ГОСТ ISO 20838-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Полимеразная цепная реакция для обнаружения патогенных пищевых микроорганизмов. Требования к амплификации и обнаружению для качественного анализа

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens. Requirements for amplification and detection for qualitative methods

МКС 07.100.30

Дата введения 2017-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием "Казахстанский институт стандартизации и сертификации" и Техническим комитетом по стандартизации ТК 60 "Экологически чистая продукция" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства по инвестициям и развитию Республики Казахстана

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 октября 2014 г. N 71-П)

За принятие стандарта проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 августа 2016 г. N 956-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 20838-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 20838:2006(Е)* "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция для обнаружения патогенных пищевых микроорганизмов. Требования к амплификации и обнаружению для качественного анализа" ("Microbiology of food and animal feeding stuffs - Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens - Requirements for amplification and detection for qualitative methods", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт ISO 20838 подготовлен Техническим комитетом CEN/TC 275 Европейского комитета по стандартизации (CEN) "Пищевой анализ - Горизонтальные методы", в сотрудничестве с Техническим комитетом ISO/TC 34 "Продукты питания", Подкомитетом SC 9 "Микробиология" в соответствии с Соглашением по техническому сотрудничеству между ISO и CEN (Венское соглашение).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного международного стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Введение

Амплификация и обнаружение целевых последовательностей нуклеиновых кислот выполняется с целью определения целевых последовательностей нуклеиновых кислот, которые присутствуют или не присутствуют в пробе. Это определение относится к соответствующим средствам контроля для обнаружения используемого аналитического метода и испытательной проанализированной пробы.

Настоящий стандарт описывает процедуры, используемые для обнаружения пищевых микроорганизмов, в том числе патогенных микроорганизмов, путем анализа нуклеиновых кислот, выделенных из пищевых продуктов, кормов и проб окружающей среды, или из культур или клеточных суспензий, приготовленных из продуктов питания. Соответствующие процедуры по подготовке проб, культивированию микроорганизмов и добыче нуклеиновых кислот описаны в ISO 20837.

Настоящий стандарт фокусируется на PCR методах, основанных на амплификации. Из-за быстрого уровня технического прогресса в этой области рассматриваются и другие технологии амплификации и методы обнаружения.

Настоящий стандарт связан с серией стандартов и технических характеристик в соответствии с общим названием "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных - Полимеразная цепная реакция (PCR) для обнаружения патогенных пищевых микроорганизмов":

- Общие требования и определения (ISO 22174)

- Требования к подготовке проб для качественного обнаружения (ISO 20837)

- Функциональное испытание для термоциклеров (ISO/TS 20836)

- Требования к амплификации и обнаружению для качественного анализа (ISO 20838)

Международная организация по стандартизации (ISO) в соответствии с этим документом может использовать один или более патентов касательно технологии PCR.

ISO не занимает позиции относительно доказательств, законности и области применения настоящих патентных прав.

ISO проинформировали, что компании Applied Biosystems (Прикладные биосистемы), Roche Molecular Systems (Молекулярные системы Роше), Inc. и F. Hoffman-La Roche Ltd. (ТОО Хоффман Ла Роше) обладают патентными правами на технологии PCR. Компании уверили ISO, что они готовы вести переговоры о лицензиях на разумных и справедливых условиях с претендентами во всем мире. В связи с этим заявления обладателей таких патентов зарегистрированы в ISO. Информация может быть получена из:

Отдел лицензий

Applied Biosystems

850 Lincoln Centre Drive

Город Фостер, CA 94404,

США

и

Отдел лицензий

Roche Molecular Systems, Inc.

1145 Atlantic Avenue

Аламеда, CA 94501

США

Некоторые элементы настоящего документа могут являться объектом других патентных прав, кроме тех, которые указаны выше. ISO не несет ответственность за идентификацию какого-либо или всех подобных патентных прав.

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется для патогенов в пищевых продуктах или изолированных от пищевых продуктов и кормов матриц, но может быть применен и к другим матрицам, например, проб окружающей среды, или для обнаружения других микроорганизмов в процессе исследования и устанавливает качественные методы обнаружения пищевых патогенов с помощью полимеразной цепной реакции (PCR).

Настоящий стандарт устанавливает общие требования к специфической амплификации целевых нуклеотидных последовательностей и обнаружения и подтверждения идентичности амплифицированной нуклеотидной последовательности.

Рекомендации, минимальные требования и технические характеристики, описанные в настоящем стандарте, являются гарантией того, что сопоставимые результаты получены в разных лабораториях.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на межгосударственные стандарты* которые являются обязательными. Для датированных ссылок применяют только указанное издание. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).

_______________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.     

ISO 16140:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Protocol for the validation of alternative methods (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол проверки достоверности альтернативных методов)

ISO 22174:2005 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens - General requirements and definitions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (PCR) для обнаружения патогенных пищевых микроорганизмов. Общие требования и определения).

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ISO 22174.

     4 Сущность метода

Целью настоящего метода является качественный анализ, который состоит из скрининга и/или конкретного обнаружения целевых нуклеотидных последовательностей в исследуемых образцах. Специфика может быть в роду, видах или более низком таксономическом уровне.

Качественный результат должен четко демонстрировать наличие или отсутствие по сравнению с соответствующими методами контроля и в пределах обнаружения используемого аналитического метода и анализа проб.

Анализ состоит из:

a) амплификации PCR специфических целевых последовательностей;

b) детекции продуктов PCR;

c) подтверждения идентичности продукта PCR;

d) подтверждения стандартизированным микробиологическим методом исследования (например, международный стандарт).

     5 Реактивы

Используют аналитически чистые реактивы, подходящие для молекулярных биологических исследований. Рекомендуется брать аликвоты реакционных смесей, требуемых для метода PCR и хранить их при соответствующих условиях, например, при минус 20°C.

5.1 ДНК-полимеразы

Для PCR используют теплоустойчивые полимеразы (включая деятельность обратной транскриптазы). Это могут быть очищенный, природный фермент, или очищенные, генетически спроектированные рекомбинантные формы фермента.

Используют согласно инструкциям производителя.

Каждая ДНК-полимераза может требовать различных экспериментальных условий, например, буфер, температуру.

5.2 Обратная транскриптаза

Фермент используют для транскрипции РНК (рибонуклеиновая кислота) в комплементарной одноцепочной ДНК (кДНК), фермент должен усиливаться последующей PCR.

Фермент используют согласно инструкциям производителя.

5.3 Буфер реакции

Соответствующий буфер используют согласно инструкциям производителя ферментов. Материалы, используемые для подготовки буфера PCR, должны быть устойчивыми относительно условий хранения и переработки.

Используют согласно инструкциям производителя.

5.4 Дезоксирибонуклеозидтрифосфат (dNTp) для PCR

Растворы, содержащие молекулярные биологические классы dATP, dCTP, dGTP, dTTP и/или dUTP должны быть использованы по необходимости. Растворы не должны менять свойств во время хранения и при условиях PCR.

5.5 Праймеры

Праймеры должны быть выбраны на основе последовательности специально для обнаружения ДНК целевого микроорганизма.