• Текст документа
  • Статус
  • Скан-копия
Действующий


ГОСТ 33406-2015

     
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


ПРОДУКЦИЯ АЛКОГОЛЬНАЯ, БЕЗАЛКОГОЛЬНАЯ И СОКОВАЯ, ДОБАВКИ ВКУСОАРОМАТИЧЕСКИЕ


Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии


Alcoholic, nonalcoholic and juices production, flavour additives. Determination of synthetic colouring matters by high performance liquid chromatography



МКС 67.160.10
67.160.20
67.220.20
71.040.40

Дата введения 2017-07-01

Предисловие


Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ)

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 22 июля 2015 г. N 78-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Азербайджан

AZ

Азстандарт

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 1 сентября 2016 г. N 1022-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33406-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт разработан на основе методики выполнения измерений МВИ.МН 2331-2005* "Определение содержания синтетических красителей в винах и виноматериалах", аттестованной БелГИМ (свидетельство об аттестации N 451-1/2007 от 27.07.2007) и МВИ.МН 2506-2013* "Определение содержания синтетических красителей в винах, виноматериалах, алкогольных и безалкогольных напитках, соках, продуктах переработки плодов и овощей, вкусоароматических добавках", аттестованной БелГИМ (свидетельство об аттестации N 778/2013 от 07.02.2013)

________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.


6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2019 г.


Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"


1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на алкогольную, безалкогольную продукцию, соки, продукты переработки фруктов, ягод и овощей, вкусоароматические добавки и устанавливает метод определения содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с использованием для регистрации диодно-матричного детектора.

Перечень синтетических красителей, определяемых в соответствии с настоящим стандартом, приведен в таблице 1.


Таблица 1

Название синтетического красителя

Индекс

Color Index

Солнечный закат - Sunset Yellow FCF

E110

15985

Тартразин - Tartrazin

E102

19140

Амарант - Amaranth

Е123

16185

Понсо 4R - New Coccine

E124

16255

Азорубин - Chromotrope FB

E122

14720

Красный очаровательный - Allura Red AC

Е129

16035


Определению не мешает синтетический краситель Е127 Эритрозин - Erytrozine (color index 45430).

Предел обнаружения данного метода для синтетических красителей составляет 0,5 мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (кг).

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.2.003 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 245 Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия

ГОСТ 6709* Вода дистиллированная. Технические условия
______________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018.


ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р ИСО 5725-6 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 предел измерений (LOQ): Наименьшее значение массовой концентрации определяемого соединения, которое может быть измерено с установленной точностью в соответствии с настоящим стандартом.

3.2 диапазон измерений: Область значений массовой концентрации соединения в пробе, определяемая по настоящему стандарту.

4 Сущность метода


Смесь синтетических красителей Е110 Солнечный закат, Е102 Тартразин, Е123 Амарант, Е122 Азорубин, Е124 Понсо 4R, Е129 Красный очаровательный разделяют на хроматографической колонке с использованием градиентной системы элюирования с применением метода ион-парной обращенно-фазовой хроматографии. Идентификацию и количественное определение осуществляют с помощью диодно-матричного детектора по величине сигнала абсорбции, интегрированного по времени. Дополнительную идентификацию красителей приводят* спектральным методом.
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

5 Требования безопасности и требования к квалификации операторов

5.1 Требования безопасности

При выполнении работ персонал должен знать и строго соблюдать на рабочем месте требования:

- электробезопасности - по ГОСТ 12.2.003;

- пожарной безопасности - по ГОСТ 12.1.004;

- техники безопасности при работе в химической лаборатории;

- техники безопасности, изложенные в эксплуатационных документах на средства измерений и оборудование, применяемые при проведении измерений.

5.2 Требования к квалификации операторов

К проведению измерений и обработке результатов хроматографического анализа могут быть допущены лица, имеющие специальное образование, опыт работы в области жидкостной хроматографии, изучившие руководство по эксплуатации жидкостного хроматографа, инструкцию по использованию системы обработки хроматографических данных и методов спектрального анализа.

