) исходной культуры из контрольного (эталонного) штамма

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред


Рисунок В.1 - Блок-схема приготовления контрольной (эталонной) исходной культуры из контрольного (эталонного) штамма

________________
ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Как правило, повторное суспензирование в питательном бульоне и время контактирования для оживления.

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Проверка морфологии колоний и окраски по Граму или идентификация с использованием биохимических тестов.

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Например, криозащитная среда, такая как TSB с добавкой от 10 до 15% (по объему) глицерина.

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Криопробирки могут содержать шарики.

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Замораживание при температуре ниже минус 70°С позволяет хранить длительное время. Срок хранения при более высоких температурах ограничен [36].

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Может также использоваться как рабочая культура.

В.2 Приготовление рабочей культуры из контрольной (эталонной) исходной культуры


Рисунок В.2 - Блок-схема приготовления рабочей культуры из контрольной (эталонной) исходной культуры

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред


Рисунок В.2 - Блок-схема приготовления рабочей культуры из контрольной (эталонной) исходной культуры

________________
ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Проверяют и архивируют документы, в том числе проверяют прослеживаемость по контрольному штамму и иные соответствующие характеристики в случае, если контрольная исходная культура получена из стороннего источника.

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Данная процедура предпочтительнее.

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Данная процедура может быть необходима для некоторых штаммов, например, для количественных испытаний. Документируют все стадии.

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Например, инокулируют пробирку со средой TSA, TSA с овечьей кровью или другой подходящей средой, инкубируют в течение 24 ч и хранят при подходящей температуре (от 18 до 25°С или от 2 до 8°С в зависимости от вида микроорганизмов) в течение четырех недель [36].

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред Например, криозащитная среда, такая как TSB с добавкой от 10 до 15% (по объему) глицерина. Замораживание при температуре ниже минус 70°С позволяет хранить длительное время. Срок хранения при более высоких температурах ограничен [36].


Приложение С (обязательное). Блок-схемы методов эксплуатационных испытаний

Приложение С
(обязательное)

С.1 Общие положения

См. раздел 7.

С.2 Количественный метод для плотных питательных сред: производительность и селективность (см. 7.2.2 и рисунок С.1)


Рисунок С.1 - Блок-схема количественных испытаний плотных питательных сред

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Обозначения:

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред - коэффициент производительности;

SГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред - коэффициент селективности.

Коэффициент производительности PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред можно использовать при сравнении:

а) неселективной среды с неселективной контрольной средой;

b) селективной среды с неселективной контрольной средой;

c) селективной среды с селективной контрольной средой.

Примечание - Информация, касающаяся инкубирования (см. третью ячейку данной блок-схемы), приведена в 5.4.2.6.


Рисунок С.1 - Блок-схема количественных испытаний плотных питательных сред

С.3 Количественный метод эксплуатационных испытаний жидких обогатительных сред с использованием пробирок. Метод разведения до нулевого уровня (см. 8.2 и рисунок С.2)


Рисунок С.2 - Блок-схема проведения эксплуатационных испытаний жидких обогатительных сред (с разведением до нулевого уровня)

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Примечание - Информация, касающаяся инкубирования (см. пятую ячейку данной блок-схемы), приведена в 5.4.2.6.



Рисунок С.2 - Блок-схема проведения эксплуатационных испытаний жидких обогатительных сред (с разведением до нулевого уровня)

С.4 Качественный метод для жидких селективных обогатительных сред с использованием одной пробирки (используют целевые, нецелевые или смесь целевых и нецелевых микроорганизмов в одной пробирке) (см. 8.3 и рисунок С.3)


Рисунок С.3 - Блок-схема метода качественных испытаний для жидких селективных обогатительных сред с использованием одной пробирки

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Примечание - Информация, касающаяся инкубирования (см. пятую ячейку каждой колонки данной блок-схемы), приведена в 5.4.2.6.


Рисунок С.3 - Блок-схема метода качественных испытаний для жидких селективных обогатительных сред с использованием одной пробирки

С.5 Качественный метод для неселективных и селективных жидких сред с использованием одной пробирки: определение мутности (см. 8.4 и рисунок С.4)


Рисунок С.4 - Блок-схема качественного испытания жидких сред с использованием одной пробирки (определение мутности)

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

При необходимости проверяют наличие признаков бактериального роста в каждой жидкой среде (например, наличие газообразования, изменение цвета).

Примечание - Информация, касающаяся инкубирования (см. третью ячейку данной блок-схемы), приведена в 5.4.2.6.


Рисунок С.4 - Блок-схема качественного испытания жидких сред с использованием одной пробирки (определение мутности)

Приложение D (справочное). Пример карточки записи результатов испытаний питательных сред

Приложение D
(справочное)

D.1 Пример карточки записи результатов испытаний питательных сред приведен в таблице D.1.


Таблица D.1

Контрольная карточка внутренних испытаний качества питательных сред

Питательная среда:

Объем:

Дата розлива:

Внутренний код партии:

Обезвоженная среда (и код):

Поставщик:

Партия

Количество:

Дата/подпись:

Добавка:

Поставщик:

Партия

Количество:

Дата/подпись:

Подробная информация о процессе

Контроль физического качества

Ожидаемый внешний вид обезвоженной питательной среды:

Цвет нормальный

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись:

да

нет

Сыпучесть высокая

Ожидаемое значение рН:

Измеренное значение рН:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись:

да

нет

Ожидаемое количество среды и/или толщина слоя:

Наблюдается:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись:

да

нет

Ожидаемый цвет:

Наблюдается:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись:

да

нет

Ожидаемая прозрачность/наличие оптических аномалий:

Наблюдается:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись:

да

нет

Ожидаемая стабильность/консистенция/
влажность геля:

Наблюдается:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись:

да

нет

Микробное заражение

Количество испытуемых чашек или пробирок:

Результат:

Качество подтверждено:

Количество зараженных чашек или пробирок:

Дата/подпись:

да

нет

Инкубирование:

Микробиологический рост -

Метод контроля: количественный

качественный

Производительность

Штаммы:

Инкубирование:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись:

да

нет

Контрольная среда:

Микробиологический рост - Селективность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Инкубирование:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись:

да

нет

Контрольная среда:

Микробиологический рост - Специфичность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Инкубирование:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись:

да

нет

Контрольная среда:

Разрешение на выпуск партии

Информация о хранении:

Разрешение на выпуск партии

Дата/подпись:

да

нет


Приложение Е (обязательное). Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред, которые широко используют в пищевой микробиологии

Приложение Е
(обязательное)


В настоящем приложении приведена информация о питательных средах, условиях культивирования, тест-микроорганизмах, номерах культурной коллекции тест-микроорганизмов и ожидаемых реакциях при проведении эксплуатационных испытаний питательных сред.

Для проведения испытаний отбирают определенные штаммы с целью гарантирования схожести результатов в разных лабораториях и облегчения демонстрации различий между средами (от партии к партии, а также в зависимости от изготовителя). Данные штаммы прошли всестороннюю оценку с целью гарантирования их пригодности и стабильности при эксплуатации.

В случае, когда приводится более чем один штамм в каждом аспекте эксплуатационных испытаний (производительность, селективность, специфичность), должны как минимум использоваться штаммы, обозначенные символом b. Коммерческие и некоммерческие поставщики предполагают использование дополнительных штаммов, например, указанных в таблице Е.1, чтобы более обоснованно гарантировать качество поставляемых питательных сред.

Таблица Е.1 была составлена с учетом контрольных штаммов, используемых в Европейской фармакопее (ЕР), и рекомендаций, касающихся питательных сред для пищевой микробиологии рабочей группы Международного комитета по пищевой микробиологии и гигиене (ICFMH). Эти критерии должны быть включены в конкретные международные стандарты при их разработке и пересмотре в будущем. Валидированной партией питательной среды является партия, которая демонстрирует удовлетворительные эксплуатационные характеристики. Номера штаммов, указанные в таблице Е.1, заимствованы из каталога универсальных идентификаторов штаммов, составленных Всемирным центром данных по микроорганизмам (WDCM) [20]. Данный каталог содержит данные о контрольных штаммах, представленных каждым номером WDCM, а также контактные данные о культурных коллекциях. Все приведенные среды описаны в европейских и международных стандартах.