6 Условия проведения измерений


При проведении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающего воздуха

(20±5)°C;

- температура приготовления растворов

(20±2)°C;

- относительная влажность воздуха

(65±15)%;

- частота переменного тока

(50±5) Гц;

- напряжение в сети

(220±10) Вт*.

________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


Помещения для проведения измерений должны быть оснащены приточно-вытяжной вентиляцией и подводкой воды.

7 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы


Высокоэффективный жидкостной хроматограф, включающий:

- насос бинарный с вакуумным дегазатором;

- термостат колонок;

- детектор диодно-матричный (диапазон длин волн 190-950 нм);

- колонку аналитическую обращенно-фазную хроматографическую С18, длиной 125 мм, внутренний диаметр 4 мм, диаметр зерна 5 мкм*;
_______________
* Примером подходящего продукта является хроматографическая колонка Hypersil BDS-C18, 4,0ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии125 мм, 5ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографиим). Данная информация приведена для удобства и не означает признания названного продукта пользователями настоящего стандарта.


- автосемплер;

- систему управления и обработки данных.

Весы лабораторные электронные, диапазон взвешивания 0,0100-220,0000 г, погрешность взвешивания 0,0003 г.

Иономер универсальный в комплекте с электродами, диапазон измерений от 1 до 19 ед. рН, погрешность 0,05 ед. pH.

Пипетки градуированные вместимостью 1,0; 5,0; 10,0; 25,0 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии по ГОСТ 29227.

Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Устройство для фильтрации элюирующих растворов.

Баня ультразвуковая.

Фильтры мембранные из регенерированной целлюлозы d=47 мм, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии=0,45 мкм.

Фильтры мембранные из регенерированной целлюлозы d=25 мм, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии=0,25 мкм.

Шприц медицинский вместимостью 5 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Виалы для автосамплера вместимостью 2 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

E110 Солнечный закат, содержание основного вещества не менее 93,4%.

E102 Тартразин, содержание основного вещества не менее 88%.

Е123 Амарант, содержание основного вещества не менее 93%.

E124 Понсо 4R, содержание основного вещества не менее 93%.

E122 Азорубин, содержание основного вещества не менее 90%.

E129 Красный очаровательный, содержание основного вещества не менее 80%.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Натрий фосфорнокислый однозамещенный двухводный по ГОСТ 245.

Гидроксид тетрабутиламмония (ТБАГ) 12,5%-ный раствор.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательного оборудования с техническими характеристиками, а также материалов и реактивов по качеству не ниже указанных.

8 Подготовка к проведению измерений

8.1 Отбор проб

Отбор проб продукции для определения синтетических красителей проводят в соответствии с действующими нормативными документами на отбор проб соответствующего вида продукции для определения показателей безопасности.

Отбор проб должен обеспечивать однородность и репрезентативность представленной пробы.

Проба, доставленная в лабораторию на измерение, не должна быть повреждена или изменена во время транспортирования и хранения.

8.2 Приготовление элюирующих растворов

8.2.1 Элюирующий раствор А

В качестве элюирующего раствора А используют ацетонитрил для ВЭЖХ.

8.2.2 Элюирующий раствор В (0,01 М раствор натрия фосфорнокислого однозамещенного (ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии)+0,001 М раствор тетрабутиламмония гидроксида (ТБАГ), 4,3-4,4 ед. рН)

Навеску массой 1,56 г натрия фосфорнокислого однозамещенного двухводного и 2,6 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии 12,5%-ного раствора тетрабутиламмония гидроксида растворяют в мерной колбе вместимостью 1 дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и доводят до метки дистиллированной водой, рН приготовленного элюирующего раствора В должен находиться в диапазоне 4,3-4 ед. рН.

Перед применением все растворы фильтруют через фильтр из регенерированной целлюлозы с диаметром 47 мм, диаметром пор 0,45 мкм.