Если имеют место различия в характеристиках штаммов, исследуют возможные воздействия на питательную среду (например, при получении одной и той же среды от различных производителей) и приобретают дополнительную контрольную культуру из коллекции культур, в которой данная культура первоначально находилась. Пользователи могут запрашивать соответствующую информацию, касающуюся изменчивости штаммов, у РГ 5 "Питательные среды" ISО/TК 34/ПК 9 через секретариат ISО/TК 34/ПК 9.


Таблица Е.1 - Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред, широко используемых в пищевой микробиологии

Селективные среды для подсчета микроорганизмов

СредаГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

ТипГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Микро-
организм

Между-
народный стандарт

Функция

Инкуби-
рование

Контрольный штамм

Номер WDCMГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Конт-
рольная среда

Метод контроля

Критерии

Характерная реакция

Агар для Listeria в соответ-
ствии с Ottaviani и Agosti

S

Listeria mono-
cytogenes

ISO 11290-2

Производи-
тельность

(44±4) ч/
(37±1)°С

Listeria monocytogenes 4b

00021ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Сине-зеленые колонии с непрозрачным ореолом

Listeria monocytogenes 1/2a

00109

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

Специ-
фичность

Listeria innocua

00017

-

Качест-
венный

-

Сине-зеленые колонии без непрозрачного ореола

Baird-
Parker

S

Коагулаза-
положи-
тельный стафилококк

ISO 6888-1

Производи-
тельность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С

Staphylococcus aureus

00034ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00032

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Черные или серые колонии с прозрачным ореолом (реакция просветления с яичным желтком)

Селек-
тивность

(48±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012

00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Специ-
фичность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С

Staphylococcus

Saprophyticus

Staphylococcus epidermidis

00159ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00036

-

Качест-
венный

-

Черные или серые колонии без реакции просветления с яичным желтком

BGBLB

L

Колиформы

ISO 4831

Производи-
тельность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coli

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

-

Качест-
венный

Мутность (2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред и газо-
образование в пробирке Дюрхема

Газообразо-
вание и мутность

Citrobacter freundii

00006

Селек-
тивность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009

00087

-

Качест-
венный

Частичное ингиби-
рование без газообра-
зования

-

CFC

S

Pseudomonas spp.

ISO 13720

Производи-
тельность

(44±4) ч/
(25±1)°С

Pseudomonas fluorescens

00115ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

-

Pseudomonas fragi

00116

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012

00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

DG18

S

Дрожжи и плесени

ISO 21527-2

Производи-
тельность

5 сут/
(25±1)°С

Saccharomy-
ces cerevisiae

00058b

SDA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Характерные для каждого вида колонии/ростки

Wallemia sebi

00182ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Aspergillus restrictus

00183

Eurotium rubrum

00184

Селек-
тивность

Escherichia coli

00012 или 00013ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Качест-
венный

Отсутствие роста

-

Bacillus subtilis subsp. spizizenii

00003

DRBC

S

Дрожжи и плесени

ISO 21527-1

Производи-
тельность

5 сут/
(25±1)°С

Saccharomy-
ces cerevisiae

00058ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

SDA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Характерные для каждого вида колонии/ростки

Aspergillus brasiliensis

00053ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Candida albicans

00054

Mucor racemosus

00181

DRBC

S

Дрожжи и плесени

ISO 21527-1

Селек-
тивность

5 сут/
(25±1)°С

Escherichia coli

00012 или 00013ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Качест-
венный

Отсутствие роста

-

Bacillus subtilis subsp. spizizenii

00003

ЕС

L

Escherichia coli

ISO 7251

Производи-
тельность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(44±1)°С

Escherichia coli

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

-

Качест-
венный

Мутность (2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред и газо-
образование в пробирке Дюрхема

Газообразо-
вание и мутность

Селек-
тивность

Pseudomonas aeruginosa

00025

-

Качест-
венный

Отсутствие роста

-

IS ("TS")

S

Сульфитре-
дуцирующие бактерии

ISO 15213

Производи-
тельность

(24±3) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С ана-
эробная атмосфера

Clostridium perfringens

00007ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00080

ТSА или другая неселек-
тивная среда для ана-
эробных бактерий

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Черные колонии

Специ-
фичность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012

00013

-

Качест-
венный

-

Отсутствие почернения

LST

L

Колиформы

ISO 4831

Производи-
тельность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(30±1)°С

Escherichia coli

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

-

Качест-
венный

Мутность (2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред и газо-
образование в пробирке Дюрхема

Газообразо-
вание и мутность

Селек-
тивность

Citrobacter freundii

00006

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009

00087

-

Качест-
венный

Отсутствие роста

-

LST

L

Escherichia coli

ISO 7251

Производи-
тельность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coli

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

-

Качест-
венный

Мутность (2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред и газо-
образование в пробирке Дюрхема

Газообразо-
вание и мутность

Селек-
тивность

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009

00087

-

Качест-
венный

Отсутствие роста

-

mCCDA

S

Campylo-
bacter

ISO 10272-2

Производи-
тельность

(44±4) ч/
(41,5±1)°С, микро-
аэробная атмосфера

Campylobacter jejuniГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Campylobacter coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00156

00005

00004

Кровя-
ной агар

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Сероватые, плоские и влажные, иногда с металлическим блеском

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

-

-

Staphylococcus aureus

00034

-

Качест-
венный

-

-

MRS

S

Lactic acid bacteria

ISO 15214

Производи-
тельность

(72±3) ч/
(30±1)°С

Lactobacillus sakei

00015ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Партия среды MRS уже валиди-
рована

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,7

Колонии, характерные для каждого вида

Lactococcus lactis

00016ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Pediococcus pentosaceus

00158

Селек-
тивность

(72±3) ч/
(30±1)°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Bacillus cereus

00001

MYP

S

Bacillus cereus

ISO 7932

Производи-
тельность

(24±3) ч -
(44±4) ч/
(30±1)°С

Bacillus cereus

00001

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Розовые колонии с ореолом осадка

Селек-
тивность

(44±4) ч/ (30±1)°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Специ-
фичность

Bacillus subtilis subsp. spizizenii

00003

-

Качест-
венный

-

Желтые колонии без ореола осадка

RPFA

S

Coagulase-
positive staphylococci

ISO 6888-2

Производи-
тельность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С

Staphylococcus aureus

00034ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00032

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Черные или серые колонии с ореолом мутности

Селек-
тивность

(48±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Специ-
фичность

(24±2) ч - (48±2) ч/ (37±1)°С

Staphylococcus

Saprophyticus

00159ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Качест-
венный

-

Черные или серые колонии без ореола мутности

Staphylococcus epidermidis

00036

РРА

S

Pseudomonas spp.

ISO/TS 11059

Производи-
тельность

(48±2) ч/
(25±1)°С

Pseudomonas fluorescens

00115ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

-

Pseudomonas aeruginosa

00025

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

ТВХ

S

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред-d-
Glucuroni-
dasepositive


Escherichia coli

ISO 16649-1 и ISO 16649-2

Производи-
тельность

(21±3) ч/
(44±1)°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00202ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Синие колонии

Селек-
тивность

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009

00087

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Специ-
фичность

Citrobacter freundii

00006ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Качест-
венный

-

Колонии от белого до зелено-
бежевого цвета

Pseudomonas aeruginosa

00025

TSC (SC)

S

Clostridium perfringens

ISO 7937

Производи-
тельность

(20±2) ч/
(37±1)°С ана-
эробная атмосфера

Clostridium perfringens

00007ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00080

TSA или другая неселек-
тивная среда для ана-
эробных бактерий

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Черные колонии

Селек-
тивность

(20±2) ч/
(37±1)°С ана-
эробная атмосфера

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Pseudomonas aeruginosa

00025

VRBG

S

Enterobacteri-
aceae

ISO 21528-2

Производи-
тельность

(24±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coli

Salmonella

Typhimuri-
um
ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Salmonella EnteritidisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