8.3 Приготовление градуировочных растворов

8.3.1 Приготовление многокомпонентного основного раствора "А" с массовой концентрацией синтетических красителей приблизительно 500 мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии для каждого красителя

Навеску каждого красителя массой приблизительно 0,1250 г, взятую с точностью до 0,0001 г, взвешивают непосредственно в мерную колбу вместимостью 250 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и доводят до метки дистиллированной водой при t=(20±2)°C. Точную массовую концентрацию i-го красителя в растворе А ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, вычисляют с учетом содержания основного вещества по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (1)


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - масса навески i-го красителя, мг;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - содержание основного вещества i-го красителя;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - вместимость мерной колбы, смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Основной градуировочный раствор остается стабильным при хранении в холодильнике в течение 6 мес.

8.3.2 Приготовление многокомпонентного промежуточного раствора "В" синтетических красителей с массовой концентрацией синтетических красителей приблизительно 50 мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Раствор "А", приготовленный по 8.3.1, объемом 25 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии переносят в мерную колбу вместимостью 250 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и доводят до метки дистиллированной водой при t=(20±2)°C.

Массовую концентрацию промежуточного градуировочного раствора ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, вычисляют по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (2)


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - массовая концентрация ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии-го красителя в растворе А, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

Для проведения градуировки используют свежеприготовленный раствор.

8.3.3 Приготовление многокомпонентных градуировочных растворов синтетических красителей

Готовят четыре градуировочных раствора путем разбавления раствора "В", согласно таблице 2.


Таблица 2

Номер раствора

Объем раствора "В" по 8.3.2, смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Массовая концентрация* градуировочного раствора, мг/смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Объем градуировочных растворов, смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

1

1

1

50

2

5

5

50

3

10

10

50

4

25

25

50

* Точное значение массовой концентрации градуировочных растворов вычисляют с учетом точных значений массовых концентраций раствора "В".


Градуировочным раствором N 5 является промежуточный градуировочный раствор "В", приготовленный по 8.3.2. Для проведения градуировки используют свежеприготовленные растворы.

8.4 Подготовка хроматографа к работе

Жидкостной хроматограф настраивают в соответствии с инструкциями фирмы - производителя оборудования.

8.4.1 Условия хроматографического анализа

Используют колонку и хроматографические условия разделения, обеспечивающие удовлетворительное разделение многокомпонентной смеси красителей, - см. рисунок А.1 (приложение А).

Элюенты:

- А=ацетонитрил по 8.2.1;

- В=0,01М ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии+0,001М Тетрабутиламмония гидроксида, 4,4 ед. рН, приготовленный по 8.2.2.

Градиент:

- 15% В;

- 10 мин 40% В;

- 14 мин 90% В;

- 19 мин 90% В;

- 20 мин 15% В.

Скорость потока: 1,0 смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/мин.

Температура: 40°C.

"Post time": 4 мин.

Детектирование: UV-DAD.

450 нм/20 нм

520 нм/20 нм

Для детектирования красителей применяют диодно-матричный детектор, устанавливают длины волн поглощения, обеспечивающие максимальную чувствительность и селективность. Значения длин волн, используемые в данном методе, представлены в таблице 3.


Таблица 3

Название

Длина волны детектирования/ширина полосы, нм

Солнечный закат E 110

520/20

Тартразин E 102

450/20

Амарант Е 123

520/20

Понсо 4R E 124

520/20

Азорубин E 122

520/20

Эритрозин E 127

520/20

Красный очаровательный E 129

520/20

8.4.2 Выполнение начальной градуировки

Для определения рабочего диапазона массовых концентраций и линейности функции градуировки выполняют начальную градуировку хроматографа. Ее выполняют как минимум по пяти рабочим градуировочным растворам красителей, приготовленным по 8.3.2. Каждый раствор хроматографируют не менее двух раз. Градуировочная зависимость должна иметь вид y=bx. Параметры градуировочной зависимости вычисляют путем анализа линейной регрессии скорректированных площадей пиков. Правильность построения градуировочного графика контролируется значением достоверности аппроксимации: ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии0,999.