00031

00030

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Колонии от розового до красного цвета с или без ореола осадка

Селек-
тивность

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009

00087

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

VRBL

S

Колифор-
мные бактерии

ISO 4832

Производи-
тельность

(24±2) ч/
(30±1)°С

Escherichia coli

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,5

Пурпурно-
красные колонии с или без ореола осадка

Селек-
тивность

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009

00087

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0)

-

Специ-
фичность

Pseudomonas aeruginosa

00025

Качест-
венный

-

Колонии, имеющие окраску от бесцветной до бежевой

Неселективные среды для подсчета микроорганизмов

РСА МРСА

S

Подсчет колоний

ISO 4833

Производи-
тельность

(72±3) ч/
(30±1)°С

Bacillus subtilis subsp. Spizizenii

Escherichia coli

Staphylococcus aureus


00003ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

00034

TSA

Количест-
венный

PГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред0,7

-

Селективные среды для обогащения

Bolton

L

Campylobacter

ISO 10272-1

Производи-
тельность

(5±1) ч/
(37±1)°С
затем (44±4) ч/
(41,5±1)°С микро-
аэробная

Campylobacter jejuniГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Campylobacter coli

00156 или 00005

00004

-

Качест-
венный

>10 колоний на mCCDA

Сероватые, плоские и влаж-
ные, иногда с металлическим блеском

атмосфера

+Escherichia

coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

+Proteus
mirabilis

00012

00013

00023

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Proteus mirabilis

00012

00013

00023

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0) нa TSA

-

ЕЕ

L

Enterobacteri-
aceae

ISO 21528-1

Производи-
тельность

(24±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coli

+Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

00009 или 00087

-

Качест-
венный

>10 колоний на VRBG

Колонии от розового до красного цвета с или без ореола осадка

Salmonella Typhimuriumi

Salmonella EnteritidisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00031 или 00030

+Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

Селек-
тивность

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0) нa TSA

-

Fraser

L

Listeria mono-
cytogenes

ISO 11290-1

Производи-
тельность

(48±2) ч/
(37±1)°С

Listeria monocytogenes 4b

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00021ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред


00012 или 00013

-

Качест-
венный

более 10 колоний на агаре для Listeria в соответ-
ствии с Ottaviani и Agosti

Сине-зеленые колонии с ореолом мутности

+Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

Listeria monocytogenes 1/2a

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00109


00012 или 00013

+Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0) на TSA

-

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

-

Качест-
венный

<100 колоний на TSA

-

Giolitti Cantoni

L

Coagulase-
positive staphylococci

ISO 6888-3

Производи-
тельность

(24±2) ч -
(48±2) ч/
(37±1)°С

Staphylococcus aureus

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00034ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

>10 колоний на Baird Parker или RPFA

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 6888-1 для Baird Parker и ISO 6888-2 для RPFA)

Staphylococcus aureus

00032

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

Селек-
тивность

(48±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0) на TSA

-

Half-
Fraser

L

Listeria mono-
cytogenes

ISO 11290-1

Производи-
тельность

(24±2) ч/
(30±1)°С

Listeria monocytogenes 4b

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00021ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред


00012 или 00013

-

Качест-
венный

более 10 колоний на агаре для Listeria в соответ-
ствии с Ottaviani и Agosti

Сине-зеленые колонии с ореолом мутности

+Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

Listeria monocytogenes 1/2a

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00109


00012 или 00013

+Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0) на TSA

-

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

-

Качест-
венный

<100 колоний на TSA

-

ITC

L

Yersinia enterocolitica

ISO 10273

Производи-
тельность

(44±4) ч/
(25±1)°С

Yersinia enterocolitica

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00038ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

более 10 колоний на CIN или SSDC

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 10273)

+Pseudomonas aeruginosa

00025

Селек-
тивность

Pseudomonas

Aeruginosa

Proteus mirabilis

00025

00023

-

Качест-
венный

Полное ингиби-
рование (0) на TSA

-

МKТТn

L

Salmonella

ISO 6579

Производи-
тельность

(24±3) ч/
(37±1)°С

Salmonella EnteritidisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Salmonella Typhimuri-
um
ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00030



00031

-

Качест-
венный

>10 колоний на XLD или другой выбранной среде

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 6579)

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

+Pseudomonas aeruginosa

00025

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Частичное ингиби-
рование ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред100 коло-
ний на TSA

-

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

-

Качест-
венный

<10 колоний нa TSA

-



Продолжение таблицы Е.1

Селективные среды для подсчета микроорганизмов

СредаГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

ТипГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Микро-
организм

Между-
народный стандарт

Функция

Инкуби-
рование

Контрольный штамм

Номер WDCMГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Конт-
рольная среда

Метод контроля

Критерии

Характерная реакция

MSRVГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

SS

Salmonella

ISO 6579

Производи-
тельность

2·(24±3) ч/
(41,5±1)°С

Salmonella EnteritidisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Salmonella Typhimuri-
um
ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00030



00031

-

Качест-
венный

Серо-белая мутная зона, распрост-
раняю-
щаяся от инокули-
рованных капель (капли). По истечении 24-48 ч мутная зона (зоны) почти пол-
ностью распрост-
раняется по чашке

Возможные явления: характерные колонии после субкультиви-
рования на XLDk

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Возможный рост в зоне инокули-
рованных капель (капли) без зоны мутности

-

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

-

Качест-
венный

Отсутствие роста

-

MMG

L

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред-d-
Glucuroni-
dasepositive

E. coli

ISO 16649-3

Производи-
тельность

(24±2) ч/
(37±1)°С

Escherichia coli

00012ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00013

-

Качест-
венный

Выработка кислоты

Изменение окраски на желтую

Селек-
тивность

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

-

Качест-
венный

Отсутствие роста

-

PSB

L

Yersinia enterocolitica

ISO 10273

Производи-
тельность

3-5 сут/
(25±1)°С

Yersinia enterocolitica

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00038ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

>10 колоний на CIN или SSDC

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 10273)

+Pseudomonas aeruginosa

00025

Yersinia enterocolitica

00160

+Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012

+Pseudomonas aeruginosa

00013 или 00025

Селек-
тивность

Pseudomonas Aeruginosa

00025

-

Качест-
венный

Полное инги-
бирование (0) на TSA

-

Proteus mirabilis

00023

RVS

L

Salmonella

ISO 6579

Производи-
тельность

(24±3) ч/
(41,5±1)°С

Salmonella EnteritidisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00030

-

Качест-
венный

>10 колоний нa XLD или другой выб-
ранной среде

Колонии, харак-
терные для каждой среды (см. ISO 6579)

Salmonella Typhimuri-
um
ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00031

+Escherichia coli

00012 или 00013

+Pseudomonas aeruginosa

00025

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Частичное ингибиро-
вание ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред100 колоний на TSA

-

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

-

Качест-
венный

<10 колоний нa TSA

-

TSPB

L

Bacillus cereus

ISO 21871

Производи-
тельность

(48±4) ч/
(30±1)°С

Bacillus cereus

00001

-

Качест-
венный

более 10 колоний на РЕМВА или МYР

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 21871)

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингибиро-
вание (0) на TSA

-

Неселективные жидкие среды

BHI

L

Коагулаза-
положи-
тельные стафилококки

ISO 6888-1

ISO 6888-3

Производи-
тельность

(24±2) ч/
(37±1)°С

Staphylococcus aureus

00034

-

Качест-
венный

Мутность (1-2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Brucella

L

Campylobacter

ISO 10272 (все части)

Производи-
тельность

2-5 сут/
(41,5±1)°С
микро-
аэробная атмос-
фера

Campylobacter jejuniГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Campylobacter coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00156

00005

00004

-

Качест-
венный

Мутность (1-2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Разбави-
тели для специ-
альных целей. Напри-
мер, BPW

L

Разбавители

ISO 6887 (все части)

Разбави-
тель

45 мин - 1 ч/
20-25°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

TSA

Качест-
венный

±30% колоний/ТГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (±30% от первона-
чального количества)