8.5 Подготовка проб

Пробы алкогольной и безалкогольной продукции, соков разбавляют в два-пять раз дистиллированной водой и фильтруют через мембранный фильтр d=25 мм, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии=0,25 мкм. Навеску продуктов переработки фруктов, ягод и овощей, вкусоароматических добавок разбавляют в 5-10 раз дистиллированной водой. Полученный раствор помещают в ультазвуковую* баню на 10-15 мин. При необходимости проводят предварительную очистку проб центрифугированием. Подготовленную пробу фильтруют через систему шприц-фильтр (используя мембранный фильтр d=25 мм, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии=0,25 мкм) в виалу для автосамплера. Подготовленная проба должна быть прозрачной.
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


При подготовке порошкообразных и концентрированных жидких вкусоароматических добавок разбавление пробы подбирают таким образом, чтобы массовая концентрация определяемых компонентов попадала в середину градуировочного диапазона.

9 Порядок проведения измерений

9.1 Оперативный контроль стабильности градуировки

Текущий контроль стабильности градуировочного графика проводят ежедневно перед началом работы. Для этого анализируют один рабочий градуировочный раствор, массовая концентрация которого должна лежать в пределах 60%-80% рабочего диапазона градуировки. Градуировку считают достоверной, если измеренная массовая концентрация каждого красителя отличается не более чем на 3% от фактической массовой концентрации градуировочного раствора. Если это требование не выполняется, то проводят повторную градуировку прибора.

После завершения измерения серии проб проводят второе измерение выбранного градуировочного раствора, сравнивая результат измерений с нормативом стабильности градуировки так, как это описано выше. В случае невыполнения данного условия проводят повторное измерение выбранного градуировочного раствора. Если при этом полученные значения снова не удовлетворяют вышеприведенным требованиям, выявляют и устраняют причины несоответствия, а затем вновь проводят измерения серии проб.

При проведении измерений с ручным вводом проб серия состоит из 6-10 проб. При проведении измерений с вводом пробы автосамплером серия состоит из 10-15 проб.

9.2 Контроль чистоты системы

Для контроля степени чистоты реактивов и правильности работы оборудования, а также для предотвращения появления ложно положительных пиков проводят измерение дистиллированной воды "холостая проба", прошедшей процедуру пробоподготовки.

Если в "холостой пробе" обнаруживают любое из анализируемых веществ, выявляют причину и устраняют любые источники загрязнения.

Контроль чистоты системы проверяют в начале работы и после измерения пробы, в которой обнаружено наличие красителя.

9.3 Выполнение измерений пробы

Проводят измерение двух параллельных проб продукции, подготовленных по 8.5.

Пробу хроматографируют не менее двух раз. Пики красителей в пробе должны быть правильно проинтегрированы, при необходимости результаты интегрирования площади пика корректируют. Если вычисленная массовая концентрация красителя в анализируемой пробе превышает градуировочный диапазон, пробу разбавляют и повторяют измерение.

9.4 Идентификация индивидуальных соединений

При отсутствии пика определяемого красителя на характеристическом времени удерживания и нормальной хроматограмме делают вывод, что данный краситель в пробе отсутствует.

Если время удерживания красителя на хроматограмме анализируемой пробы совпадает со временем удерживания красителя градуировочного раствора, то предполагают, что данный краситель в пробе присутствует.

Для дополнительной идентификации красителя результат подтверждают сравнением спектров поглощения вещества в анализируемой пробе со спектрами красителя градуировочного раствора.

Одновременно оценивают возможность присутствия загрязняющих примесей в идентифицируемом красителе по чистоте пика с помощью статистического анализа, выполняемого программным обеспечением путем автоматического сопоставления спектрограмм.