-

с бромо-
крезолом пурпу-
ровым

Staphylococcus aureus

00034ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Раствор Ringer с концен-
трацией, снижен-
ной в 4 раза

L

Разбавители

ISO 6887 (все части)

Разбави-
тель

45 мин -1 ч/
20-25°С

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

TSA

Количест-
венный

±30% колоний/ТГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред (±30% от первона-
чального количества)

-

Пеп-
тонный раствор

Пеп-
тоновая соль

Фосфат-
ный буфер-
ный раствор

Staphylococcus aureus

00034ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Тиогли-
коль

L

Clostridium perfringens

ISO 7937

Производи-
тельность

(21±3) ч/
(37±1)°С

Clostridium perfringens

00007

-

Качест-
венный

Мутность (1-2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

TSYEB

L

Listeria mono-
cytogenes

ISO 11290 (все части)

Производи-
тельность

(21±3) ч/
(25±1)°С

Listeria monocytogenes 4b

00021ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Качест-
венный

Мутность (1-2)ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Listeria monocytogenes 1/2a

00109

Селективные среды для выделения

Агар для Listeria Ottaviani и AgostiГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

S

Listeria monocytogenes

ISO 11290-1

Производи-
тельность

(44±4) ч/
(37±1)°С

Listeria monocytogenes 4b

00021ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Качест-
венный

Выраженный рост (2)

Сине-зеленые колонии с ореолом мутности

Listeria monocytogenes 1/2a

00109

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное ингибиро-
вание (0)

-

Enterococcus faecalisГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00009 или 00087

Специ-
фичность

Listeria innocua

00017

-

Качест-
венный

-

Сине-зеленые колонии без ореола мутности

mCCDAГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

S

Campylobacter

ISO 10272 (все части)

Производи-
тельность

(44±4) ч/
(41,5±1)°С
микро-
аэробная атмосфера

Campylobacter jejuniГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Campylobacter coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00156

00005

00004

-

Качест-
венный

Выраженный рост (2)

Сероватые, плоские и влажные, иногда с металли-
ческим блеском

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

000012 или 00013

-

Качест-
венный

Частичное или полное ингибиро-
вание (0-1)

Характерные колонии отсутствуют

Staphylococcus aureus

00034

-

Качест-
венный

Полное ингибиро-
вание (0)

-

CT-SMAC

S

Escherichia coli
О157

ISO 16654

Производи-
тельность

(21±3) ч/
(37±1)°С

Escherichia coli О157:H7

00014 (нетокси-
когенный
штамм)

-

Качест-
венный

Выраженный рост (2)

Прозрачные колонии, имеющие бледную желтовато-
коричневую окраску диаметром около 1 мм

Селек-
тивность

Staphylococcus aureusГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00032 или 00034

-

Качест-
венный

Полное ингибиро-
вание (0)

-

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Частичное ингибиро-
вание (1)

Рост некоторых розовых колоний

CIN SSDC

S

Yersinia enterocolitica

ISO 10273

Производи-
тельность

(21±3) ч/
(30±1)°С

Yersinia enterocolitica

00038ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00160

-

Качест-
венный

Выраженный рост (2)

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 10273)

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012 или 00013

-

Качест-
венный

Полное или частичное ингиби-
рование (0-1)

Характерные колонии отсутствуют

Staphylococcus aureus

00034

-

Качест-
венный

Полное ингибиро-
вание (0)

-

СРС mCPC

S

Виды Vibrio spp., отличные от Vibrio Parahaemo-
lyticus
и Vibrio cholerae

ISO/TS 21872-2

Производи-
тельность

(24±3) ч/
(37±1)°С

Vibrio vulnificus

00187ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Качест-
венный

Выраженный рост (2)

Желтые колонии, окруженные желтой окраской среды

Vibrio cholerae за исключением О1 и О139

00203ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

-

Качест-
венный

Выраженный рост (2)

Пурпуровые колонии, окруженные пурпуровой окраской среды

Селек-
тивность

Escherichia coliГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

00012, или 00013, или 00090

-

Качест-
венный