Значения показателя качества совпадения спектров "Match factor" в диапазоне 900-990 свидетельствуют о некотором спектральном сродстве идентифицируемых веществ. Все значения ниже 900 означают, что рассматриваются две спектрограммы различных веществ.

Заключение о присутствии искомого соединения в пробе можно сделать только в случае, если величина показателя качества совпадения спектров ("Match factor") по результатам анализа спектрограмм находится в интервале 990-1000.

10 Обработка и оформление результатов измерений

10.1 Вычисление массовой концентрации определяемого соединения в пробе

Массовую концентрацию синтетического красителя ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (кг), вычисляют по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (3)


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - массовая концентрация красителя, полученная по градуировочному графику, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (кг);

К - коэффициент разбавления пробы, вычисляемый по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (4)


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - объем исходного раствора пробы*, смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;
_______________
* Для порошкообразных и концентрированных жидких проб используют массу пробы.


ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - объем разбавленного раствора пробы*, смГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
_______________
* Для порошкообразных и концентрированных жидких проб используют массу пробы.

10.2 Односторонняя оценка массовой концентрации определяемого соединения в пробе

Если величина ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии оказывается меньше предела измерения метода ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, то вычисления по 10.1 не проводят, а дают одностороннюю оценку массовой концентрации красителя в пробе ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (кг), в виде

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии,


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - предел измерения метода.

Предел измерения метода составляет 0,5 мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

10.3 Окончательный расчет результата измерений

За результат измерений принимают среднеарифметическое значение двух параллельных измерений при выполнении условий повторяемости. Окончательный результат округляют до первого десятичного знака.

Окончательный результат определения массовой концентрации синтетических красителей при доверительной вероятности Р=0,95 представляют в следующем виде

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (5)


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - результат измерений, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, полученный в соответствии с настоящим методом и вычисленный согласно разделу 10;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - абсолютное значение показателя точности метода, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Абсолютное значение показателя точности ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, вычисляют, используя относительное значение показателя точности метода ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, %, указанное в таблице 4, по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (6)


где 0,01 - коэффициент для пересчета процентов;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - относительное значение показателя точности метода;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - среднеарифметическое значение двух результатов единичных измерений, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

11 Показатели точности метода


Метод обеспечивает получение достоверных результатов измерений массовой концентрации каждого красителя в алкогольной, безалкогольной продукции, продуктах переработки фруктов, ягод и овощей, вкусоароматических добавках при работе в диапазоне градуировки от 1 до 50 мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Метрологические характеристики метода представлены в таблице 4.


Таблица 4 - Основные метрологические характеристики метода определения массовой концентрации синтетических красителей

Наименование синтетического красителя

Наименование показателя (Р=0,95, n=2)


Предел повторяемости (сходимости) r, %

Предел воспроизводимости R, %

Показатель точности (границы относительной погрешности метода) ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, %

Солнечный закат Е110

10

19

14

Тартразин Е102

10

19

14

Амарант Е123

10

18

13

Понсо 4R Е124

11

20

14

Красный очаровательный Е129

11

21

15

Азорубин Е122

10

21

15

12 Контроль точности результатов измерений

12.1 Оперативный контроль повторяемости

Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6.

Вычисляют абсолютное расхождение между результатами единичных измерений ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, значение которого сравнивают с пределом повторяемости, приведенным в таблице 4.

Повторяемость результатов признают удовлетворительной при выполнении условия

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (7)


При превышении предела повторяемости измерение повторяют. При повторном превышении указанного предела выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, их устраняют и измерение повторяют.

12.2 Оперативный контроль воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6.

Каждая из двух лабораторий проводит измерения в соответствии с разделом 9 и получает результат измерений, обеспечивая контроль повторяемости по 11.1.

Рассчитывают среднее арифметическое значение ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, результатов измерений двух лабораторий ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии соответственно

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (8)*

________________
* Формула соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

Вычисляют абсолютное расхождение между результатами измерений ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, полученными в двух лабораториях, значение которого сравнивают с пределом воспроизводимости, приведенным в таблице 4.

Результат признают удовлетворительным при выполнении условия

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (9)


При превышении указанного предела воспроизводимости контрольное измерение повторяют. При повторном превышении указанного предела выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, их устраняют и измерение повторяют.

12.3 Контроль правильности

12.3.1 Контроль правильности с применением лабораторной контрольной пробы

Контроль правильности измерения красителей проводят путем анализа проб с заранее известным значением массовой концентрации (лабораторной контрольной пробы) и пробы с добавкой.

В качестве лабораторной контрольной пробы может использоваться:

- аттестованная смесь;

- специально приготовленная проба, значение массовой доли красителя в которой получено при проведении межлабораторных сличительных испытаний.

Массовая доля красителя в контрольной пробе должна находиться в интервале 10-40 мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Лабораторная контрольная проба может храниться в условиях, минимизирующих изменение массовой доли красителя с течением времени, в холодильнике, не более одного года.

12.3.2 Контроль правильности с использованием добавки

Контроль правильности с использованием рабочих проб предполагает их разбавление, введение добавок, а также разбавление рабочей пробы с добавкой.

К подготовленным пробам предъявляют следующие требования:

- введение добавки или разбавление пробы осуществляют на начальной стадии пробоподготовки;

- количество вводимой добавки должно составлять 50%-150% от ранее установленного содержания определяемого красителя в пробе;

- разбавление не должно быть более 30% от ранее установленного содержания определяемого красителя в пробе;

- проба с добавкой или разбавленная проба по содержанию определяемого красителя не должна выходить за границы диапазона измерений.

В качестве добавок используют градуировочные или специально приготовленные растворы с известной массовой концентрацией определяемого красителя.

Как при введении добавки, так и при разбавлении пробы не должно происходить существенного изменения матрицы исходной пробы.

Проводят измерение определяемого красителя в исходной пробе, пробе для контроля (в пробе с добавкой, разбавленной пробе, разбавленной пробе с добавкой) и вычисляют величину показателя правильности измерений:

- для пробы с добавкой по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии; (10)


- для разбавленной пробы по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии; (11)


- для разбавленной пробы с добавкой по формуле

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии; (12)


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - показатели правильности;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - измеренное содержание определяемого красителя в пробе для контроля, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - содержание определяемого красителя в исходной рабочей пробе, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - величина добавки определяемого красителя, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - содержание определяемого красителя в разбавленной пробе, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - величина добавки в разбавленной пробе с добавкой, мг/дмГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

n - коэффициент разбавления.

Нормативы правильности ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии вычисляют по формулам (13)-(15):

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (13)


ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (14)


ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, (15)


где ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - вычисленный норматив правильности.

Если ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, где К - установленный норматив показателя правильности, то норматив правильности результатов признают удовлетворительной.

Если ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, то выполняют повторный контроль показателя правильности с использованием той же или однотипной рабочей пробы и соответствующие вычисления.

При повторном превышении норматива правильности анализируют причины ошибок и принимают меры по их устранению.

Приложение А (справочное). Типичная хроматограмма смеси синтетических красителей

Приложение А
(справочное)


ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии


Рисунок А.1 - Типичная хроматограмма смеси синтетических красителей


УДК 663.2/.8.051:543.544.5:006.354

МКС

67.160.10

67.160.20

67.220.20

71.040.40

Ключевые слова: синтетические красители, алкогольная продукция, безалкогольная продукция, соковая продукция, соки, продукты переработки, фрукты, овощи, ягоды, вкусоароматические добавки, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии




Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2019

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Название документа: ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Номер документа: 33406-2015

Вид документа: ГОСТ

Принявший орган: Росстандарт

Статус: Действующий

Опубликован: Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2019 год
Дата принятия: 01 сентября 2016

Дата начала действия: 01 июля 2017
Дата редакции: 01 марта 2019
ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате или
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах